HPLC法測定歐亞列當中松果菊苷的含量Δ

2011-05-23 05:41:24秦冬梅胡利萍譚勇張躍新石河子大學藥學院石河子市8300新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院感染科烏魯木齊市830054

中國藥房 2011年23期

秦冬梅，胡利萍，譚勇，張躍新（.石河子大學藥學院，石河子市 8300；.新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院感染科，烏魯木齊市 830054）

列當科（Orobanchaceae）列當屬（Orobanche）為列當科中最大的一屬，全世界約有100多個品種[1，2]，我國有25種，其中新疆有18種。本屬植物廣泛分布于我國東北、內(nèi)蒙古、新疆、陜西、寧夏、西藏等北方地區(qū)，寄生于蒿類、瓜類、谷類等植物的根上。其中，歐亞列當（Orobanche cumana Wallr.）由于具有補腎助陽、強筋健骨、延年益壽之功效，在我國北方地區(qū)已作藥用[3～5]，用于治療腰膝冷痛、陽瘺、遺精；蒙醫(yī)還用于治療碳疽，因此民間常將其作為肉蓯蓉的代用品。劉東春等[6]通過體內(nèi)與體外實驗發(fā)現(xiàn)，歐亞列當提取物對小鼠肝臟脂質(zhì)過氧化物的生成有明顯的抑制作用，并對促進雄性幼鼠附性器官發(fā)育具有雄性激素樣作用。歐亞列當?shù)闹饕瘜W成分為苯乙醇苷類、環(huán)烯醚萜類、木質(zhì)素類、D-甘露醇、甜菜堿和糖類等[7]，其中苯乙醇苷類（phenylethanoid glycoside，PhG）為列當屬主要有效成分之一。松果菊苷（echinacoside）為苯乙醇苷類化合物，具抗氧化、神經(jīng)保護、改善學習記憶、免疫調(diào)節(jié)等作用。目前尚無關(guān)于歐亞列當中松果菊苷的提取及含量測定方法的研究報道[8]，故本試驗以歐亞列當中松果菊苷為定量指標，建立了以高效色譜（HPLC）法測定其含量的方法。

1 儀器與試藥

LC-20A型HPLC儀（日本島津公司）；BP211D型十萬分之一分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海申生科技有限公司）；HH-S精密恒溫水浴鍋（江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠）；DHG-9240型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海齊欣科學儀器有限公司）。

試驗用植物采摘于新疆石河子南山，由石河子大學藥學院實驗中心陳玉懷副教授鑒定為真品；松果菊苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111670-200503，供含量測定用）；甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸水，醋酸、乙醇為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：YMC-Pack ODS-A C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈-甲醇-1%醋酸（10∶17∶73）；流速：0.8 mL·min-1；檢測波長：334 nm；柱溫：室溫；進樣量：10μL。以外標法定量。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液精密稱取松果菊苷對照品適量，用甲醇溶解制成含松果菊苷0.1300 mg·mL-1的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液取本品，研細（過6號篩），精密稱取適量（約1 g），置于棕色具塞錐形瓶中，加甲醇25 mL，密塞，浸泡0.5 h后超聲（功率：300 W，頻率：20 kHz）提取40 min，放冷至室溫，過微孔濾膜（0.45μm），即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

取對照品溶液、供試品溶液各適量，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進樣。結(jié)果，松果菊苷峰與其他成分峰分離良好，理論板數(shù)以松果菊苷峰計算應(yīng)＞5000。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；1.松果菊苷Fig 1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；1.echinacoside

2.4 標準曲線的制備

精密吸取松果菊苷對照品溶液，用甲醇溶液配成濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.8、1.0 mg·mL-1的溶液，在上述色譜條件下進樣。以峰面積積分值（Y）對進樣濃度（X）進行線性回歸，制備標準曲線，得回歸方程為Y＝3.97×107X+1.56×105（r＝0.9995，n＝8）。結(jié)果表明，松果菊苷進樣濃度在0.1～1.0 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

精密吸取松果菊苷對照品溶液10μL，在上述色譜條件下連續(xù)進樣5次。結(jié)果，松果菊苷峰面積的RSD＝0.87%（n＝5），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0、2、4、6、8、10 h進樣，測定峰面積。結(jié)果，RSD＝0.25%（n＝6），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復性試驗

取同一批樣品，共6份，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，測定峰面積，并計算松果菊苷的含量。結(jié)果，松果菊苷的平均含量為0.223%，RSD＝1.01%（n＝6），表明方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

分別稱取已知含量的樣品適量，共9份，精密加入松果菊苷對照品適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述方法測定松果菊苷的含量，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品含量測定

取3批樣品，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述方法測定，以外標法計算樣品中松果菊苷的含量。結(jié)果，3批樣品（批號：100306、100406、100506）中松果菊苷的含量分別為0.222%、0.221%、0.224%，RSD分別為0.54%、0.60%、0.73%（n＝3）。