束縛加懸吊應(yīng)激大鼠腦組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的變化及異丙酚對其的影響

李曉梅 楊成君 陸艷娟 (吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，吉林 長春 130021)

單胺類神經(jīng)遞質(zhì)在應(yīng)激狀態(tài)下其含量異常〔1～4〕，目前尚未有關(guān)于麻醉劑異丙酚對應(yīng)激大鼠不同腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞含量變化的報(bào)道。本研究旨在觀察異丙酚對束縛加懸吊應(yīng)激大鼠腦組織不同腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與分組 雄性SD大鼠30只，體重(250±10)g，吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。正常飲食，晝夜飼養(yǎng)48 h。于實(shí)驗(yàn)前12～24 h禁食，不限水;實(shí)驗(yàn)分組，雄性SD大鼠30只隨機(jī)為:應(yīng)激對照組(S組)，將大鼠四肢用繃帶分別固定于鼠板上，頭朝下尾朝上懸掛，經(jīng)股靜脈注射5 ml生理鹽水，在1 h內(nèi)注射完畢;麻醉劑異丙酚組，分別在1 h內(nèi)經(jīng)股靜脈注入用5 ml生理鹽水稀釋的異丙酚5 mg/kg(p1組)和10 mg/kg(p2組)束縛加懸吊時(shí)間為 6 h〔5〕。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 注射用異丙酚，西安力邦制藥有限公司;5-羥色胺(5-HT)，硫酸肌肝，去甲腎上腺素(NE)，多巴胺(DA)(美國SIGMA公司);鄰苯二甲醛(分析純上海化學(xué)試劑公司)，L-半胱氨酸(上海康達(dá)公司)。熒光分光光度計(jì) RF-5301PC(日本島津公司)，電熱三用水箱DS-1型(北京醫(yī)用儀器廠)，冷凍離心機(jī)TGL-16G型(上海分析儀器廠)。

1.3 單胺類神經(jīng)遞質(zhì)測定與取材 各組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死迅速取腦組織分出不同腦區(qū)－80℃保存，用時(shí)取出，稱重于冰冷酸性正丁醇中制成勻漿，離心分離水相及有機(jī)相。5-HT在堿性條件下與鄰苯二甲醛縮合，形成具有熒光的化合物，NE、DA與氧化劑反應(yīng)成具有熒光的化合物，上述熒光化合物強(qiáng)度與濃度成直線關(guān)系，即可測定其熒光強(qiáng)度〔6〕。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)和分析，數(shù)據(jù)結(jié)果以±s表示，組間比較用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠腦干NE、DA、5-HT含量比較 大劑量異丙酚組腦干DA含量明顯高于鹽水對照組(P＜0.01)，小劑量異丙酚組5-HT含量明顯低于鹽水對照組(P＜0.01)。見表1。

表1 各組大鼠腦干NE、DA、5-HT含量變化(μg/g，± s，n=10)

表1 各組大鼠腦干NE、DA、5-HT含量變化(μg/g，± s，n=10)

與對照組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;下表同

組別NE DA 5-HT S組1.01±0.07 1.53±0.21 9.24±0.21 p1組 1.02±0.19 1.79±0.33 6.06±0.722)p2組 1.12±0.08 2.23±0.362)9.25±1.45

2.2 各組大鼠小腦NE、DA、5-HT含量比較 小劑量異丙酚組NE含量明顯高于鹽水對照組，而5-HT含量明顯低于鹽水對照組(P＜0.01);大劑量異丙酚組小腦NE、DA含量明顯高于鹽水對照組(P＜0.01)。見表2。

表2 各組大鼠小腦NE、DA、5-HT含量變化(μg/g，± s，n=10)

表2 各組大鼠小腦NE、DA、5-HT含量變化(μg/g，± s，n=10)

組別NE DA 5-HT S組0.24±0.04 1.16±0.17 3.45±0.25 p1組 0.66±0.312) 1.89±0.18 1.96±0.552)p2組 0.99±0.112) 1.71±0.362)3.47±0.51

2.3 各組大鼠皮質(zhì)NE、DA、5-HT含量比較 大劑量異丙酚組皮質(zhì)DA含量高于鹽水對照組(P＜0.05)。其他與鹽水對照組比較無明顯差異(P＞0.05)。見表3。

表3 各組大鼠皮質(zhì)NE、DA、5-HT含量變化(μg/g，± s，n=10)

表3 各組大鼠皮質(zhì)NE、DA、5-HT含量變化(μg/g，± s，n=10)

組別NE DA 5-HT S組1.33±0.94 1.81±0.25 5.43±1.43 p1組 1.28±0.24 1.63±0.35 6.79±1.75 p2組 1.23±0.53 1.42±0.411)5.05±0.79

3 討論

單胺類神經(jīng)遞質(zhì)包括NE、DA、5-HT等。應(yīng)激狀態(tài)時(shí)這些指標(biāo)起到了非常重要的作用，檢測腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化對研究這類遞質(zhì)的生理、生化功能有重要意義。應(yīng)激反應(yīng)的重要特征之一是下丘腦-垂體-腎上腺軸激活，主要引起交感神經(jīng)興奮。許多實(shí)驗(yàn)證明單胺類神經(jīng)遞質(zhì)在應(yīng)激狀態(tài)下有改變，同時(shí)對機(jī)體應(yīng)激起著主要的調(diào)節(jié)作用。當(dāng)個(gè)體暴露于應(yīng)激中，腎上腺軸活性增強(qiáng)，導(dǎo)致腎上腺皮質(zhì)激素分泌增加，糖皮質(zhì)激素是主要的應(yīng)激激素之一，除能升高血壓外，還能影響腎上腺素α受體的表達(dá)，增加兒茶酚胺類的作用效果，同時(shí)還能通過對中樞神經(jīng)的影響，抑制前列腺素、緩激肽、5-HT等的合成，繼而引起血管收縮效應(yīng)。糖皮質(zhì)激素分泌增加還可以促進(jìn)腎小管的重吸收，增加血容量，從而升高血壓。在正常情況下，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的分泌保持在一定水平，并且他們之間的比例協(xié)調(diào)，從而維持功能穩(wěn)定。隨著應(yīng)激情況出現(xiàn)，單胺類神經(jīng)遞質(zhì)也相應(yīng)地發(fā)生改變，從而引起一系列功能紊亂癥狀的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)顯示，不同腦區(qū)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA、5-HT對異丙酚作用的敏感性不同，小劑量異丙酚組腦干、小腦5-HT明顯低于對照組，而小腦NE含量明顯高;大劑量異丙酚組腦干、小腦、皮質(zhì)DA含量升高，說明異丙酚對腦中樞神經(jīng)產(chǎn)生一定的影響，以改變其神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

1 Zhu W，Xie W，Pan T，et al.Comparison of neuroprotective and neurorestorative capabilities of rasagiline and selegiline against lactacystin-induced nigrostriatal dopaminergic degeneration〔J〕.J Neurochem，2008;105(5):19708.

2 Gonzalez MM，Aston-Jones G.Light deprivation damages monoamine neurons and produces a depressive behavioral phenotype in rats〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A，2008;105(12):4898-903.

3 Jahng JW，Kim NY，Ryu V，et al.Dexamethasone reduces food intake，weight gain and the hypothalamic 5-HT concentration and increases plasma leptin in rats〔J〕.Eur J Pharmacol，2008;581(1-2):64-70.

4 Park SS，Schulz EM，Lee D.Disnuption of dopamine homeostasis underlies selective neurodegeneration mediated by alpha-synuclein〔J〕.Eur J Neurosci，2007;26(11):3104-12.

5 李曉林，陸艷娟，李曉梅，等.束縛加懸吊應(yīng)激模型大鼠血清、腦組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量變化〔J〕.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2008;12(11)1349-51.

6 張 燕，王洪斌，楊海霞，等.熒光分光度法測定大鼠不同腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)〔J〕.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010;41(1):94-6.