HPLC法測定歐亞列當中松果菊苷的含量Δ

2011-05-23 05:41:24秦冬梅胡利萍譚勇張躍新石河子大學藥學院石河子市8300新疆醫科大學第一附屬醫院感染科烏魯木齊市830054

中國藥房 2011年23期

秦冬梅，胡利萍，譚勇，張躍新（.石河子大學藥學院，石河子市 8300；.新疆醫科大學第一附屬醫院感染科，烏魯木齊市 830054）

列當科（Orobanchaceae）列當屬（Orobanche）為列當科中最大的一屬，全世界約有100多個品種[1，2]，我國有25種，其中新疆有18種。本屬植物廣泛分布于我國東北、內蒙古、新疆、陜西、寧夏、西藏等北方地區，寄生于蒿類、瓜類、谷類等植物的根上。其中，歐亞列當（Orobanche cumana Wallr.）由于具有補腎助陽、強筋健骨、延年益壽之功效，在我國北方地區已作藥用[3～5]，用于治療腰膝冷痛、陽瘺、遺精；蒙醫還用于治療碳疽，因此民間常將其作為肉蓯蓉的代用品。劉東春等[6]通過體內與體外實驗發現，歐亞列當提取物對小鼠肝臟脂質過氧化物的生成有明顯的抑制作用，并對促進雄性幼鼠附性器官發育具有雄性激素樣作用。歐亞列當的主要化學成分為苯乙醇苷類、環烯醚萜類、木質素類、D-甘露醇、甜菜堿和糖類等[7]，其中苯乙醇苷類（phenylethanoid glycoside，PhG）為列當屬主要有效成分之一。松果菊苷（echinacoside）為苯乙醇苷類化合物，具抗氧化、神經保護、改善學習記憶、免疫調節等作用。目前尚無關于歐亞列當中松果菊苷的提取及含量測定方法的研究報道[8]，故本試驗以歐亞列當中松果菊苷為定量指標，建立了以高效色譜（HPLC）法測定其含量的方法。

1 儀器與試藥

LC-20A型HPLC儀（日本島津公司）；BP211D型十萬分之一分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；旋轉蒸發器（上海申生科技有限公司）；HH-S精密恒溫水浴鍋（江蘇金壇市醫療儀器廠）；DHG-9240型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海齊欣科學儀器有限公司）。

試驗用植物采摘于新疆石河子南山，由石河子大學藥學院實驗中心陳玉懷副教授鑒定為真品；松果菊苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111670-200503，供含量測定用）；甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸水，醋酸、乙醇為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：YMC-Pack ODS-A C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈-甲醇-1%醋酸（10∶17∶73）；流速：0.8 mL·min-1；檢測波長：334 nm；柱溫：室溫；進樣量：10μL。以外標法定量。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液精密稱取松果菊苷對照品適量，用甲醇溶解制成含松果菊苷0.1300 mg·mL-1的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液取本品，研細（過6號篩），精密稱取適量（約1 g），置于棕色具塞錐形瓶中，加甲醇25 mL，密塞，浸泡0.5 h后超聲（功率：300 W，頻率：20 kHz）提取40 min，放冷至室溫，過微孔濾膜（0.45μm），即得。

2.3 系統適用性試驗

取對照品溶液、供試品溶液各適量，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進樣。結果，松果菊苷峰與其他成分峰分離良好，理論板數以松果菊苷峰計算應＞5000。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；1.松果菊苷Fig 1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；1.echinacoside

2.4 標準曲線的制備

精密吸取松果菊苷對照品溶液，用甲醇溶液配成濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8、1.0 mg·mL-1的溶液，在上述色譜條件下進樣。以峰面積積分值（Y）對進樣濃度（X）進行線性回歸，制備標準曲線，得回歸方程為Y＝3.97×107X+1.56×105（r＝0.9995，n＝8）。結果表明，松果菊苷進樣濃度在0.1～1.0 mg·mL-1范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取松果菊苷對照品溶液10μL，在上述色譜條件下連續進樣5次。結果，松果菊苷峰面積的RSD＝0.87%（n＝5），表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0、2、4、6、8、10 h進樣，測定峰面積。結果，RSD＝0.25%（n＝6），表明供試品溶液在10 h內穩定性良好。

2.7 重復性試驗

取同一批樣品，共6份，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，測定峰面積，并計算松果菊苷的含量。結果，松果菊苷的平均含量為0.223%，RSD＝1.01%（n＝6），表明方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

分別稱取已知含量的樣品適量，共9份，精密加入松果菊苷對照品適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述方法測定松果菊苷的含量，計算加樣回收率，結果見表1。

2.9 樣品含量測定

取3批樣品，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述方法測定，以外標法計算樣品中松果菊苷的含量。結果，3批樣品（批號：100306、100406、100506）中松果菊苷的含量分別為0.222%、0.221%、0.224%，RSD分別為0.54%、0.60%、0.73%（n＝3）。