子宮內(nèi)膜癌組織中脂聯(lián)素、抵抗素的表達(dá)及意義

李 倪，李建文，朱爭艷

(1天津醫(yī)科大學(xué)三中心臨床學(xué)院，天津300170;2天津市第三中心醫(yī)院;3天津市第三中心醫(yī)院人工細(xì)胞重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖器惡性腫瘤之一，多見于老年婦女，近年來隨著生活水平的提高、人口的老齡化、激素替代治療的廣泛應(yīng)用，其發(fā)病呈年輕化趨勢。2007年1月～2010年6月，我們采用免疫組化法檢測了子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本中脂聯(lián)素、抵抗素的表達(dá)，探討其在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1．1 材料 選擇我院手術(shù)切除的子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本40份(內(nèi)膜癌組)，均經(jīng)病理檢查確診，且術(shù)前未行放化療及6個(gè)月未用激素替代治療;其中子宮內(nèi)膜腺癌36例、漿液性癌2例、腺鱗癌1例、透明細(xì)胞癌1例;FIGO 分期(2009)［1］Ⅰ、Ⅱ期33例，Ⅲ、Ⅳ期7例;腫瘤為高分化18例，中分化12例，低分化10例。另取同期住院手術(shù)病理確診為不典型增生標(biāo)本30份(增生組)及正常增殖期子宮內(nèi)膜標(biāo)本30份(正常組)。各組一般資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。主要試劑:脂聯(lián)素兔抗人多克隆抗體及抵抗素兔抗人多克隆抗體均購自北京博奧森生物工程有限公司，免疫組化試劑盒及DAB試劑購自武漢博士德生物工程有限公司。

1．2 脂聯(lián)素、抵抗素表達(dá)檢測 所有標(biāo)本均經(jīng)中性甲醛固定、石蠟包埋、4 μm切片用于染色。采用乳腺癌組織和已知的組織作為陽性對照，用PBS替代一抗作為陰性對照。切片在70℃下烘烤1 h后，經(jīng)二甲苯脫蠟及梯度乙醇(100%、95%、80%和75%)水化，0．01 M的檸檬酸鈉緩沖液(pH 6．0)熱修復(fù)組織切片，冷卻至常溫后滴加3%H2O2常溫孵育10 min，正常山羊血清封閉15 min，按步驟分別滴加一抗工作液(濃度均為1∶100稀釋)，生物素化二抗及DAB顯色，常規(guī)蘇木素復(fù)染，氨水返藍(lán)，脫水，透明，封片后顯微鏡下觀察。結(jié)果判斷:低倍鏡下細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒或片狀為陽性表達(dá)。高倍鏡視野(400×)攝像，IPP5．1計(jì)算該視野的積分光密度(IOD)，觀察10個(gè)視野取平均值。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17．0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料均以±s表示，多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn) α =0．05。

2 結(jié)果

2．1 脂聯(lián)素、抵抗素表達(dá) 見表1。

表1 各組脂聯(lián)素、抵抗素表達(dá)比較(IOD值，±s)

表1 各組脂聯(lián)素、抵抗素表達(dá)比較(IOD值，±s)

注:與正常組比較，*P ＜0．01

組別 n 脂聯(lián)素 抵抗素內(nèi)膜癌組 40 28．37 ±8．51* 22．22 ±5．59*增生組 30 29．03 ±8．03* 15．81 ±5．06*正常組30 36．40 ±9．98 10．49 ±4．80

2．2 脂聯(lián)素、抵抗素表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見表2。

2．3 相關(guān)性分析 子宮內(nèi)膜癌組織中的脂聯(lián)素的表達(dá)與抵抗素的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=－0．337，P＜0．01)。

3 討論

脂聯(lián)素也被稱為ACRP30、apM1、adipoQ或GBP2，是一種新發(fā)現(xiàn)的脂肪分泌的內(nèi)源性生物活性多肽或蛋白質(zhì)。其通過與其受體結(jié)合而發(fā)揮特異的生物學(xué)效應(yīng)，具有增加脂肪酸氧化，抑制肝糖原的再生，提高葡萄糖攝取量、改善胰島素抵抗、抗動脈粥樣硬化、抗炎、抗血管生成的作用。現(xiàn)有流行病學(xué)資料顯示，脂聯(lián)素水平與多種激素依賴性腫瘤的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)，如乳腺癌、結(jié)直腸腫瘤、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、胃癌。Takemura等［2］首次用原位雜交的方法證明正常子宮內(nèi)膜組織在月經(jīng)周期中均有脂聯(lián)素及其受體的表達(dá)，脂聯(lián)素在增生早期的表達(dá)高于其他月經(jīng)時(shí)期。本研究內(nèi)膜癌組及增生組的脂聯(lián)素表達(dá)水平明顯低于正常組，提示低的脂聯(lián)素水平可能與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。此與體外研究發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素能直接抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1及RL95-2 增殖，誘導(dǎo)其凋亡一致［3］。Rzepka-Górska 等［4］研究子宮內(nèi)膜癌患者血漿脂聯(lián)素水平時(shí)發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素水平與腫瘤的分期無關(guān)，而與腫瘤的分化程度有關(guān)。張麗志等［5］用ELISA法檢測64例子宮內(nèi)膜癌患者血漿脂聯(lián)素水平，發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素水平與腫瘤的分化、分級均有關(guān)。本研究也發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌分化程度及FIGO分期均有關(guān)，這可能與本實(shí)驗(yàn)樣本量少，組織類型單一有關(guān)，有待進(jìn)一步進(jìn)行大量本、多中心的研究。

表2 脂聯(lián)素、抵抗素表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(±s)

表2 脂聯(lián)素、抵抗素表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(±s)

臨床病理參數(shù) n 脂聯(lián)素 P值 抵抗素 P值分化程度高分化 18 34．44 ±6．20 17．29 ±3．02中分化 12 27．35 ±5．85 ＜0．05 24．72 ±3．42 ＜0．05低分化 10 18．66 ±4．41 28．10 ±2．93 FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期 33 30．83 ±7．14 ＜0．05 21．06 ±5．27 ＞0．05Ⅲ、Ⅳ期7 16．75 ±2．76 27．71 ±3．47

抵抗素是Ghosh等［6］通過小鼠研究治療糖尿病藥物噻唑烷二酮類時(shí)發(fā)現(xiàn)的一種新的脂肪細(xì)胞因子，在白色脂肪組織中特異性表達(dá)。而人的抵抗素在白色脂肪組織中幾乎不表達(dá)，主要表達(dá)于單核、巨噬細(xì)胞。人類抵抗素基因位于第19號染色體，以二聚體形式分泌入血循環(huán)，可減弱脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞對胰島素的敏感性，誘導(dǎo)胰島素抵抗，導(dǎo)致空腹血糖升高，糖耐量降低，高胰島素血癥。而高胰島素血癥可能導(dǎo)致高雄激素血癥，進(jìn)而增加癌癥的風(fēng)險(xiǎn)。且現(xiàn)有研究表明，抵抗素與乳腺癌、結(jié)直腸腫瘤、前列腺癌的發(fā)生有關(guān)［7］。本研究內(nèi)膜癌組及增生組的抵抗素表達(dá)水平明顯高于正常組，表明抵抗素在子宮內(nèi)膜癌的病理發(fā)展中起一定作用;抵抗素表達(dá)與腫瘤分化程度相關(guān)，與腫瘤分期無關(guān)，這與體外研究抵抗素能誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞的增殖，在高分化前列腺癌中表達(dá)水平明顯高于低分化癌一致［8］。但有研究顯示，高水平抵抗素能誘導(dǎo)絨毛膜癌細(xì)胞的侵襲力，且能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的生成［9］。這可能與本研究樣本量少，組織類型單一有關(guān)。本研究還顯示，子宮內(nèi)膜癌中兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。

總之，脂聯(lián)素可能在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展中起抑制作用，而抵抗素可能起促進(jìn)作用。

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