HBsAg及AFP在肝細胞癌組織中的表達及其相關性

蘇士珂，潘 雷，孟凡迎，代學強，周 旭*

(1山東大學附屬省立醫院，濟南250021;2齊河縣人民醫院)

肝細胞癌(HCC)是世界上最常見的惡性腫瘤之一，且其發病率在許多國家呈上升趨勢。病因學研究顯示，約53%的HCC與HBV感染有關，HBV感染是原發性HCC的重要誘因，但具體致癌機制仍不清楚［1］。甲胎蛋白(AFP)是HCC的重要標志物，在其早期診斷及術后復發診斷方面起重要作用。但血清HBsAg和AFP水平難以準確反映HCC組織狀態，易受多種因素的影響。2006年6月～2009年6月，我們測定了40例HCC患者癌組織中HBsAg及AFP的表達情況，并對兩者相關性進行了分析。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 同期外科手術切除的HCC癌組織標本40份(均附癌旁肝組織)，患者中男28例，女12例;年齡17～69歲，平均41.5歲。根據Edmonton［2］分級標準Ⅰ級3例，Ⅱ級13例，Ⅲ級19例，Ⅳ級5例;癌旁肝組織均有肝硬化或不同程度纖維化。設正常肝組織6份為對照。

1.2 癌組織中HBsAg及AFP表達檢測 標本均經10%中性甲醛固定，常規石蠟包埋，連續切片(厚4 μm)，分別行HE和免疫組織化學染色(SP法)，染色前采用高壓法進行抗原修復。結果判定標準:HBsAg及AFP免疫組化染色以細胞質或細胞膜出現棕黃色顆粒為陽性，其中陽性細胞數＜5%為陰性、6%～25%為+、26%～75%為++、＞76%為+++［3］。

1.3 統計學方法 采用SPSS13.0軟件進行統計學處理。計數資料比較采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 HBsAg及AFP表達 正常肝組織中HBsAg及AFP表達均為陰性。HCC和癌旁肝組織中HBsAg及AFP表達陽性細胞形態有全漿型、大包涵體型、小包涵體型、碎點狀及膜型，其中癌旁肝組織陽性細胞形態以大包涵體和全漿型多見，表達強;HCC細胞內以小包涵體型、碎點狀及膜型為主，且表達弱［4］。HCC和癌旁肝組織HBsAg表達陽性率分別為70%(28/40)、90%(36/40)，兩者比較P＜0.05;其中表達陰性者分別為12、4例，表達為+者分別為7、9例，表達為++者分別為11、15例，表達為+++者分別為10、12例。HCC和癌旁肝組織AFP表達陽性率分別為87.5%(28/40)、82.5%(29/40)，兩者比較P＞0.05;其中表達陰性者分別為12、11例，表達為+者分別為8、6例，表達為++者分別為12、13例，表達為+++者分別為8、10例。

2.2 HBsAg、AFP表達的關系 HCC中HBsAg陽性者和陰性者AFP表達陽性率分別為85.73%(24/28)、66.7%(8/12)，兩者比較P＜0.05;癌旁肝組織中HBsAg陽性和陰性者AFP表達陽性率分別為68.9%(20/29)、54.5%(6/11)，兩者比較P＜0.05。

3 討論

流行病學資料顯示，中國HBV慢性感染男性人群中，至少40%死于HCC，HBV感染與HCC的發生密切相關。廖嫦英、黃水仙等報道原發性肝癌患者HBsAg陽性率為90.2%，比江蘇啟東縣調查結果(94%)略低，比上海調查結果(88.9%)稍高，但三者基本接近，進一步支持HBV與HCC之間存在密切關系。據報道HCC發病率以沿海地區及東南一帶較高，可能與上述地區高HBV感染率有關。據統計，全球約半數以上HCC患者發病與HBV感染有關，而國內報道肝癌周圍肝組織HBsAg陽性率總體水平為80.2%［5］，提示 HBV感染可能參與了HCC的發生、發展。

本研究顯示，正常肝組織中HBsAg及AFP表達均為陰性;HCC和癌旁肝組織HBsAg表達陽性率均較高，其中后者顯著高于前者。可能機制:HBV可將其自身DNA整合至宿主肝細胞基因組中，從而在肝細胞癌變中起關鍵作用［6］;HBV感染者肝細胞中HBV-DNA可產生HBsAg，其中部分HBV-DNA被整合至宿主肝細胞基因組中，致使肝癌組織中亦能檢出HBsAg，但整合的后復制效率可能受抑，致使其檢出率降低。近年來研究表明，血清HBeAb陽性并非意味組織學轉向良好，部分患者體內HBV仍在復制，而且HBeAb陽性者HBV整合機會較HBeAb陰性者大;HBcAb陽性提示HBV復制活躍，使HBVDNA整合到宿主肝細胞基因中的機率升高，因此HCC形成的可能性增加。

AFP是目前公認的診斷HCC的重要指標之一，原發性肝癌患者血清AFP水平與HBV感染有密切關系。此與HBV可通過與肝癌細胞整合，而使肝癌細胞合成AFP的能力增強有關。本研究顯示，HCC及癌旁肝組織AFP表達陽性率亦較高(且大部分AFP陽性細胞呈彌漫性分布)，其中前者顯著高于后者。提示AFP在HCC及癌旁肝組織中的表達敏感度高，其合成、加工和分泌的主要部位在胞質;HCC細胞及癌旁肝細胞合成AFP后釋放入血［7］，血清AFP水平可間接反映HCC細胞合成和加工AFP的能力。此外，本研究顯示，HCC及癌旁肝組織HBsAg陽性細胞內肝癌標志物 AFP均顯著高于HBsAg陰性細胞。提示HBV可能通過免疫反應引起肝組織損傷［8］，致使肝細胞非典型增生、HCC發生，并最終激發AFP基因重新開放，合成和分泌AFP。

綜上所述，HBV感染可能通過誘發肝細胞產生AFP參與HCC發病，具體機制有待進一步研究。

［1］Michielsen PP，Francque SM，Dongen JL.Viral hepatitis and hepatocellular carcinoma［J］.Wor J Sur Onco，2005，3(27):1477-1494.

［2］Edmonton HA.Tumors of the liver and interhepaticbile duct［M］.Washington:Armed Forces Institute of Pathology，1958:63-64.

［3］洪豐，張保玉，王萬忠，等.增殖細胞核抗原和c-erbB-2癌基因蛋白在乙肝病毒感染、慢性肝病中表達的意義［J］.臨床肝膽病雜志，1998，14(1):27.

［4］董菁，成軍，楊倩.乙型肝炎病毒新開放讀碼框架的確定及其意義［J］.世界華人消化雜志，2004，12(4):757-762.

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［6］Kuang SY，Jackson PE，Wang JB，et al.Specificmutations of hepatitis B virus in plasma predict liver cancer development［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2004，101(10):3575-3580.

［7］韓風，邱大鵬，陳偉瑜，等.AFP-L3含量測定在肝癌診治中的意義［J］.山東醫藥，2010，50(24):5-6.

［8］周旭，易繼林，郭悅青，等.HBV感染與hTERT基因表達在肝細胞癌組織中的相關性究［J］.腫瘤防治雜志，2004，12(11):1243-1246.