高效液相色譜法檢查骨筋丸膠囊中非法添加的松香酸

(江蘇省泰州市藥品檢驗所，江蘇 泰州 225300)

為追求利益最大化，不法分子在某些貴重中藥材中非法添加其他成分以增重，如在血竭、沉香中添加松香酸。松香酸為天然松香樹脂的主要成分。有報道稱，銀屑敵膠囊因非法添加松香酸而造成患者視力下降、死亡等嚴(yán)重后果。骨筋丸膠囊是由乳香、沒藥、白芍、血竭等14味中藥組成，按法定標(biāo)準(zhǔn)[1]檢驗是符合規(guī)定的，但筆者用薄層色譜法初步斷定骨筋丸膠囊可能添加了松香酸，為此建立了用高效液相色譜(HPLC)法檢查骨筋丸膠囊中非法添加的松香酸的方法，并通過二極管陣列檢測器(DAD)加以確證，為基層打假提供了有效的檢驗方法。

1 儀器與試藥

Waters 2695/2996/Empower高效液相色譜系統(tǒng)。松香酸對照試劑(Flvka Analytical，批號為1384624);骨筋丸膠囊(湖南某藥廠，批號為0902301);乙腈(色譜純)，水(超純水)，其他試劑(分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜法

取供試品2 g，加石油醚(60～90℃)20 mL，振搖10 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液。取松香酸對照試劑，用石油醚(60～90℃)溶解，制成0.5 g/L的對照試劑溶液。按處方量制備未添加松香酸的陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制備成陰性對照品溶液。分別取供試品溶液、對照試劑溶液和陰性樣品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯－冰乙酸(9∶1∶0.1)為展開劑展開，取出晾干，置紫外燈(254 nm)下檢視。結(jié)果在供試品、對照試劑、供試品與對照試劑溶液混合點樣的色譜圖相應(yīng)位置上，均檢出形狀及顏色相近的熒光斑點，并且供試品與對照試劑溶液混合點樣的色譜圖中斑點單一、緊密，在陰性對照品溶液色譜的相應(yīng)位置上則沒有檢出熒光斑點(圖1)。

圖1 薄層色譜圖

2.2 HPLC 法

2.2.1 色譜條件

色譜柱:SymmetryC18柱(150mm×4.6mm，5 μm);流動相:乙腈－0.1%甲酸(75 ∶25);檢測波長:241nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:25℃。

2.2.2 溶液制備

取供試品2 g，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，過濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液。精密稱取松香酸對照試劑10 mg，呈100 mL量瓶中，加甲醇約40 mL，超聲溶解，放至室溫，加甲醇至刻度，作為松香酸對照試劑溶液。按處方量制備未添加松香酸的陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制備成陰性樣品溶液。

2.2.3 檢測結(jié)果

分別吸取供試品溶液、對照試劑溶液、陰性對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄HPLC色譜圖及DAD光譜圖。色圖譜見圖2，二極管陣列光譜圖見圖3。圖2表明，供試品溶液色譜圖在與對照試劑溶液色譜圖保留時間相應(yīng)位置上出現(xiàn)色譜峰，陰性樣品無干擾。圖3表明，供試品溶液和對照試劑溶液的HPLC－DAD圖譜一致。利用計算機檢測樣品峰純度，結(jié)果在規(guī)定閾值范圍內(nèi)。

圖2 高效液相色譜圖

圖3 DAD光譜圖

2.2.4 精密度試驗

精密吸取松香酸對照試劑溶液10 μL，連續(xù)進樣6次。結(jié)果松香酸對照試劑色譜峰保留時間分別為 14.988，14.985，14.995，14.886，14.945，14.946 min，RSD 為 0.3%，表明進樣精密度良好。

2.2.5 樣品中添加對照試劑測定

精密吸取樣品中添加對照試劑溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，并與供試品溶液色譜圖比較。結(jié)果峰面積明顯增大，且保留時間變化在變異范圍內(nèi)。

3 討論

經(jīng)過薄層色譜圖、液相色譜圖以及光譜圖的驗證，檢查出骨筋丸膠囊確實非法添加了松香酸。

采用薄層色譜法發(fā)現(xiàn)，樣品在與松香酸對照試劑相應(yīng)的位置上有相同顏色的熒光斑點，初步確定樣品中含有松香酸。再通過二極管陣列檢測器對供試品溶液色譜圖中與松香酸對照試劑溶液保留時間基本一致的色譜峰進行紫外光區(qū)的光譜檢測發(fā)現(xiàn)，兩者的光譜行為一致，進一步確定樣品中含有松香酸。

[1]YBZ13882004，國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)(試行)[S].