浙江畬族群體X染色體四個基因座遺傳多態性

吳淑珍，夏露，陳引蕾，龐玲霞

（1.溫州醫學院 基礎醫學實驗中心，浙江 溫州 325035；2.溫州醫學院附屬第二醫院 婦產科，浙江 溫州 325027）

人類X染色體有著獨特的遺傳方式，男性的基因組中呈單倍型形式存在，遺傳方式獨特——父親的等位基因只能遺傳給女兒，所以它具有一些常染色體遺傳標記所無法比擬的優點，特別適用于法醫學實踐中在父母缺如情況下姐妹之間的同胞親緣鑒定，這種獨特的遺傳方式已引起了一些法醫工作者的注意[1-2]。對浙江畬族常染色體的STR基因座的遺傳多態性已有研究[3]，但有關X染色體STR基因座的多態性資料鮮見。由于同樣的遺傳標記在不同的群體中，其遺傳多態性是不同的，為了觀察浙江畬族群體中X-STR基因座的遺傳多態性，我們對浙江畬族的DXS7132、DXS6804、DXS6799、DXS9898基因座進行遺傳學調查，并結合本實驗室對其他民族研究的數據庫進行分析，為研究中華民族群體起源、人群遺傳差異、法醫學個體識別等提供基礎資料。

1 對象和方法

1.1 對象 樣本的采集根據知情同意的原則，260份（女145，男115）畬族血樣取自無血緣關系且3代內無族外通婚的浙江景寧畬族個體。

1.2 方法

1.2.1 DNA的提?。貉簶颖静捎肊DTANa2抗凝，Chelex-100快速法[4]提取DNA。

1.2.2 引物序列：DXS7132、DXS6804、DXS6799、DXS9898 4個基因座的引物序列參照基因組數據庫（www.gdb.org）， 基本信息見表1，由上海捷瑞生物工程公司合成。引物序列見表2。

表1 浙江畬族四個X-STR基因座的特性

表2 浙江畬族四個X-STR基因座的引物序列

1.2.3 PCR擴增條件：PCR反應采用PC-818型基因擴增儀，總反應體系為20μL，反應管混合物中含10×緩沖液2.0μL，20μmol/L 引物0.2μL，25 mmol/L MgCl21.2μL，加入2.0μL模板DNA上清液（1 ng～1μg），1.0 U Taq酶，補水11.6 μL，冰上無菌操作。擴增條件：94 ℃變性5 min，然后94 ℃變性35 s，58 ℃退火35 s，72 ℃延伸40 s，循環35次后，72 ℃保持10 min，4 ℃保存。

1.2.4 聚丙烯酰胺凝膠電泳：采用6%聚丙烯酰胺凝膠（Acr:Bis=29:1，C=5%）分型，凝膠板厚0.6 cm，長19 cm，寬12 cm，恒電壓500 V，泳動1.5 h，銀染檢測，檢測結果用數碼相機拍照保存在電腦中。

1.2.5 等位基因分型標準物的制備[5]：采用PCR-聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）-切膠回收-二次PCR-測序的方法制備X-STR基因座等位基因分型標準物，并以測序結果按重復單位重復次數命名等位基因。

1.2.6 數據處理：對每個樣品逐個分型并記錄基因型。在Internet網上Promage公司網站http://www.proage.com/geneticidtools/powerstates/Power State Software 軟件進行數據統計分析，得出各基因座的等位基因及基因型頻率、觀察雜合度（heterozygosity，HO）、個體識別力（power of discrimination，PD）、多態信息含量（polymorphism information contene，PIC），按文獻[6-7]計算男性單倍型頻率、基因多樣性、個體識別力。

2 結果

2.1 浙江畬族群體4個X染色體基因座基因頻率分布、群體遺傳學指標 見表3-6。

表3 浙江畬族四個X-STR基因座的等位基因分布頻率

2.2 基因座測序結果 見圖1-4。

表4 浙江畬族女性群體四個X-STR基因座的等位基因分布頻率

表5 浙江畬族男性群體四個X-STR基因座的單倍型分布

接上表

表6 浙江畬族四個X-STR基因座的等位基因群體統計數據

圖1 DXS7132基因座的核心序列為[GATA]，含等位基因12的測序結果

圖2 DXS6804基因座的核心序列為[TATC]，含等位基因11的測序結果

圖3 DXS6799基因座的核心序列為[TATC]，含等位基因11的測序結果

圖4 DXS9898基因座的核心序列為[TATC]，含等位基因8.3的測序結果

3 討論

長期以來人類起源、進化和遷移的研究是通過經典的考古學、語言學以及形態學等方法實現的。分子生物學研究的引入，為我們了解人類群體和個體間的關系提供了有力的工具，通過對DNA的分析可以對人類的起源及群體的遷移狀況進行研究。因浙江畬族主要居住在浙江省景寧自治縣及周邊的縣市，這些居住地主要是山區，人口流動少，相對封閉，所以基因型的遺傳相對比較保守，是我們研究群體遺傳學比較難得的寶貴資源。

由于人類X染色體有著獨特的遺傳方式，在男性的基因組中呈單倍型形式存在，父親的等位基因只能遺傳給女兒，所以它具有一些常染色體遺傳標記所無法比擬的優點。我們選擇了DXS7132、DXS6804、DXS6799、DXS9898基因座對浙江畬族進行了基因型分布的研究，獲得這四個基因座的群體遺傳學數據，結果發現，四個基因座的基因型分布均符合Hardy-Weignberg平衡，男性個體單倍體的多樣性為0.9878，除DXS6799基因座外，其他3個基因座的多態信息含量均大于0.6195（該值大于0.5有高度可提供信息性）[8]。聯合應用這4個基因座，有較高的識別能力和遺傳穩定性，為研究畬族群體的起源、人群遺傳差異、法醫學個體識別等提供基礎資料。

雖然X染色體STR基因座具有高度的多態性，但在鑒定中只能起到排除作用，要作出肯定的結論，必須與常染色體、Y染色體的多態性標記相結合。

將本研究結果與其他民族、地區人群的數據比較，DXS7132基因座在匈牙利人群中檢出等位基因11與19[9]，在阿爾及利亞人群中檢出等位基因11[10]，DXS9898基因座在朝鮮人群中檢出等位基因0a與等位基因16[11]，在葡萄牙人群中檢出的等位基因型與本研究結果一致[12]。

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