Oct－2、Ki67蛋白在彌漫性大B細胞淋巴瘤亞型中的表達意義

劉 鈺，梅金紅，郭銀芳

（南昌大學第一附屬醫院a.質控科；b.病理科；c.病案室，南昌330006）

彌漫性大B細胞淋巴瘤（diffuse large B－cell lymphoma，DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤（NHL）中最常見的一種，約占成人NHL的35%～40%。在歐美國家，DLBCL的發病率約占NHL的30%，在亞洲國家發病率則更高。DLBCL具有惡性程度高，侵襲性強，治愈率低的特點，嚴重危害人類健康。因此對其研究和預防具有極其重要的意義。通過實驗了解腫瘤細胞的某些生物學特性，將有可能為DLBCL的診斷和治療提供有價值的參考指標以及理論依據［1］。2004年Hans等運用微陣列技術和免疫組化進行CD10、MUM1、bcl26三種免疫標記物染色，將DLBCL分為生發中心B細胞樣型（germinal center B cell like，GCB）和非生發中心B細胞樣型（nongerminal center B cell like，non GCB）亞型，并已得到國內外學者的廣泛認同。有報道稱Oct－2在DLBCL中呈彌漫性表達［2］，但對于其在后者分型中的表達情況沒有文獻提及，而DLBCL由于分型不同治療效果與預后截然不同。本研究若能通過對Oct－2在DLBCL生發中心型與非生發中心型中表達情況的分析，進一步了解后者的分型，將為提高DLBCL的臨床病理診斷準確性提供一定的線索。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集南昌大學第一附屬醫院自2007年1月至2009年11月DLBCL住院患者共60例，分為2個組：生發中心型組（32例），其中男19例，女13例，年齡25～65歲，平均年齡56.2歲；非生發中心型組（28例），其中男18例，女10例，年齡29～62歲，平均年齡55.4歲。

1.2 試劑與免疫組化染色

Oct－2鼠抗人單克隆抗體（工作液）、Ki67鼠抗人單克隆抗體（工作液）購自北京中杉金橋科技有限公司。羊抗鼠免疫球蛋白及DAB顯色劑購自福建邁新生物技術有限公司。DLBCL標本均常規固定、脫水、石蠟包埋、切片、HE染色和免疫組化染色。PBS代替一抗作為陰性對照，用已知陽性片作為陽性對照。

1.3 結果判定

Oct－2和Ki67陽性表達均為棕黃色顆粒定位于細胞核。判定標準：抗體陽性判斷標準按陽性細胞率計分：在高倍顯微鏡下，選取陽性密度較高的區域，在高倍視野下至少計數1 000個腫瘤細胞中的陽性細胞數。Ki67計數時血管內皮陽性細胞不計在內。Oct－2和Ki67陽性細胞數的百分率用標記指數（labeling index，LI）表示：LI＝陽性細胞數／1 000個腫瘤細胞×100%。無明顯陽性反應細胞或陽性細胞數＜20%為陰性（－）；陽性細胞數≥20%為陽性（＋）［3］。

1.4 統計學方法

采用SPSS15.0統計學軟件分析，2組表達率的差異用χ2檢驗法分析，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

32例生發中心型Oct－2有23例陽性表達，9例陰性表達，28例非生發中心型Oct－2有9例陽性表達，19例陰性表達。Oct－2在2組亞型DLBCL中的表達差異有統計學意義（P＝0.03）。32例生發中心型Ki67有25例陽性表達，7例陰性表達；28例非生發中心Ki67有23例陽性表達，5例陰性表達，Ki67在2組亞型DLBCL中的表達差異無統計學意義（P＝0.326）。在32例生發中心型組中Oct－2與Ki67陽性細胞表達情況，經χ2檢驗分析，2種蛋白在DLBCL生發中心型中的表達無差異（P＝0.315）；28例非生發中心型組中 Oct－2與 Ki67陽性細胞表達情況，經χ2檢驗分析，2種蛋白在DLBCL非生發中心型中的表達存在差異（P＝0.04）。

3 討論

2008年WHO淋巴瘤新分類明確了DLBCL的分類分子學亞型：生發中心B細胞樣、活化B細胞樣（也即非生發中心B細胞樣）。這兩種分子類型有明顯不同的預后，5年生存率分別為70%和12%，生發中心型明顯好于非生發中心型［4］。

Oct－2是B細胞特異性轉錄因子，正常狀況下Oct－2在所有成熟的B細胞中呈高水平表達，而在前B細胞、T細胞中呈低水平表達，在樹突狀細胞、巨噬細胞、內皮細胞以及胃腸道黏膜、皮膚、胸腺的上皮中不表達［5］。因而Oct－2的表達可視為B細胞分化的一種標志，其抗體可能對B細胞淋巴瘤的診斷有幫助。有研究表明，在正常淋巴結或淋巴結反應性增生中Oct－2主要表達在B細胞，在T細胞區表達很少［6］，有實驗表明Oct－2在大多數T細胞淋巴瘤為陰性表達［7］，由此推測通過對Oct－2的表達檢測有助于區別B細胞淋巴瘤和T細胞淋巴瘤。通過對Oct－2在31例DLBCL中行免疫組織化學染色，發現有25例呈強陽性表達，并且Oct－2免疫組織化學染色能夠使腫瘤組織中增生更加活躍的細胞成分染色更加明顯，故可以凸顯出某些類型B細胞淋巴瘤的特有的組織學結構［8］，推測Oct－2免疫組織化學染色可能對于B細胞淋巴瘤的進一步分型有幫助。此外，Oct－2蛋白的陽性表達與腫瘤的分化程度、侵襲性有關，與患者性別、年齡、腫瘤部位、大小無關［9］。通過此次實驗證明DLBCL的生發中心型中Oct－2的表達強度與其在非生發中心型中存在差異，提示Oct－2表達上調可能參與了生發中心型與非生發中心型的發病原因并且Oct－2的過表達與DLBCL生發中心來源有關。由此推測Oct－2可作為DLBCL分型的檢測指標。

在細胞周期中，除G0和G1早期以外，Ki67蛋白均有表達，功能與細胞的有絲分裂密切相關，因此，Ki67被認為是較理想的檢測細胞增殖活性的指標，廣泛地應用于測定各種腫瘤的增殖活性［10］。

陳健等［11］采用免疫組織化學與原位雜交技術對28例小兒惡性淋巴瘤組織中VEGF和Ki67進行檢測，探討VEGF和Ki67在小兒惡性淋巴瘤中的表達中發現，在正常淋巴組織中Ki67呈低水平表達，在惡性淋巴瘤組織中Ki67表達升高，其表達水平可以反映淋巴瘤的惡性程度，Ki67在小兒惡性淋巴瘤發生、發展中起重要作用。尹相叢等［12］對淋巴瘤患者60例和20例反應性增生淋巴組織和20例正常淋巴結組織分析發現，隨淋巴瘤惡性程度增高，Ki67表達水平逐漸增高，說明Ki67是評估淋巴瘤腫瘤細胞增殖的良好指標，與淋巴瘤侵襲有關，對淋巴瘤臨床分型、組織分級具有一定參考價值。

本實驗結果表明Oct－2在DLBCL中表達較廣泛，與相關文獻的報道相一致，并且在生發中心型中呈高陽性表達，可為DLBCL分型提供一定的參考價值。Oct－2在DLBCL的表達高低可能有助于臨床病理判斷其為生發中心型或非生發中心型。在生發中心型與非生發中心型中Ki67的陽性細胞表達率并不存在明顯的差異。由于DLBCL本身屬于惡性淋巴瘤的一種，從理論上講Ki67在生發中心型與非生發中心型都應該有高表達率。因此該實驗結果與Ki67作為測定各種腫瘤的增殖活性的性質是相符的。此外，通過統計學結果表明Oct－2與Ki67在DLBCL在生發中心型中的表達無差異，而二者在非生發中心型中的表達有差異，這一結果的出現考慮可能與病例數偏少以及生發中心型與非生發中心型兩種分型的基因型差異有關，這一點有待于進一步研究。

［1］ 邵劍峰，林茂芳，傅燕萍，等.非霍奇金淋巴瘤組織中survivin蛋白與p27蛋白的相關性［J］.實用醫學雜志，2006，22（21）：2476－2478.

［2］ 趙向榮，馬大烈.Oct－2蛋白在淋巴瘤中的表達及意義［J］.中華病理學雜志，2005，34（6）：337－340.

［3］ 廖琪，真酌，杜紹敏，等.CA125、Survivin和 Ki67在上皮性卵巢癌中表達及意義［J］.中國實用醫藥，2009，4（4）：113.

［4］ 彭晚嬌，姚麗青，鄭智勇.淋巴結外彌漫大B細胞淋巴瘤分子分型的病理學研究［J］.實用癌癥雜志，2010，25（1）：59－61.

［5］ Laurencikiene J，Deveikaite V，Severinson E.HS1，2enhancer regulation of germline epsilon and gamma2bpromoters in murine B lymphocytes：evidence for specific promoter－enhancer interactions［J］.J Immunol，2001，167：3257－3265.

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［7］ Pfisterer P，Konig H，Hess J，et al.CRISP－3，aprotein withhomology to plant defense proteins，is expressed in mouse B cellsunder the control of Oct2［J］.Mol Cell Biol，1996，16：6160－6168.

［8］ Scholer H R，Ruppert S，Suzuki N，et al.New type of POU domain in germline specific protein Oct－2［J］.Nature，1990，3444（6265）：435－439.

［9］ Trosko J E.From adult stem cells to cancer stem cells：Oct－2 gene，cell－cell communication，and hormones during tunlorpromotion［J］.Ann N Acad Sci，2006，1089（1）：36－58.

［10］ 劉剛，俞薇薇.EBV、ki67、ERK1在乳腺癌中的表達及其相關性［J］.實用臨床醫學，2008，9（3）：129－130.

［11］ 陳健，蔣敏，高明太，等.小兒惡性淋巴瘤中血管內皮生長因子和Ki67的表達及其相互關系［J］.蘭州大學學報：醫學版，2010，36（2）：44－47.

［12］ 尹相叢，楊金平，李貴新，等.nm23、ki67在惡性淋巴瘤中的表達及意義［J］.山東醫藥，2009，49（2）：97－98.