RP-HPLC法測定不同采收期廣東紫珠、大葉紫珠中木犀草素的含量Δ

周日寶，劉笑蓉，唐麗君，劉佳勝（1.湖南中醫藥大學藥學院，長沙市 41008；.湖南中醫藥大學008級研究生班，長沙市 41008）

廣東紫珠（Callicarpa kwangtungensis Chun）是中成藥抗宮炎片的主要原料[1]。抗宮炎片具有止血散瘀、解毒消腫的功能，臨床用于治療宮頸炎、宮頸糜爛、盆腔炎、附件炎等婦科疾病，療效顯著。近期臨床報道，抗宮炎片的臨床應用范圍不斷拓寬，在治療急慢性咽炎、慢性前列腺炎、慢性痢疾與結腸炎等疾病方面也有了新的應用，療效確切[2]。隨著抗宮炎片生產規模的不斷擴大，對廣東紫珠的需求也隨著激增，野生資源已遠遠不能滿足生產的需求，原料藥材供不應求，故市場上還大量使用了大葉紫珠（C.macrophylla Vahl.）替代廣東紫珠作為紫珠原料藥材。

紫珠中含有黃酮、萜類及脂肪酸、氨基酸、甾醇、揮發油、無機元素等其他成分，主要有效成分為黃酮和萜類[3]。木犀草素及其苷是紫珠中一類含量較多的有效成分[4]，其藥理活性研究已有報道[5]，但未見紫珠中木犀草素的含量測定報道。故筆者選擇木犀草素作為指標成分，采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測定上述2種紫珠藥材中木犀草素的含量，研究不同采收期木犀草素動態變化規律，為這2種藥材的半野生人工撫育及人工栽培提供科學依據，以便擴大抗宮炎片的藥用資源，滿足市場需求。

1 儀器與試藥

HPLC儀，包括HT-230A柱溫箱、G1314B VWD檢測器、G1329A自動進樣器、Agilent 1200工作站（美國Agilent公司）；數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；FA2004電子天平（上海恒平科學儀器有限公司）；SHB-Ⅲ循環式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）；101-3AB型電熱鼓風干燥箱、FW135型中草藥粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；RE-52A旋轉蒸發器、KQ-C型玻璃儀器氣流烘干器（鞏義市英峪予華儀器廠）。

乙醇為分析純，甲醇、乙腈、磷酸為色譜純；木犀草素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111520-200504）；藥材樣品采自湖南省會同縣紫珠規范化種植研究試驗基地，經湖南中醫藥大學潘清平教授鑒定系馬鞭草科紫珠屬廣東紫珠（C.kwangtungensis Chun）、大葉紫珠（C.macrophylla Vahl.），從2009年10月12日起至2009年12月21日止，每隔10天采集植株，分別曬干，取植株的莖作藥材樣品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Alltech C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇-0.3%磷酸水（47∶53）；檢測波長：352 nm；流速：1 mL·min-1；柱溫：30℃；進樣量：10μL。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.木犀草素對照品；B.大葉紫珠提取液；1.木犀草素Fig 1 HPLC chromatogramsA.luteolin control；B.C.macrophylla extract；1.luteolin

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取木犀草素對照品適量，加甲醇制成30μg·mL-1的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

稱取藥材粉末（過60目）約3 g，加95%乙醇50 mL，80℃超聲波（功率：350 W，頻率：40 kHz）提取3次，每次1 h，合并濾液，濾過，減壓回收乙醇，殘渣加甲醇溶解并定容至25 mL，搖勻，3000 r·min-1離心5 min，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.4 線性關系考察

取對照品溶液（30 μg·mL-1），分別進樣0.5、1、4、5、8、10μL，記錄峰面積。以木犀草素進樣量（X，μg）為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標，制備標準曲線，得回歸方程為Y＝4017.7X－2.9473（r＝0.9999，n＝6）。結果表明，木犀草素進樣量在0.015～0.300μg范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

取對照品溶液，重復進樣5次，每次10μL，測定木犀草素峰面積。結果，RSD＝1.32%（n＝5），表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取同一供試品溶液，于制備后放置0、2、4、6、8、12、24 h，分別精密吸取10μL注入液相色譜儀，測定木犀草素峰面積。結果，RSD＝1.21%（n＝7），表明供試品溶液在24 h內穩定性較好。

2.7 重復性試驗

取同一批樣品適量，按“2.3”項下方法平行制備6份供試品溶液，分別精密吸取10μL注入液相色譜儀，測定。結果，木犀草素的平均含量為70.01 μg·g-1，RSD＝1.10%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

稱取已知含量的廣東紫珠（12月11日采集）藥材粉末約2.5 g，共6份，精密加入木犀草素對照品溶液6 mL，攪拌均勻，揮干甲醇，余下按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述方法測定樣品含量，計算加樣回收率，結果見表1。

2.9 樣品含量測定

取各批樣品適量，采用上述色譜條件按外標法以峰面積計算木犀草素含量[1]，結果見表2。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）

表2 不同采收期廣東紫珠、大葉紫珠中木犀草素的含量Tab 2 Contents of luteolin in C.kwangtungensis and C.macrophylla in different harvesting time

3 討論

試驗中采用95%乙醇、50%乙醇、水作為提取溶劑進行比較。結果表明，用95%乙醇作為溶劑的提取效果更好。再采用95%乙醇作為提取溶劑分別進行回流提取與超聲提取的比較。結果顯示，超聲提取的含量較高。

從表2中可以得出，大葉紫珠、廣東紫珠隨著生育期的延長，木犀草素含量逐漸增加，生長末期植株中木犀草素的含量達到最高。該結果可為大葉紫珠和廣東紫珠野生改人工栽培的生產實踐中確定藥材最佳采收期、確保藥材內在質量提供一定的試驗依據。

本試驗通過比較8個不同采收期2種紫珠藥材中木犀草素的含量結果可知，大葉紫珠中木犀草素的含量普遍高于廣東紫珠，該結果可為進一步探討大葉紫珠與廣東紫珠共同作為抗宮炎片的原料藥材提供一定的科學支撐。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：756、附錄36.

[2]馬延升，朱蘭翠.抗宮炎片臨床進展[J].中國現代醫學雜志，2004，14（10）：69.

[3]王振華，杜 勤.紫珠屬化學成分研究及其臨床應用[J].廣東藥學，1998，8（3）：5.

[4]王祝年，韓 壯，崔海濱，等.裸花紫珠的化學成分[J].熱帶亞熱帶植物學報，2007，15（4）：359.

[5]李星霞，郭 澄.木犀草素的藥理活性研究[J].中國藥房，2007，18（18）：1421.