高白細胞性急性髓系白血病M2a的臨床特性及免疫表型研究

孟予城 杜昊 楊淑蓮 李寶生 雷蕊 周振環 鄭秀穎 崔元 王東俠 張文藝 徐文江

高白細胞性急性白血病(hyperleukocytic acute leukemia，HLAL)通常是指患者外周白細胞計數＞100×109/L的急性白血病。發病率占急性白血病的5% ～20%［1］，是急性白血病中預后較差的一類，其病情發展進展迅速，緩解率低，易并發DIC，顱內出血等嚴重的并發癥，導致患者早期死亡，本文對高白細胞性急性髓系白血病M2a的臨床特征及免疫表型進行了研究，旨在為此型HLAL的臨床診療和研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 高白細胞性急性髓系白血病M2a(HLAMLM2a)患者20例(HLAML-M2a組)為2002年4月至2009年12月河北省廊坊市中醫醫院住院患者，其中男11例，女9例;年齡5～71歲，中位年齡39歲;同時期住院的非高白細胞性急性髓系白血病M2a(HLAML-M2a)患者37例為對照組，其中男17例，女20例;中位年齡36歲。

1.2 免疫表型分析 無菌操作，抽取骨髓肝素鈉抗凝，常規分離骨髓單個細胞，采用直接/間接免疫熒光法標記，單克隆抗體選擇以 CD2、CD5、CD7為 T 系標記，以 CD13、CD14、CD15、CD33為髓系標記，以CD10、CD19、CD20為 B系標記，以 CD41為巨核系標記，以CD34、HLA-DR為干/祖系標記，以美國 Conlter公司 EPICS-XL型流式細胞儀進行檢測，相關試劑購自法國Immunotech公司，所有患者檢測前均未做任何治療。

1.3 結果判定 白血病細胞群表面抗原，淋系≥30%，髓系及CD7≥20%，CD34≥10%，HLA-DR≥20%為陽性標準。

1.4 診斷標準 所有病例均經細胞形態學、細胞組織化學、免疫表型等綜合確診，免疫表型的診斷依照白血病免疫學特征歐洲協作組(EGIL)推薦的積分標準進行［2］。除外雙表型及雙系列白血病，對伴有淋系抗原陽性，但又不夠診斷為雙表型或和雙系列白血病的，視為伴淋系抗原表達的AML(L+AML)。

1.5 化療方案 以DA為主(柔紅霉素+阿糖胞苷)，其他方案有MA(米托蒽醌+阿糖胞苷)，HA(三尖杉酯堿+阿糖胞苷)TA(吡柔比星+阿糖胞苷)，2組均于2個療程結束后，以骨髓評價緩解情況。療效判斷依據1987年蘇州會議標準［2］。

1.6 統計學分析應用SAS 6.12統計軟件，計量資料以表示，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，單向有序2×K表資料進行Wlcoxon秩和檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HLAML-M2a的主要臨床特征 高白細胞性M2a與非高白細胞性M2a相比較，主要臨床指標，除外周血白細胞數顯著增高外，無明顯差異(P＞0.05)，HLAML-M2a發病至確診的時間，明顯短于非高白細胞性M2a(P＜0.01)。見表1。

表1 HLAML-M2a與NHLAML-M2a主要臨床特征分析

2.2 緩解情況比較 HLAML-M2a組中有3例放棄治療，2例死亡，15例完成2療程化療，其中2例緩解，緩解率為11.76%。NHLAML-M2a組中有3例放棄治療，34例完成化療，其中16例緩解，緩解率為47.05%。2組比較，差異有統計學意義(χ2=6.182，P ＜0.01)。

2.3 2組骨髓增生情況分析 2組骨髓增生情況Wilcoxon分析結果顯示，2組間差異有統計學意義(u=2.2477，P＜0.05)，HLAML-M2a組骨髓增生與NHLAML-M2a組相比較更為活躍。見表2。

表2 2組骨髓增生情況分析 例

2.4 高白組與對照組非淋系抗原的表達 在HLAML-M2a組非淋系抗原陽性率最高是CD33有17例(85%)，其余依次為CD1313例(80%)、CD348例(40%)、HLA-DR 6 例(30%)、CD14、CD15各1例(5%)。在NHLAML-M2a組中非淋系抗原的陽性率最高的是CD3335例(94.59%)，其余依次為CD1330例(81.08%)、CD3426 例(70.27%)、HLA-DR 16 例(43.24%)、CD155 例(13.51%)、CD143 例(8.1%)。兩者比較，CD34的表達差異有統計學意義(χ2=4.492，P ＜0.05)，其余差異無統計學意義(P ＞0.05)。

2.5 HLAML-M2a組與對照組中CD7抗原的表達 在本組病例中，共有 17例表達 CD7抗原，陽性率為 29.82%，其中HLAML-M2a組中CD7有4例陽性(20%)，NHLAML-M2a組中有13例陽性(35.14%)，兩者間差異無統計學意義(χ2=0.790，P ＞0.05)CD7+M2a的平均外周血白細胞數為(52±56)×1012/L，CD7-M2a組的平均外周血白細胞數為(72±79)×109/L，2 組差異無統計學意義(t=1.0785，P ＞0.05)。

3 討論

急性白血病是造血干細胞惡性克隆性增生所導致的疾病，具有高度的異質性，高白細胞性急性白血病是其中的高危類型。本組20例HLAML-M2a除外周血白細胞計數顯著增高外，其余主要臨床指標與對照組相比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。但是，該組患者由自覺不適，到確診的時間明顯短于對照組，提示本組患者病情進展迅速。而且，HLAML-M2a組的緩解率明顯低于對照組，提示本組患者對化療藥物不敏感，預后不良，這與國內外學者的研究結論相一致［3，4］。

HLAML-M2a與NHLAML-M2a比較骨髓增生更為活躍。這應是造成HLAML-M2a患者外周血白細胞計數異常增高的重要原因之一。

本研究2組中，膜分化抗原表達陽性率依次CD33、CD13、CD34、HLA-DR，與國內研究者報道的陽性率差別不大［5，6］。在CD13、CD33陽性率次序，不同實驗室的結果略有不同，應與各實驗室試驗方法、試劑的選擇有關。本組HLAML-M2a患者CD34的表達陽性率顯著低于對照組，差異有統計學意義(χ2=4.492，P ＜0.05)。CD34是人類造血干/祖細胞標志，屬于鈣黏蛋白家族，通過調節干細胞與骨髓外基質細胞或與基質細胞的黏附，在造血過程中發揮作用［5，8］。研究認為 CD34表達，可作為髓系白血病預后不良的指標［9－11］。在本組病中CD34的陽性率在 HLAML-M2a中較低而在 NHLAML-M2a組中較高，而HLAML-M2a的緩解率又明顯低于對照組。由于對高白細胞性急性白血病免疫表型方面的研究極少，具體到HLAML-M2a則國內未見相關的大樣本研究，因此CD34在HLAML-M2a中的表達，以及與HLAML-M2a發生、發展的關系有待于進一步探討。

CD7是一種單鏈跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族，基因定位于17q25，分子量40 kDa，表達于胸腺細胞、T細胞及NK細胞表面，可作為T系早期的標志，用于T系淋巴細胞白血病的診斷，但特異性不強，部分AML細胞表面也有CD7的表達，陽性率在不同研究中差異較大，文獻報道在10% ～58%［12，13］。本組研究的陽性率也在此范圍之內。文獻報道的對于AML外周血白血病計數的影響存在爭議［14，15］。本組研究結果與胡曉梅等［16］的研究結論一致，CD7在HLAML-M2a中的表達與HLAML-M2a的發生無關。

綜上所述，HLAML-M2a與NHLAML-M2a相比，起病急、進展快。T系抗原CD7在M2a型白血病的表達與HLAML-M2a的發生關系不大。在HLAML-M2a中CD34的表達陽性率低于NHLAML-M2a，其原因尚需進一步探討。

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