原發性干燥綜合征患者外周血Th17細胞的檢測及意義

王文軍,溫江濤

(連云港市第二人民醫院檢驗科,江蘇連云港222001)

本研究以Th17細胞為研究對象,對40例原發性干燥綜合征(pSS)患者及40例正常對照組外周血Thl7細胞進行檢測,并分析其與免疫指標及唇腺病理分級的相關性,以探討其在pSS發病機制中的作用以及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象 pSS患者為2008年1月至2009年10月連云港市第二人民醫院風濕科住院的患者,診斷標準為2002年原發性干燥綜合癥國際分類(診斷)標準[1]。共收集到pSS患者40例,其中女性35例,男性5例 ,年齡 17-75歲 ,平均(49±13)歲 ;病程10個月-9年,平均(4±5)年。正常對照組40名,為我院體檢中心健康體檢者,無自免疾病病家族史,其中女性35名,男性5名,年齡18-67歲,平均(48±15)歲。

1.2 主要儀器和試劑 熒光素標記的抗體:藻紅蛋白(PE)標記抗人IL-17及同型對照購自eBioscience公司;佛波酯(PMA)、離子霉素(Ion)購自 sigmaaldrich公司;免疫磁珠陰選試劑盒購自美天旎(Miltenyi Biotec)公司、固定與透膜試劑盒購自Beckman Coulter公司;淋巴細胞分離液(Ficoll)購自加拿大CEDARLANE Laboratories Limited 公司;RPMI 1640、胎牛血清(FBS)購自Gibco公司;抗核抗體(ANA)檢測試劑盒、抗SSA抗體、抗SSB抗體免疫印跡檢測試劑盒(Euroimmun公司產品);C3、C4試劑盒(Beckman Coulter公司)。Beckman Coulter Epics XL流式細胞儀,Olympus BX50熒光顯微鏡,Beckman Coulter Immage特定蛋白分析儀。

1.3 Thl7細胞檢測 用Ficoll液分離外周血單個核細胞(PBMC),依據免疫磁珠陰選試劑盒操作說明分選出CD4+T細胞,用含10%FBS的1640培養液重懸細胞(終濃度為1×106/ml),分別加入PMA 50 ng/ml、Ion 1 μ g/ml及阻斷劑奠能霉素,在 37℃,5%CO2條件下培養5 h,然后取細胞懸液加入100 μ l固定劑A,避光反應15min,冷PBS洗滌1次,再加入透膜劑B100 μ l,反應 5 min,加入 10 μ l PE 標記的抗人 IL-17抗體,設同型對照反應管,避光反應30 min后,PBS洗滌2次,以 500 μ l冷 PBS重懸,進行流式細胞儀(FCM)測定,結果用system Ⅱ軟件分析。

1.4 抗SSA抗體、抗SSB抗體采用免疫印跡法測定 C3、C4測定采用免疫散射比濁法;抗ANA采用免疫熒光法測定。

1.5 統計分析 采用SPSS16.0統計分析軟件包分析數據,兩組間均數比較采用t檢驗,變量間的相關性應用直線相關分析,P＜0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 pSS組與健康對照組外周血Th17細胞表達水平 pSS組Th17細胞水平為(2.14±0.91),健康對照組為(0.56±0.21),pSS組顯著高于健康對照組(P＜0.01)。

2.2 pSS患者外周血Th17細胞表達與血清抗SSA、抗SSB、ANA、C3、C4相關性 對pSS患者Th17細胞表達水平分別與血清ANA滴度、抗SSA、抗SSB、C3、C4含量進行直線相關分析,結果與相關免疫指標均與無相關性(P＞0.05),見表1。

表1 pSS患者外周血Th17細胞表達水平與疾病相關參數相關分析

2.3 唇腺病理分級對Th17細胞水平的影響 患者均進行下唇唇腺病理活檢,根據唇腺活檢病理分級標準,將唇腺病理變化分為1-4級。本組40例患者唇腺病理結果為1級1例,2級9例,3級16例,4級14例(見表2)。比較不同唇腺病理分級患者的Th17細胞水平,發現各組之間差異無統計學意義。

表2 pSS患者不同唇腺病理分級與外周血Th17細胞表達水平的比較

3 討論

大量研究證實TH17細胞與自身免疫疾病之間的關鍵紐帶即為 IL-17因子。在類風濕性關節炎(RA)、系統性紅斑狼瘡(SLE)、多發性硬化癥(MS)、哮喘等疾病中IL-17的表達均增加。其中,IL-17在類風濕性關節炎中的研究最為深入。早期認為IL-17作為一類促炎因子的在RA中僅僅是起到加強炎癥作用。然而,近來有關人、鼠關節移植的研究提示IL-17自身能夠刺激炎癥反應的發生[2],并且引發一系列后續的病理反應。最近研究還發現RA患者關節滑液中IL-17的含量明顯高于骨性關節炎患者滑液中的IL-17含量[3]。因此Th17細胞很可能在自身免疫反應的發生和發展中起重要作用。

pSS是一種以侵犯淚腺、唾液腺為主的自身免疫性疾病,它不僅侵犯外分泌腺體,還可侵犯全身多個器官,產生多種多樣的臨床表現。目前認為該病病因及發病機制尚不明確。本研究對臨床40例pSS患者檢測結果表明,其外周血Th17細胞表達水平顯著升高,與健康對照組比較存在顯著差異(P＜0.01)。同時本研究還分析了pSS患者外周血Th17細胞表達水平與血清抗SSA、抗SSB、ANA滴度、C3、C4含量進行直線相關分析,結果表明Th17細胞水平與疾病相關參數無相關性(P＞0.05)。本研究還將Th17細胞水平與唇腺病理進行了相關分析,結果表明兩者之間并無顯著性相關。雖然Th17細胞異常增加與pSS諸多臨床參數之間無統計學相關性,但我們認為Th17細胞異常增加對pSS的發生、發展有調控作用?；罨腡h17細胞通過分泌IL-17,IL-21、IL-6等因子發揮其促炎功能,而pSS發病的主要特點就是通過炎癥作用損傷靶器官。因此在pSS的炎癥過程中TH17細胞必然起到重要作用。但是pSS發病機制非常復雜,牽涉炎癥因子網絡非常龐大,而Th17細胞增多只是其中的一個環節[4,5]。同時本研究所涉及炎癥因子及臨床參數較少,所以Th17細胞究竟通過什么樣的機制參與pSS的發病需進一步探索。

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