混合提取對頸復康制劑中川芎揮發油提取率的影響

張立國， 張 超， 王春民， 楊宇杰， 倪力軍*

(1.華東理工大學 化學與分子工程學院，上海200237;2.承德頸復康藥業集團有限公司，河北 承德067000;3.承德醫學院，河北承德067000)

很多中藥復方中將多種藥材混合提取揮發油入藥，如頸復康制劑中將川芎、羌活、蒼術、乳香、沒藥按照一定比例混合后采用水蒸氣蒸餾工藝提取揮發油入藥［1］。川芎是頸復康制劑中的君藥，其揮發油是川芎的主要活性成分，其中藁苯內酯含量最高，具有解痙擴血管等作用［2-3］，對于頸復康制劑的主治功效有重要貢獻。研究表明，對于揮發油含量偏低(0.3% ～0.5%)的川芎藥材，水蒸氣蒸餾工藝存在揮發油得率低，提取時間長等缺陷［4］。而川芎與其它藥材混合提取，其揮發油成分數目及量均會有所減少［5］。本實驗采用提取-共沸精餾耦合工藝［6］，將川芎單獨提取，川芎、羌活兩味藥材混合提取以及川芎、羌活、乳香、沒藥、蒼術五味藥材混合提取，并對不同混合方式制備的揮發油中川芎藥材的特征物質藁苯內酯量進行了分析，以考察藥材混合提取對川芎揮發油提取率的影響。

1 材料與儀器

1.1 材料 川芎、羌活、沒藥、乳香和蒼術五味藥材(承德頸復康藥業集團有限公司提供)。甲醇，色譜純，(德國Merck公司)。

1.2 儀器 Agilent 7890A/5975C氣-質聯用儀;Agilent 7683B自動進樣器;軟件:MSD化學工作站，帶NIST 05 MS譜庫。

2 方法

2.1 揮發油提取方法 采用提取-共沸精餾耦合工藝，該裝置工藝原理及特點見文獻［4］，控制藥材總質量為200 g，將藥材進行適當粉碎并浸泡12 h后加入圓底燒瓶中，加入5倍于藥材總質量的水即1L，連續回流提取9 h。

2.2 揮發油樣品的配制 取25 μL的揮發油樣品，轉移至10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度線，待測。

2.3 GC-MS測試條件 氣相色譜條件:HP-5 MS(30 m×0.25 mm ×0.25 μm)毛細管柱;分流進樣，分流比為 20 ∶1;程序升溫60℃(3 min)，以16℃/min的速率升至300℃，保持6 min;進樣口溫度:250℃;載氣為氦氣，體積流量1 mL/min;EI離子源，電子能量為70 eV，離子源溫度220℃，質量掃描范圍33 ～550 amu;進樣量 0.2 μL。

2.4 單位質量川芎藥材的藁苯內酯提取率計算 在一定的濃度范圍內和相同GC-MS測試條件下，川芎揮發油的特征物質藁苯內酯的色譜峰面積與藁苯內酯的質量成正比。

V工藝為每種工藝對應的揮發油體積，V進樣為進樣體積，S工藝為V工藝對應的藁苯內酯的峰面積，S進樣為V進樣對應的藁苯內酯的峰面積，

單位質量川芎藥材對應的藁苯內酯峰面積記為A工藝，M藥材為川芎藥材的質量，單位取g，

單位質量川芎藥材的藁苯內酯相對提取率yi

其中A工藝5為五味藥材混合提取時單位質量川芎藥材所對應的藁苯內酯峰面積，A工藝i為川芎藥材單獨提取和兩味藥材混合提取時單位質量川芎藥材所對應的藁苯內酯峰面積。

3 結果與討論

3.1 揮發油提取結果 按照2.1項中所述方法分別提取川芎，川芎-羌活兩味藥材混合，川芎、羌活、乳香、沒藥、蒼術五味藥材混合，蒼術、羌活、乳香、沒藥四味藥材混合的揮發油，將收集到的揮發油分別記錄為 CHX1，CHX2，CHX5，Blank，所得揮發油的體積見表1。

表1 不同藥材組合所提取揮發油的體積

3.2 GC-MS 測試結果

3.2.1 揮發油樣品的總離子流圖 取配好的CHX1、CHX2、CHX5、Blank甲醇溶液，按照2.3項測試條件進行氣質分析，對應的總離子流圖見圖1。

圖1 揮發油樣品總離子流圖

通過MSD化學工作站檢索NIST 05 MS譜庫，并結合有關文獻［7-8］藁苯內酯質譜圖，對圖譜進行解析，在3種制備方式所得的川芎揮發油樣品中，均檢索到藁苯內酯，藁苯內酯質譜圖見圖2，而在空白樣品的揮發油樣品中，未檢索到藁苯內酯。

為了便于觀察，我們截取藁苯內酯出峰時間段的總離子流圖，并將不同制備方法和空白樣對應的揮發油總離子流圖放在一起，從圖3上可以看到，羌活、蒼術、乳香、沒藥四味藥材混合提取的揮發油在藁苯內酯出峰位置沒有響應，對其藁苯內酯出峰時間附近的峰進行了質譜分析，也沒有檢索到藁苯內酯，因而排除了其它四味藥材的干擾，為準確計算藁苯內酯出峰面積奠定了基礎。

圖2 藁苯內酯質譜圖

3.2.2 單位質量川芎藥材的藁苯內酯提取率 通過化學工作站，記錄下藁苯內酯出峰時間，并對將藁苯內酯的峰面積進行積分，參照2.4項公式，計算單位質量川芎藥材的藁苯內酯提取率y，結果見表2。

圖3 藁苯內酯出峰時間段揮發油樣品的總離子流圖

表2 GC-MS測試下不同藥材組合單位質量川芎藥材的藁苯內酯提取率

由表2中可知單位質量川芎藥材的藁苯內酯提取率大小排列順序為，CHX1＞CHX2＞CHX5，川芎藥材單獨提取時藁苯內酯提取率是五味藥材混合提取的3.2倍，是二味藥材混合提取的1.4倍，該結果表明單獨提取川芎藥材能充分提取出其有效活性成分藁苯內酯，川芎與其它藥材混合不利于藁苯內酯的提取，且隨著混合藥材種類的增加，藁苯內酯提取率下降。

藁苯內酯提取率計算公式(1)-(4)中假設藁苯內酯的色譜峰面積與藁苯內酯的質量成正比，是在一定質量濃度范圍內成立的。為此我們根據3種提取方式對應的藁苯內酯峰面積，配制了同一川芎揮發油不同濃度的樣品，使其藁苯內酯峰面積變化范圍將3種提取方式對應的藁苯內酯峰面積包含在內。按照2.3項測試條件進行氣質分析，將藁苯內酯峰面積對樣品濃度作圖(見圖4)，可知藁苯內酯峰面積與川芎揮發油濃度的線性相關系數為0.996，由此表明在3種提取方式對應的藁苯內酯含量范圍內，藁苯內酯的色譜峰面積與其質量線性關系良好，本文采用的藁苯內酯提取率公式誤差較小，可以良好的體現出混合提取對頸復康制劑中藁苯內酯提取率的影響。

圖4 藁苯內酯色譜峰面積與川芎揮發油質量濃度的關系

4 結論

與川芎混合提取的藥材種類越多，川芎揮發油中的主要成分藁本內酯的提取率越低。川芎揮發油單獨提取更有利于其活性成分的提取。

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［6］倪力軍，羅建群，張立國，等.揮發性成分提取裝置及其提取方法:中國，CN102174148A.10［P］.2008-10-03.

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