原發性肝癌患者血清中Glypcian-3檢測及與AFP聯合試驗的診斷價值

王麗麗,王立群,高 歌

(吉林大學中日聯誼醫院,吉林長春130033)

本文通過檢測原發性肝癌(PHC)、肝硬化(LC)和正常對照組血清中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(Glypican-3)蛋白,探討血清Glypican-3檢測能否作為滿意的PHC腫瘤標記物以及與AFP聯合檢測的診斷價值,為今后PHC早期臨床診斷提供一些幫助。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取吉林大學中日聯誼醫院 2006年 3月-2008年3月,門診和住院收治的PHC患者共64例為肝癌組,其中男54例,女10例。年齡24-81歲,平均58.06±12.13歲。所有的PHC患者的診斷符合2001年9月中國抗癌協會肝癌專業委員會修訂的《原發性肝癌的臨床診斷與分期標準》,且經病理證實。其中Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別為6例(9.38%)、28例(43.75%)、26例(40.63%)、4例(6.25%);伴門脈癌栓26例(40.63%);腫瘤直徑≥5 者 28例(43.75%);癌結節 2個以上者24例(37.5%);肝功能狀況采用Child-pugh分級法:A級22例(34.38%)、B級 14例(21.88%)、C級 28例(12.50%)。肝硬化組選取同期收治的LC患者共63例,其中男45例,女18例。年齡24-80歲,平均53.92±11.67歲。診斷符合2000年中華醫學會西安會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》標準。健康對照組為健康體檢者共54例,其中男41例,女13例。年齡35-79歲,平均54.17±12.67歲。三組患者在性別、年齡等一般資料比較無顯著性差異。

1.2 標本采集

所有患者留取清晨空腹12小時肘靜脈血3 ml共兩管,即刻于 4℃、3 000 r/ml離心15 min,分離血清0.5-1 ml置Ependorff管分裝,-20℃冰箱中冰凍待用,全部標本于實驗時一批測定。

1.3 主要試劑及儀器

Glypican-3應用美國寶特公司生產的ELX-800全自動酶標儀檢測,試劑盒購自美國ADL公司。AFP應用美國雅培公司生產的AXSYM全自動免疫分析儀,試劑盒購自美國雅培公司。

1.4 實驗方法

Glypican-3采用酶聯免疫吸附試驗法檢測。AFP采用微粒子酶免化學發光分析法檢測。嚴格按照試劑盒說明書進行檢測。

1.5 結果判斷

腫瘤標志物陽性標準分別以試劑盒推薦的臨界參考值數值為準。Glypican-3＞80 ng/ml為陽性;AFP ＞20 μ g/ml為陽性。

1.6 統計學處理

應用SPSS 10.0軟件包進行統計分析,GPC3、AFP檢測數據以均數±標準差(x—±s)表示,陽性率的比較用 χ2檢驗,PHC與對照組組間均數比較用t檢驗。

2 結果

2.1 原發性肝癌、肝硬化組及正常對照組血清GPC3、AFP 檢測結果

見表1。

表1 三組GPC3、AFP檢測結果(±s)

表1 三組GPC3、AFP檢測結果(±s)

★與對照組比較 P＜0.01;※與LC組比較 P＜0.01

?

2.2 GPC3、AFP在PHC中的檢出率比較

見表2。

表2 GPC3、AFP在三組中檢測陽性率的比較

2.3 不同臨床參數的外周血GPC3的表達

將64例PHC患者按性別、年齡、臨床TNM分期、腫瘤直徑、癌結節數目、有無門脈癌栓及肝功能分級分組,其血清GPC3陽性檢測率見表3。

64例PHC 患者中AFP陰性的(AFP＜20 μ g/ml)患者數為17例,其中有13例GPC3為陽性,占AFP陰性數的76.47%。在AFP陽性與陰性不同表達時GPC3陽性率的比較,差異無顯著性(P＞0.05)。血清AFP ＞200μ g/ml組(21/28,75.00%)與血清 AFP20-200 μ g/ml組(14/19,73.68%)的 PHC患者外周血GPC3檢出率與血清AFP＜20 μ g/ml組比較,差異均無顯著性(P＞0.05)。

表3 不同臨床參數的患者外周血GPC3的表達

2.4 GPC3與AFP聯合檢測對PHC診斷價值

單項檢測GPC3的敏感性為75.00%,特異性為100%,漏診率為25.00%,AFP的敏感性為73.43%,特異性為92.16%,漏診率為26.57%。兩者比較,差異無顯著性(P＞0.05)。二者聯合檢測,可使敏感性提高到93.75%,漏診率降至6.25%,與GPC3、AFP單獨檢測相比,差異有顯著性(P＜0.05)。見表4。

表4 GPC3與AFP聯檢對PHC診斷價值的比較

3 討論

原發性肝癌(PHC)是一種常見、多發、死亡率高的惡性腫瘤之一。目前PHC的診斷主要依靠影像學的發現和血清腫瘤標志物(TM)的檢測。PHC標志物分析有助于PHC早期診斷、療效觀察、術后隨訪及復發或轉移監測,為早期診斷惡性腫瘤提供特異的科學依據。因此,希望找到一種特異性強,敏感度高的TM。由于腫瘤標志物只有相對特異性,大多數項目缺乏定位診斷價值,單一的腫瘤標志物作為診斷PHC的指標均有不同程度的局限性。

Capurro和Nakatsura等[1,2]在應用酶聯免疫吸附實驗(ELISA)方法檢測到PHC患者血清中的Glypican-3,發現陽性率高,capurro報道的陽性有 53%(18/34),Nakatsura報道有40%(16/40),而在肝炎合并肝硬化患者血清中Capurro檢測到1例陽性(共20例),正常人血清中未檢測到。Yamauchi等[3]進一步證實了Glypican-3在PHC組織中的表達同基因水平相一致,在非癌肝組織中同樣沒有表達或表達量極低。這與本試驗得出的結論相一致。而Capurro在肝炎合并肝硬化患者血清中檢測到1例陽性,在隨訪時發現該患者發展為PHC,說明Glypican-3可用于PHC的早期診斷,有助于鑒別良、惡性肝病。因此,蛋白印跡、酶聯免疫吸附法研究表明Glypican-3是一個良好的PHC 血清學標記物[1、2、4]。

Capurro M[2]和Filmus J[5]分別分析比較了PHC病人血清中Glypican-3和AFP的表達,結果顯示在同一患者血清中兩者的表達沒有相關性,Glypican-3mRNA在小肝癌檢出率明顯比AFPmRNA和血清中的AFP高[6]。研究表明,Glypican-3在AFP陰性的PHC中有較高的表達[7],與我們的結果相一致,提示Glypican-3可提高AFP陰性PHC患者的診斷率。

我們的研究結果顯示:Glypican-3蛋白表達與病理分級有顯著相關性(P＜0.05),而與腫瘤直徑無明顯相關性,這與國外報道相一致[8],提示Glypican-3蛋白作為一個特異性的腫瘤標記物,可能在細胞癌變的初始即有穩定的表達,發生于PHC的早期,檢測血液中的Glypican-3的表達對于預測腫瘤的惡性程度、病情輕重及預后有重要價值。由此我們認為檢測Glypican-3可作為診斷PHC的腫瘤特異性標志物。

本實驗單獨檢測Glypican-3的敏感性為75.0%,漏診率為25.0%,AFP的敏感性為73.4%,漏診率為26.6%。兩者比較,無顯著性差異。表明Glypican-3與AFP在PHC中表達無相關性。AFP陰性PHC患者血清有較高的Glypican-3檢出率。Glypican-3對AFP陰性及低濃度的原發性肝癌的篩選均有一定的臨床診斷和鑒別診斷價值,有助于提高原發性肝癌的早期診斷率,減少漏診。二者聯合檢測,可使敏感性提高到93.8%,漏診率降至6.2%,我們認為若采用Glypican-3作為PHC血清標志物與AFP聯合檢測用于臨床,可更進一步提高PHC診斷的陽性率,尤其是AFP陰性患者的診斷率。Glypican-3、AFP可以起到較好的互補作用,是解決AFP假陽性和假陰性問題的有效途徑,是PHC血清學診斷方法發展的必然趨勢。特別是在當前國內PHC有上升趨勢,早期、快速、準確的篩查發現PHC,這一方法具有重要價值。

為了提高PHC的診斷靈敏度、準確性和鑒別診斷價值,減少漏診率,建議采用Glypican-3、AFP聯合檢測。

[1]Nakatsura T,Yoshitake Y,Senju S,et al.Glypican-3,overexpressed Specifically in human hepatocellular carcinoma,is a novel tumor marker[J].Biochem Biophys Res Commun,2003,306:16.

[2]CapurroM,Wanless IR,Sherman M,et al.Glyp ican23:a novelserum and histochemical marker for hepatocellular carcinoma[J].Gastroenterology,2003,125:89.

[3]Yamauchi N,Watanabe A,Hishinuman M,et al.The glypican 3 oncofetal protein is a promising diagnostic markerforhepetocellularcarcinoma[J].Mod Pathol,2005,18(12):1591.

[4]Capurro M,Wanless IR,Sherman M,et al.Glypican-3:a novel-serum and histochemical marker for hepatocellular carcinoma[J].Gastroenterology,2003,125:89.

[5]Filmus J,Capurro M.Glypican-3 and alphafetoprotein as diagnostic tests for hepatocellular carcinoma[J].Mol Diagn,2004,8(4):207.

[6]Hsu HC,Cheng W,Lai PL.Cloning and expression of a developmentally regulated transcript MXR7 in hepatocellular carcinoma:biological significanceand temporospatial distribu-tion[J].Cancer Res,1997,57:5179.

[7]Debra L,ZyngerMD,Anita Gupta MD,et al.Expression of glypican-3 in hepatoblastoma:an immunohistochemical study of 65 cases[J].Human Patho-logy,2008,39:224.

[8]Franc?oise Degos MD,et al.Glypican-3 expression in hepatocellular tumors:diagnostic value forpreneoplastic lesions and hepatocellularcarcinomas[J].Human Pathology 2006,37:1435.