結直腸癌組織中E-鈣黏素和TGF-β的表達變化及意義

李崢嶸，姜慧峰

(1商丘市第三人民醫院，河南商丘476000:2濰坊醫學院附屬萊陽中心醫院)

結直腸癌的發生發展、浸潤及轉移過程中，需要細胞因子、體內微環境等多種因素的參與。E-鈣黏素屬于Ⅰ型鈣黏素，主要參與細胞間的連接，維持細胞間黏附的穩定性和細胞的極性，與腫瘤細胞的浸潤和轉移有關。E-鈣黏素的減少或丟失是上皮—間質轉化(EMT)最重要的標志性變化，其表達調或抑制會開啟EMT，導致腫瘤的浸潤及轉移［1］。轉化生長因子β(TGF-β)是EMT中重要的誘導因素之一。2009年5月～2010年2月，我們對結直腸癌組織中E-鈣黏素和TGF-β的表達變化進行觀察，現報告如下并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院臨床病理資料完整的結直腸癌(均為腺癌)組織蠟塊56例。56例患者中，男33例，女23例;年齡40～81歲，平均65.77歲。高分化23例，中分化22例，低分化11例;臨床分期:T4期18例，T3期28例，T2期10例。有癌細胞浸潤44例，無癌細胞浸潤12例;有淋巴結轉移30例，無淋巴結轉移26例。56例均為行手術治療，術前均未經放化療，均經病理確診。另取癌旁正常組織為對照。

1.2 E-鈣黏素、TGF-β 檢測方法 抗 E-鈣黏素鼠抗人單克隆抗體(4A2C7)、抗TGF-β鼠抗人單克隆抗體(TGFβ17)和 PV-9000二步法試劑盒。所有組織均經中性甲醛固定，常規脫水，石蠟包埋，4 μm厚切片，HE染色。采用免疫組化(PV-9000兩步法)染色，按試劑盒說明書操作。用已知陽性切片作為陽性對照，以PBS替代一抗作為陰性對照。

細胞質有棕黃色顆粒者為E-鈣黏素、TGF-β陽性細胞，按Shimizu等方法［2］根據著色深淺及面積評分判定結果:≥3分為陽性表達，其中3～4分為低表達(+)，5～6分為中表達(++)，≥7分為高表達(+++)。

1.3 統計學方法 數的比較采用Ridit分析和χ2檢驗，相關性研究采用Spearman等級相關分析法。α =0.05。

2 結果

2.1 結直腸癌組織與癌旁正常組織 E-鈣黏素、TGF-β表達情況 結直腸癌組織中E-鈣黏素、TGF-β 陽性表達率分別為 82.14%(46/56)，42.86(42/56)，癌旁正常組織中分別為100%和75.00%(P均＜0.05)。

2.2 結直腸癌組織中E-鈣黏素蛋白、TGF-β的表達與其臨床病理指標的關系 E-鈣黏素的表達與結直腸癌分化程度、腫瘤浸潤深度及有無單細胞浸潤和淋巴結轉移均有關(P均＜0.05)，TGF-β表達與腫瘤分化程度、浸潤深度及有無單個細胞浸潤和淋巴結轉移均有關(P均＜0.05)。詳見表1。

2.3 結直腸癌組織中E-鈣黏素表達與TGF-β表達關系 結直腸癌組織中E-鈣黏素表達與TGF-β表達無相關性(rs'=0.217 3，P≥0.05)。

3 討論

體外實驗證實E-鈣黏素黏附能力的喪失是腫瘤細胞獲得去分化和侵襲的第一步，E-鈣黏素具有抑制腫瘤侵襲轉移作用［3］。有學者研究發現［4］，E-鈣黏素在大腸癌、胃癌、乳腺癌、食管癌等人體惡性腫瘤中呈低表達，且低表達組比高表達組侵襲能力強。TGF-β是腫瘤生長促進因子，不但可促使細胞周期阻滯、加速其凋亡，還能誘導維持EMT狀態［5］。有實驗證明［6，7］，TGF-β 能夠誘導培養正常細胞和轉化細胞形態的改變以及其EMT特征的出現，誘導皮膚鱗癌細胞發生 EMT，形成梭形細胞癌，提示TGF-β表達上調會開啟EMT，并導致腫瘤的浸潤及轉移［8］。

表1 E-鈣黏素、TGF-β表達與結直腸癌臨床病理特征的關系

本實驗研究發現，結直腸癌組織中E-鈣黏素的表達明顯低于癌旁正常結直腸組織，其表達水平隨著腫瘤組織分化程度的降低、浸潤深度的加深和發生單細胞浸潤、局部淋巴結發生轉移的產生而降低;TGF-β表達水平隨著腫瘤組織分化程度的降低 、浸潤深度的加深和發生單細胞浸潤、局部淋巴結轉移而升高。提示E-鈣黏素、TGF-β與結直腸癌組織分化程度、浸潤和轉移關系密切。同時表明癌細胞浸潤是EMT的形態學表現，是癌浸潤的早期事件。E-鈣黏素、TGF-β的表達無明顯相關性，但二者均參與了EMT。

綜上所述，結直腸癌組織中E-鈣黏素呈低表達、TGF-β呈高表達，兩者均與結直腸癌的分化程度、浸潤和淋巴結轉移關系密切。E-鈣黏素和TGF-β在結直腸癌發生發展、早期浸潤和轉移中發揮重要作用。

［1］Boyer B，Vallés AM，Edme N.Induction and regulation of epithelial-mesenchymal transitions［J］.Biochem Pharmacol，2000，60(8):1091-1099.

［2］Shimizu M，Saitoh Y，Itoh H.Immunohistochemical staining of Haras oncogene product in normal，benign，and malignant human pancreatic tissues［J］.Hum Pathol，1990，21(6):607-612.

［3］Yu J，Ebert MP，Miehlke S，et al.Alpha-catenin expression is decreased in human gastric and in the gastric of first degree relatives［J］.Gut，2000，46(5):639-644.

［4］程秀嬌，鄭建盛，陳建陽.E-鈣黏素和基質金屬蛋白酶9與胃癌浸潤轉移的關系［J］.山西醫科大學學報，2005，36(4):424-426.

［5］Zheng G，Lyons JG，Tan TK，et al.Disruption of E-cadherin by matrix metalloproteinase directly mediates epithelial-mesenchymal transition downstream of transforming growth factor-beta1 in renal tubular epithelial cells［J］.Am J Pathol，2009，175(2):580-591.

［6］Zavadil J，Bottinger EP.TGF-beta and epithelial-to-mesenchymal transitions［J］.Oncogene，2005，24(37):5764-5774.

［7］Han G，Lu SL，Li AG，et al.Distinct mechanisms of TGF-beta1-mediated epithelial-to-mesenchymal transition and metastasis during skin carcinogenesis［J］.Clin Invest，2005，1159(7):1714-1723.

［8］Sime PJ，O'Reilly KM.Fibrosis of the lung and other tissues:new concepts in pathogenesis and treatment［J］.Clin Immunol，2001，99(2):308.