CD151在胃腺癌和宮頸癌中的表達

董海影 張 春 (齊齊哈爾醫學院醫學技術學院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

在我國，胃癌特別是進展期胃癌患者的5年生存率僅為15%左右，其中50%死于復發和轉移〔1〕。而子宮頸癌位于女性惡性腫瘤發病和死亡率的第二位，每年全球約有50萬新診斷的子宮頸癌患者，接近27萬人死于子宮頸癌，其中有80%的死亡病例發生在發展中國家。在我國，每年新增子宮頸癌例約13.5萬，約有8萬人因此死亡〔2〕。因此，尋找胃癌與宮頸癌的早期標志物以及在轉移中起關鍵作用的靶分子，為臨床治療提供高效的新靶點，是目前胃癌與宮頸癌研究領域的熱點。

1 對象與方法

1.1 病例資料 2006～2009年齊齊哈爾醫學院第一附屬醫院手術切除的胃腺癌58例，其中，男30例，女28例，年齡31～78〔平均(54.5±20.7)〕歲，依據 WHO腺癌組織學診斷標準進行組織學分級，高、中、低分化各17、18、23例。同時隨機選取同一手術切除標本遠端的正常胃黏膜組織28例作為對照。宮頸癌55例，年齡33～75〔平均(42.6±21.2)〕歲，同樣依據診斷標準進行分級，高、中、低分化各16、19、20例。并選取同一手術切除標本遠端的正常宮頸黏膜組織24例作為對照。

1.2 實驗試劑 第Ⅰ抗體為鼠抗人，單克隆抗體，由美國MAXIM公司生產;SABC免疫組化試劑盒和DAB顯色試劑盒分別由武漢博士德生物工程有限公司和福州邁新生物技術開發有限公司提供。

1.3 實驗方法

1.3.1 切片制作 將新鮮標本固定于10%中性甲醛中過夜，常規乙醇梯度脫水，二甲苯透明和石蠟包埋，連續切片厚度5 μm。部分切片常規 HE染色，用于病例診斷。其他切片37℃溫箱儲存待染。

1.3.2 免疫組化染色 免疫組織化學主要染色步驟:①切片脫蠟水化;②3%H2O2甲醇滅活內源性過氧化物酶;③依次滴加一抗、二抗和三抗;④DAB顯色;⑤蘇木精復染;⑥常規脫水、透明、封片。用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3.3 染色結果判斷 以細胞和(或)細胞質出現明顯的棕黃色顆粒為陽性細胞。每例隨機選取出10個不重復、不重疊的高倍視野(10×40)，計數陽性細胞數及所有細胞數，計算陽性細胞率=Σ陽性細胞數/Σ細胞數×100%。同時按染色強度評分:無顯色為1分，染色弱為2分，中等染色為3分，強染色為4分。CD151表達量=顯色強度×細胞陽性率%。

1.4 統計學分析 所有數據運用SPSS13.0軟件包進行處理，計量數據以±s表示，采用獨立樣本t檢驗，計數資料進行χ2檢驗。

2 結果

CD151在所有的胃腺癌(58/58，100.0%)和宮頸癌組織(55/55，100.0%)都表達，在絕大多數正常胃黏膜(26/28，92.9%)和宮頸黏膜組織(23/24，95.8%)中也都表達。CD151在胃腺癌和宮頸癌中的細胞陽性率及表達量都要顯著高于正常組織(P＜0.05)。見表1，表2，圖1。

表1 CD151在正常胃黏膜及胃腺癌的表達

圖1 CD151在胃及宮頸組織中的表達(DAB，×400)

表2 CD151在正常宮頸黏膜及宮頸癌的表達

3 討論

四次跨膜蛋白超家族(Transmembrane 4 superfamily，TM4SF)是近年來被廣泛研究的一個膜蛋白家族，在人體細胞中廣泛表達。這個家族的成員參與細胞表面分子之間的連接信號傳導，在調節細胞增殖、激活以及細胞黏附活力中起重要作用。研究證實，TM4SF家族在腫瘤的生長、遷移及血管生成中起重要作用〔3〕。迄今為止，該家族已檢測出30多個成員，其中絕大多數被認為是抑癌基因，例如CD9、CD82。它們的產物與腫瘤發展、預后呈負相關。而新近發現的TM4SF成員CD151卻與腫瘤發生及預后呈正相關〔4〕，并且是該家族成員中唯一的癌基因〔5〕。CD151在人類多種腫瘤細胞表面均有較高水平的表達，與腫瘤的預后、惡性進展、治療等有著密切關系，隨著癌的進展CD151的表達增加，且CD151表達越高患者預后越差〔4〕。并且研究證實，CD151對內皮細胞的移行及微血管形成起促進作用，在血管生成及重塑中起關鍵作用，有利于腫瘤細胞的浸潤及轉移〔6〕。鑒于CD151與腫瘤發展呈正相關，促進腫瘤細胞增殖、浸潤及轉移，在腫瘤惡性進展中起著重要的作用。本實驗利用免疫組織化學法檢測CD151與胃腺癌和宮頸癌的發生、發展關系。

本研究通過免疫組織化學法檢測CD151在胃腺癌和正常胃黏膜組織中的表達。研究發現，CD151在胃腺癌組織中呈現陽性的高表達，相比較于在正常胃黏膜組織中的表達，非常顯著。由此認為，CD151在胃腺癌的發生發展中起著非常重要的作用。而要闡明CD151與胃癌發生發展、浸潤及轉移中的關系，為胃癌的早期診斷、進展判定及轉移預測提供有臨床實用價值的標志物，為胃癌尤其是進展期胃癌的臨床治療提供新的靶向分子，還需要通過進一步實驗加以證實。

本次實驗我們同樣發現，CD151的細胞陽性率和CD151表達量在宮頸癌組織中均高于正常的宮頸黏膜組織。因此，CD151蛋白可能是宮頸癌治療的一個潛在靶點。宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤〔7〕，目前認為宮頸癌的發生、發展是由量變到質變、由漸變到突變的過程。早期宮頸癌治療效果尚可，但后期宮頸癌的浸潤及轉移是其治療中的主要問題〔8〕。由本次試驗結果可見，CD151在宮頸癌的發生與發展中存在著一定的作用。至于其在宮頸癌的早期診斷、療效檢測和預后評估中的價值需要在隨后的臨床跟蹤實驗中得到進一步的證實。

1 徐光煒.胃癌治療的現狀及問題〔J〕.外科理論與實踐，2003;8(1):3.

2 朱雪瓊，石一復.HPV疫苗預防子宮頸癌臨床研究進展〔J〕.實用腫瘤雜志，2010;25(1):12-6.

3 Yauch RL，Kazarov AR，Desai B，et al.Direct extracellular contact between integrin α3β1and TM4SF protein CD151〔J〕.J Biol Chem，2000;2759(13):9230-8.

4 Ang J，Lijovic M，Ashman L K，et al.CD151 protein expression predicts the clinical outcome of Low-grade primary prostate cancer better than histologic grading:a new prognostic indicator〔J〕.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2004;13(11):1717-21.

5 Hong IK，Jin YJ，Byun HJ，et al.Homophilic interactions of Tetraspanin CD151 up-regulate motility and matrix metalloproteinase-9 expression of human melanoma cells through adhesion-de-pendent c-Jun activation sig-naling pathways〔J〕.J Biol Chem，2006;281(34):24279-92.

6 Lan RF，Liu ZX，Liu XC，et al.CD151 promotes neovascularization and improves blood perfusion in a rat hind-limb ischemia model〔J〕.J Endovasc Ther，2005;12(4):469-78.

7 Dang DT，Bachman KE，Mahatan CS，et al.Decreased expression of the gut-enriched Kruppel-like factor gene in intestinal adenomas of multiple intestinal neoplasia mice and in colonic adenomas of familial adenomatous polyposis patients〔J〕.FEBS Lett，2000;476(3):203-7.

8 周 希，冀 靜，吳 怡，等.CD147蛋白在人宮頸癌中的表達〔J〕.西安交通大學學報，2010;31(1):14-25.