Bmi-1蛋白在胃癌組織中的表達及其與胃癌患者術后生存的相關性

張愛榮 梁麗梅 許 穎 胡海燕 (北華大學附屬醫院消化內科，吉林 吉林 300)

胃癌發病與原癌基因的高表達有密切的相關性。多梳基因(PcG)家族由多種與細胞周期和增殖相關的轉錄抑制子組成，是一類重要的與發育相關的基因。Bmi-1基因是PcG基因家族的成員之一〔1〕，可協同c-myc基因共同促進細胞轉化和腫瘤形成，使腫瘤細胞逃逸凋亡〔2〕。目前證實Bmi-1基因在多種腫瘤中均呈高表達〔3〕，且與患者預后有關。本文擬研究Bmi-1基因在胃癌組織中的表達及其與胃癌患者術后生存的相關性。

1 資料與方法

1.1 研究對象及標本來源 我院2009年1～12月接受胃癌手術治療的患者90例，其中術后隨訪資料完整者62例。術前均未接受化療放療及免疫治療，其中男44例，女18例，年齡34～81歲，其中胃底-賁門癌32例，胃體癌10例，胃竇癌5例，全胃癌11例，殘胃癌4例;鱗癌14例，腺癌48例;高分化10例，中分化14例，低分化38例;有無淋巴結轉移者分別為25、37例;Borrmann分型:Ⅰ～Ⅱ型23例，Ⅲ～Ⅳ型39例。所有標本分別在癌灶、癌旁3 cm以內及手術遠端正常黏膜組織3處取材，均經病理證實。均隨訪3～5年。

1.2 免疫組化染色法檢測胃組織中Bmi-1表達 采用SP法檢測。每個蠟塊取3 μm連續切片，具體操作按試劑盒說明。鼠抗人Bmi-1單克隆抗體購自上海廣盛生物有限公司，SP免疫組化試劑盒和抗體稀釋液購自福州邁新技術有限公司。免疫組化染色結果評價應用普通光學顯微鏡，高倍鏡下隨機選取4個不同的視野，計算核陽性細胞數占細胞總數的百分比，陽性細胞率＜10%為1分，陽性細胞率＞10%且≤50%為2分，陽性細胞率＞50%且≤75%為3分，陽性細胞率＞75%為4分。根據染色強弱程度計分:陰性為1分，弱染色2分，中等強度染色3分，強染色4分。通過二者的成績判斷結果:≤4分為(-);＞4分且≤8分為(+);＞8分且≤12分為();＞12分且≤16分為();以上結果由至少兩位病理科醫師在雙盲情況下觀察所得。

1.3 統計學分析 采用Kaplan-Meier法統計Bmi-1陽性表達及胃癌患者各項臨床指標對其存活時間的影響，Cox回歸多因素模型分析篩選影響胃癌患者生存期的獨立因素。

2 結果

2.1 Bmi-1在胃癌組織中的表達 胃癌組織中Bmi-1的陽性率高達75.8%(47/62)，而癌旁組織的陽性率為33.9%(21/62)，兩者差異顯著(P＜0.05)，且兩者的陽性率均明顯高于正常胃黏膜組織(1.3%，P＜0.01)。見圖1。

2.2 Bmi-1蛋白與胃癌患者術后生存的關系 存活3年以上者39例(62.9%)。隨訪者中47例Bmi-1陽性者，存活3年以上者20例(42.5%);15例Bmi-1陰性者，存活3年以上者12例(80%)，兩者差異顯著(P＜0.05)。

圖1 Bmi-1在胃癌組織中的表達(DAB，×200)

2.3 臨床病理特征與胃癌患者的生存分析 Kaplan-Meier單因素分析顯示:年齡、分化程度、Borrmann分型、有無淋巴結轉移及Bmi-1陽性表達是影響胃癌患者生存的重要因素。而COX回歸分析顯示Borrmann分型，有無淋巴結轉移及Bmi-1陽性表達是影響胃癌患者生存的獨立危險因素。見表1，表2。

表1 胃癌患者單因素生存分析(Kaplan-Meier法)

表2 Cox回歸多因素分析與預后相關的獨立危險因素

3 討論

人類Bmi-1基因定位于10p11.23，由10個外顯子組成，cDNA全長3 251 bp，位于506～1 486 bp之間的開放閱讀框編碼一個含326個氨基酸，相對分子量為45 kD的核蛋白質。Bmi-1基因通過負性調控下游INK4a/ARF調控位點而影響細胞增殖和衰老〔4〕。在不同啟動子的作用下，INK4a編碼p16 INK4a與 p19ARF兩種蛋白，在細胞周期中，由于 cyclinD/CDK4/6復合物的作用，pRB是高度磷酸化的，故不能結合并抑制E2F轉錄因子，而允許E2F靶基因轉錄，使細胞由G1期進入S期，促進細胞生長和增殖〔5〕。當 Bmi-1過度表達時，p16INK4a蛋白則表達下調，cyclin D與CDK4/6復合物則形成增多，最終通過p16INK4a/cyclin D/Rb通路，促進細胞生長和增殖〔6〕。另外，Bmi-1高表達還可以抑制p19ARF蛋白表達，通過p19ARF/MDM2/p53通路而阻止細胞周期停滯和細胞凋亡〔7〕。腫瘤細胞中Bmi-1基因表達失調而導致的pRb和p53異常調控可能是pRb和p53腫瘤抑制途徑頻繁受阻的重要原因。近年發現，Bmi-1基因在多種惡性腫瘤如白血病、結腸癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌等高表達，并且與這些腫瘤的侵襲、轉移、預后等一系列病理過程有關〔8〕。本研究結果提示Bmi-1蛋白在胃癌的發生發展中也有著不可忽視的作用。另外，本文在對胃癌患者生存期隨訪的研究結果表明，影響胃癌患者術后生存的因素眾多，包括年齡，分化程度、Borrmann分型、有無淋巴結轉移及Bmi-1陽性表達，而其中的后三者則是影響胃癌患者術后生存的獨立因素。由此可見，Bmi-1高表達增強了胃癌細胞增殖及侵襲能力，與胃癌浸潤、轉移及預后方面有重要影響。這為胃癌的基因治療提供了新的靶點。

1 Dimri GP，Martinez JL，Jacobs JJ，et al.The Bmi-1 oncogene induces telomerase activity and immortalizes human mammary epithelial cells〔J〕.Cancer Res，2002;62(16):4736-45.

2 Molofsky AV，Pardal R，Iwashita T，et al.Bmi-1 dependence distinguishes neural stem cell self-renewal from progenitor proliferation〔J〕.Nature，2003;425:962-7.

3 劉丹丹，張艷麗，孟秀香.Bmi-1基因與腫瘤關系研究進展〔J〕.大連醫科大學學報，2009;31(3):355-8.

4 Jacobs JJ，Kieboom K，Marino S，et al.The oncogene and polycomb-group gene Bmi-1 regulates cell proliferation and senescence through the ink4a locus〔J〕.Nature，1999;397(6715):164-8.

5 高鳳蘭，劉春靈，李維山.沉默Bmi-1基因表達對胃癌細胞BGC823衰老和轉移的作用〔J〕.世界華人消化雜志，2010;18(4):335-9.

6 肖 軍，鄧長生，湯小燕，等.RNAi技術沉默Bmi-1基因對人胃癌AGS細胞株的作用〔J〕.武漢大學學報(醫學版)，2009;30(6):732-6.

7 Park IK，Morrison SJ，Clarke MF.Bmi1，stem cells，and senescence regulation〔J〕.J Clin Invest，2004;113(1):175-9.

8 Glinsky GV，Berezovska O，Glinskii AB.Microarray analysis identifies a death from cancer signature predicting therapy failure in patients with multiple types of cancer〔J〕.J Clin Invest，2005;115(6):1503-21.