二陳湯配方顆粒質量標準研究

(江陰天江藥業有限公司，江蘇 江陰 214434)

二陳湯出自《太平惠民和劑局方》，由陳皮、半夏(制)、茯苓、甘草、生姜等中藥組方，具有除濕化痰、理氣和胃之功效，適用于咳嗽痰多、胸膈痞悶、惡心嘔吐等癥[1]。二陳湯配方顆粒是由上述藥味經現代制劑技術制成的顆粒劑。為有效控制該制劑的內在質量，確保臨床用藥安全有效，筆者應用薄層色譜(TLC)法建立了陳皮、甘草的鑒別方法，采用高效液相色譜(HPLC)法對陳皮中主要有效成分橙皮苷進行了含量測定[2]。現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國Agilent公司);AT－330型柱溫箱(天津奧特賽恩斯科學儀器有限公司);超聲清洗機(無錫超聲電子設備廠);十萬分之一電子天平(瑞士梅特勒公司)。橙皮苷對照品(批號為0721－200010)、甘草酸銨對照品(批號為0731－200205)均購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用;二陳湯配方顆粒(批號分別為200811，200901，200904，江陰天江藥業有限公司);硅膠G(青島海洋化工廠);甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

陳皮[2]:取本品3 g，研成細粉，加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至約2 mL，作為供試品溶液。取不含陳皮的陰性樣品3 g，同法制成陰性對照品溶液。另取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各3 μL，分別點于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲醇－水(100∶17∶13)為展開劑，展開，展距約3 cm，取出，晾干;再以甲苯－乙酸乙酯－甲酸－水(20∶10∶1∶1)的上層溶液為展開劑，展開，展距約8 cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，而陰性對照品溶液則無此斑點(圖1 A)。

甘草[2]:取本品2 g，加甲醇30 mL，超聲處理1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40 mL使溶解，用正丁醇振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗滌3次，每次20 mL，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。再取不含甘草的陰性樣品2 g，同法制成陰性對照品溶液。另取甘草對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述4種溶液各4 μL，分別點于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水(15∶1∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液及對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，而陰性對照品溶液則無此斑點(圖1 B)。

圖1 薄層色譜圖

2.2 橙皮苷含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱:Lichrospher C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－醋酸－水(35∶4∶61)[2];檢測波長:283 nm;柱溫:30℃;進樣量:10 μL。理論板數按橙皮苷峰計算應不低于2 000。

2.2.2 溶液制備

取橙皮苷對照品約10.70 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為0.107 0 g/L的對照品溶液。取本品約1 g，精密稱定，精密加甲醇50 mL，稱定質量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，離心，即得供試品溶液。取缺陳皮的陰性樣品約1 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

干擾試驗:照上述色譜條件，分別取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照品溶液各5 μL，分別注入色譜儀。供試品溶液色譜圖中，在與對照品溶液色譜圖相應位置上顯示相同保留時間的色譜峰，而陰性對照品溶液在此保留時間處無干擾，見圖3。

線性關系考察:分別精密吸取橙皮苷對照品溶液(0.107 0 g/L)2，4，6，8 mL，置 10 mL 量瓶中， 加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成質量濃度分別為 0.021 4，0.042 8，0.064 2，0.085 6 g/L 系列對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以峰面積積分值(Y)為縱坐標、橙皮苷質量濃度(X)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y=21 503.99 X－6.84，r=0.999 87。結果表明，橙皮苷進樣量在 0.214 ～1.070 μg 范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

圖3 高效液相色譜圖

精密度試驗:精密吸取橙皮苷對照品溶液(0.107 0 g/L)10 μL，按上述色譜條件重復進樣5次，測定橙皮苷峰面積積分值。結果的RSD為0.40%(n=5)，表明精密度良好。

重現性試驗:取同一批(批號為200811)樣品，依法制備供試品溶液并測定。結果平均含量為4.25 mg/g，RSD為0.89%(n=5)。

穩定性試驗:同一供試品(批號為 200811)溶液，分別于0，2，4，6，8 h時分別進樣10 μL，測定橙皮苷的峰面積。結果的 RSD為1.02%(n=5)表明供試品溶液在8 h內穩定。

加樣回收試驗:取橙皮苷對照品約10.15 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(1.015 g/L)，備用。取已知含量的樣品(批號200811)0.5 g，精密稱定，分別加入上述橙皮苷對照品溶液 0.8，1.0，1.2 mL，各 2 份，按供試品溶液的制備方法制備加樣回收供試品溶液，分別進樣5 μL，測定。結果見表1。

表1 橙皮苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.2.4 樣品含量測定

取二陳湯配方顆粒約1.0 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備溶液并進樣5 μL，測定、計算含量。結果批號為200811，200901，200904 的樣品中橙皮苷含量分別為 4.24，4.32，4.40 mg/g。

3 討論

二陳湯配方顆粒中陳皮、甘草的定性鑒別采用TLC法，并分別與各自的陰性對照品溶液進行對照，結果沒有干擾、斑點清晰，專屬性強、重現性好，收到良好的效果。本試驗中采用2005年版《中國藥典(一部)》陳皮含量測定項下的流動相，分離效果好。

文中建立的定性、定量方法，可有效控制二陳湯配方顆粒的質量。另外，二陳湯配方顆粒制備工藝先進，服用、攜帶方便，可為臨床應用提供新的用藥方式。

[1]余子川，劉焱文，方 穎，等.二陳湯配方顆粒與傳統煎劑的化學成分比較[J].中國中醫藥信息雜志，2003，9(10):42.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:59，132.