Maspin蛋白和C-erbB-2蛋白在子宮內膜樣腺癌中的表達及其臨床意義

朱 丹 潘 穎 柴新燕 李妞妞 王鐵延 (吉林大學中日聯誼醫院婦產科，吉林 長春 30033)

子宮內膜癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤之一，其發病率現逐年升高，已占女性生殖系統惡性腫瘤的第2位;而子宮內膜癌的病因目前尚不十分清楚。研究表明，Maspin(mammary serine protease inhibitor)是一種新的候選腫瘤抑制基因，屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑(serpin)超家族。C-erbB-2則被認為是一種原癌基因，又稱neu基因或HER2，有表皮生長因子受體的活性與功能〔1〕。近年來，已經發現這兩種基因及其表達的蛋白產物maspin蛋白和C-erbB-2蛋白在許多腫瘤的發生、發展中起重要作用，且與宮頸癌、卵巢癌、乳腺癌等腫瘤的發生關系密切〔2〕，但其與子宮內膜癌的關系鮮見文獻報道。我們對此進行了研究，旨在通過檢測maspin蛋白和C-erbB-2蛋白在不同的組織分級和臨床分期子宮內膜樣腺癌組織中的表達，探討其在腫瘤轉移中的意義，為進一步研究利用基因調整的方法抑制子宮內膜樣腺癌的轉移奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取本院婦科2009年7月至2010年7月住院患者手術切除的子宮標本50例。年齡46～72(平均62.2)歲。子宮內膜樣腺癌組織30例，正常子宮內膜組織20例。根據FIGO手術-病理分期:Ⅰ期17例，Ⅱ期8例，Ⅲ期5例。組織學分級:1級9例，2級15例，3級6例。肌層浸潤深度≤1/2者22例，肌層浸潤深度＞1/2者8例。無淋巴轉移23例，有淋巴轉移7例。術前均未行放療、化療及各種激素治療。

1.2 試劑及實驗 鼠抗人Maspin單克隆抗體(工作效價1:50)，由福建邁新生物技術有限公司提供;鼠抗人C-erbB-2單克隆抗體及免疫組化(Immuno-Bridge+)超敏PV-90000檢測試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司;DBA酶底物顯色試劑盒(DBA-0031)用已知Maspin、C-erbB-2蛋白陽性染色的乳腺癌石蠟切片為陽性對照。采用免疫組織化學S-P方法(鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化酶法)檢測Maspin、C-erbB-2蛋白在正常子宮內膜及子宮內膜樣腺癌組織中的表達情況。所有標本均經10%中性甲醛溶液固定，常規石蠟包埋，連續切片4張，厚4 μm，1張行HE染色;1張用PBS液代替一抗作為陰性對照。2張分別作Maspin及C-erbB-2免疫組織化學染色。

1.3 結果判斷標準 采用SP免疫組織化學法，均設陰性及陽性對照，采用雙盲法觀察結果。Maspin蛋白陽性表達是細胞核、細胞質出現黃色、棕黃色或棕褐色顆粒。C-erbB2蛋白陽性表達是細胞膜或細胞質內出現黃色、棕黃色或棕褐色顆粒。蛋白表達結果采用半定量積分法判定，每張切片均為高倍鏡下(400×)隨機觀察10個視野，計數100個細胞，計算其平均陽性百分率。以陽性細胞百分率和染色強度為判定標準。按染色強度評分:無色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;按平均陽性細胞百分率評分:0分為陽性細胞≤25%，1分為陽性細胞26% ～50%，2分為陽性細胞51% ～75%，3分為陽性細胞＞75%。綜合評分為將染色強度和平均陽性細胞百分率兩者積分的乘積結果評分:0分為陰性(－)，1和2分為弱陽性(+)，3和4分為中度陽性()，6和9分為強陽性()。

1.4 統計學分析 應用SAS9.1.3統計軟件進行χ2檢驗和非參數Spearman等級相關分析。

2 結果

2.1 Maspin蛋白在不同子宮內膜組織中表達 Maspin蛋白在正常子宮內膜及子宮內膜樣腺癌組織中陽性表達率分別為85%、43.33%，呈下降趨勢，兩組間差異顯著(P＜0.05)。

2.2 C-erbB-2蛋白在不同子宮內膜組織中表達 C-erbB-2蛋白在正常子宮內膜及子宮內膜樣腺癌組織中陽性表達率分別為10%、56.67%，呈升高趨勢，兩組間差異顯著(P＜0.05)。

2.3 Maspin蛋白、C-erbB-2蛋白表達與子宮內膜樣腺癌臨床病理特征的關系 Maspin蛋白與子宮內膜樣腺癌的手術-病理分期、組織學分級及淋巴結轉移有關(P＜0.05);C-erbB-2蛋白與子宮內膜樣腺癌的手術-病理分期、組織學分級及肌層浸潤深度有關(P＜0.05)，見圖1及表1。

圖1 免疫組織化學染色陽性結果(SP，×200)

表1 Maspin與C-erbB-2蛋白陽性表達與子宮內膜樣腺癌臨床病理特征的關系〔n(%)〕

2.4 Maspin和C-erbB-2蛋白在子宮內膜樣腺癌組織中表達的相關性 在30例子宮內膜樣腺癌組織中Maspin蛋白陽性表達而C-erbB-2陰性表達者占11例，Maspin蛋白陰性表達而C-erbB-2陽性表達者占15例，二者同為陽性表達者占2例，二者同為陰性表達者占2例。經非參數Spearman等級相關分析表明，二者呈負相關(r= －0.728 5，P＜0.01)。

3 討論

Maspin蛋白在正常子宮內膜細胞中高表達，而癌細胞中不表達或僅少量表達〔3〕。本研究結果同樣證實Maspin蛋白在正常子宮內膜組織中的陽性表達率高于子宮內膜樣腺癌組織，提示Maspin蛋白可能發揮腫瘤抑制的作用。Secord等〔4〕通過對晚期上皮性卵巢癌中Maspin蛋白的研究，認為腫瘤的Maspin蛋白表達缺失是進展和死亡風險增加的一項獨立預后指標。提示Maspin蛋白的表達缺失可能在子宮內膜癌變中起作用，其可能作為子宮內膜癌早期診斷有價值的分子生物學指標。

有學者研究表明Maspin蛋白與子宮內膜樣腺癌的臨床分期及淋巴結轉移有關〔5〕。本研究證實Maspin蛋白與子宮內膜樣腺癌的手術-病理分期、組織學分級及淋巴結轉移有關(P＜0.05);提示Maspin蛋白可能與子宮內膜樣腺癌的演變有關，并在一定程度上可反映腫瘤的惡性程度。此外，本研究還證實，子宮內膜樣腺癌組織中，Maspin蛋白陰性表達或低表達者淋巴結轉移傾向較高，肌層侵襲能力較強，由此可以推測Maspin蛋白的低表達可能增加了腫瘤細胞通過基底膜的能力，促進了子宮內膜樣腺癌的進展、侵襲和轉移，但其與肌層浸潤深度無統計學意義(P＞0.05)。支持了maspin蛋白發揮腫瘤抑制作用的論點，并且提示其在腫瘤演變進展中起一定作用。

研究顯示正常子宮內膜組織中C-erbB-2蛋白表達率明顯低于子宮內膜癌組織〔6〕。本研究結果與上述文獻一致。說明C-erbB-2蛋白可能在子宮內膜樣腺癌的演變過程中起一定作用。提示maspin蛋白、C-erbB-2蛋白的檢測可能作為子宮內膜癌早期診斷有價值的分子生物學指標。

Loffe〔7〕等發現C-erbB-2蛋白陽性表達與子宮內膜癌臨床分期、組織學分級有關。本研究證實C-erbB-2蛋白與子宮內膜樣腺癌的手術-病理分期、組織學分級及肌層浸潤深度有關(P＜0.05)。這與文獻報道結論一致。提示其陽性表達與子宮內膜樣腺癌的分化程度及惡性程度有關。因此，其可作為預測子宮內膜樣腺癌惡性程度的一個指標。

有關Maspin蛋白和C-erbB-2蛋白在腫瘤組織中表達的相關性已有文獻對其進行報道。研究發現乳腺癌細胞中Maspin蛋白表達與C-erbB-2蛋白表達呈負相關〔8〕。孫永杰等〔9〕對乳腺癌相關特異基因的研究顯示乳腺組織中CerbB-2蛋白表達與Maspin蛋白表達有顯著差異，CerbB-2蛋白陰性組Maspin蛋白表達率高。Maspin蛋白陽性表達與C-erbB-2蛋白陽性表達呈負相關。本研究結果提示兩者與子宮內膜樣腺癌的發生、發展、侵襲及轉移過程有關。其可能機制如下:①腫瘤發展依靠血管內皮生長因子(VEGF)促進腫瘤新生血管生成，C-erbB-2原癌基因的激活能促進腫瘤細胞分泌VEGF〔10〕，Maspin則通過血管內皮生長因子(VEGF)、成纖維細胞因子(bFGF)抑制腫瘤生成血管。②Maspin蛋白通過其細胞表面作用靶點(uPA/uPAR)表達特性可直接作用于 C-erbB-2蛋白受體，阻斷C-erbB-2蛋白的信號轉導，減少VEGF釋放。③C-erbB-2蛋白擴增和過度表達會導致正常細胞的惡性轉化，Maspin蛋白抑制腫瘤細胞侵襲和轉移，調節細胞對促凋亡因子的敏感性。因此，聯合檢測Maspin蛋白和C-erbB-2蛋白可作為預測子宮內膜樣腺癌的惡性程度的指標。

1 Zou Z，Anisowicz A，Hendrix MJ，et al.Maspin，a serpin with tumor-suppressing activity in human mammary epithelial cells〔J〕.Science，1994;265(5180):1893-4.

2 Domann FE，Rice JC，Hendrix MJ，et al.Epigenetic silencing of maspin gene expression in human breast cancers〔J〕.Int J Cancer，2000;85(11):805-11.

3 喬玉環，陳志華，郭瑞霞，等.子宮內膜癌中Maspin基因的表達及其與雌激素受體表達的相關性研究〔J〕.現代婦產科進展，2008;17(4):264-8.

4 Secord AA，Lee PS，Darcy KM，et al.Maspin expression in epithelial ovarian cancer and associations with poor prognosis:a Gynecologic Oncology Group study〔J〕.Gynecol Oncol，2006;101:390-7.

5 夏明靜，紀新強，孫秋茹，等.子宮內膜樣腺癌組織maspin基因表達及其臨床意義的研究〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2008;15(18):1393-5.

6 蔣宋薇，徐 紅.C-erbB2基因在子宮內膜癌組織中的表達及臨床意義〔J〕.腫瘤學雜志，2009;15(4):335-7.

7 Loffe OB，Papadimitrion JC，Drachenberg CD.Correlation of proliferation induces apoptosis and related oncogene expression(bcl-2 and c-erbB-2)and P53 in proliferative hyperplastic，and malignant endometrium〔J〕.Hum Pathol，1998;29(10):150.

8 劉 巍，張祥宏，張志剛，等.Maspin BCSG1及C-erbB-2表達與乳腺癌預后的關系〔J〕.中國腫瘤臨床，2005;32(8):431-4.

9 孫永杰，侯連澤.乳腺癌相關特異基因的研究進展〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2006;13(16):1261-4.

10 Mazumdar A，Adam L，Boyd D，et al.Heregulin regulation of urokinase plasminogen activator and its receptor:human breast epithelial cell invasion〔J〕.Cancer Res，2001;61(1):400-5.