葛根素微丸制備及含量測定方法

常乃丹，于 輝，彭海生，張 寧

哈爾濱醫科大學大慶校區藥學系，黑龍江大慶 163319

葛根素微丸制備及含量測定方法

常乃丹，于 輝，彭海生，張 寧

哈爾濱醫科大學大慶校區藥學系，黑龍江大慶 163319

目的：制備葛根素微丸，建立葛根素微丸中葛根素含量測定的方法。方法：離心造粒法制備葛根素微丸。HPLC法測定葛根素的含量，色譜條件為C18柱，以甲醇-水（30∶70）為流動相，流速為1.0 ml/min，檢測波長為250 nm。結果：所制備的微丸產率達80%以上，葛根素含量在0.025～0.500 μg之間線性關系良好，平均回收率為98.44%，RSD為1.14%。結論：本法簡便、準確、重復性好，可用于葛根素微丸的制備和質量控制。

葛根素；微丸；離心造粒；高效液相色譜法

葛根素是從中藥葛根中提取的有效成分之一，具有調節血管活性物質、改善微循環、減輕鈣超載等作用，已廣泛應用于各型心血管疾病的治療[1]?，F有劑型有片劑、注射劑等，本文將葛根素制成微丸，具有外形美觀、流動性好、載藥量大、釋藥穩定、生物利用度高、局部刺激小等優點[2-3]。本實驗采用離心制丸的方法，使用多功能滾圓機對葛根素微丸的制備進行了研究，結果顯示所制備的葛根素微丸成型性好、易于控制、生產設備較為簡單，并建立了測定葛根素含量的HPLC方法，分析快速、簡便、可靠性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

CGC-350多功能滾圓機 （重慶英格造粒包衣技術有限公司）、高效液相色譜儀（SPD-20，日本島津）、KH3200DE 型數控超聲波清洗器 （昆山禾創超聲儀器有限公司）、101-4-BS電熱恒溫鼓風干燥箱（上海躍進醫療器械廠）、電子天平（沈陽龍騰電子有限公司）。

1.2 試藥

葛根素提取物（西安潤堡生物科技有限公司，產品規格：葛根素99%，批號：20101113）、微晶纖維素、羥丙甲基纖維素、超純水、50%甲醇（色譜純）。

2 方法與結果

2.1 葛根素微丸的制備[4-5]

2.1.1 丸芯的制備

定量稱取微晶纖維素干燥粉末200 g投入滾圓機的容器轉盤上，噴入純凈水作為粘合劑，將機器參數設置為：轉盤轉速250 r/min、鼓風頻率10 Hz、進風溫度10℃、蠕動泵轉速20 r/min，隨著轉盤不斷旋轉并鼓風，逐漸形成較大粒子獲得球形母核，少量多次加入微晶纖維素，控制轉盤內粒子的濕度、粒徑及圓整度，不斷包敷使母核逐漸增大，至圓整度較好時從出料口取出，置于烘箱中經5～6 h烘干，過篩即得丸芯。

2.1.2 微丸的制備

稱取所制備葛根素丸芯適量置滾圓機的轉盤上，噴入3%的羥丙甲基纖維素溶液作為粘合劑，將機器參數設置為：轉盤轉速140 r/min，鼓風頻率28 Hz，進風溫度10℃，蠕動泵轉速10 r/min，待轉盤勻速運轉并使丸芯得到足夠潤濕后少量多次加入葛根素提取物，使葛根素均勻地包敷于丸芯上，控制其圓整度和濕度，待葛根素微丸逐漸長大，圓整度良好時，可減慢轉速，打開出料閥，將微丸置于烘箱中5～6 h，過篩即得葛根素微丸。

2.1.3 收率

采用篩析法，取50 g微丸，手工篩分，計算24～18目微丸的百分重量比，結果為81.6%。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件[6]

色譜柱采用伊力特Hypersil OSD C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；檢測器：日本島津 SPD-20A；流動相：甲醇-水=30∶70，等濃度洗脫；流速：1.0 ml/min；檢測波長：250 nm；柱溫：室溫；進樣量：10 μl；理論塔板數按葛根素峰計算應不低于4 000，分離度應大于1.5。

2.2.2 溶液的配制[7-8]

2.2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取葛根素對照品0.005 0 g，置50ml容量瓶中，加50%的甲醇至刻度，搖勻，超聲處理30min，作為貯備液（100 μg/ml）。

2.2.2.2 供試品溶液制備 取所制備的葛根素微丸約1 g，置研缽中研細，取約0.5 g，精密稱定，置50 ml容量瓶中，加入50%的甲醇置刻度，密塞，稱定重量，搖勻，超聲（功率250 W，頻率30 kHz，溫度20℃）處理30 min，放冷后再稱定重量，用50%的甲醇補足缺失重量，搖勻，經微孔濾膜（0.45 μm）過濾，取續濾液即得。

2.2.2.3 陰性對照溶液制備 取不含葛根素的陰性試劑（葛根素微丸丸芯），按供試品溶液的制備方法制備即得。

2.2.3 專屬性試驗

按含量測定的方法測定HPLC色譜圖，并進行專屬性考察，結果提示陰性溶液無干擾。見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2.4 線性關系考察

精密量取對照品貯備溶液（100 μg/ml），分別制成濃度為 50.0、25.0、10.0、5.0、2.5、1.0 μg/ml的 6 個樣品， 分別吸取10 μl，按上述色譜條件進樣，測得峰面積。以峰面積A為縱坐標，以葛根素的進樣量X（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，并求得回歸方程為：A=8.656×104X+5.203×103，r=0.999 7。 結果表明，葛根素的進樣量在0.025～0.500 μg范圍內具有良好的線性關系。

2.2.5 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液（25 μg/ml）10 μl，按上述色譜條件，連續進6次，測定峰面積，6次測定的峰面積平均值為2 109 529，RSD=2.32%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩定性試驗

精密吸取同一供試品溶液（5 μg/ml），在 0、2、4、6、8、10、12、24 h 內，分別進樣 10 μl，按上述色譜條件測定，RSD=1.25%，表明供試品溶液在24 h內化學性質穩定。

2.2.7 重復性試驗

精密稱取葛根素提取物，按供試品溶液的制備方法制備，用HPLC按含量測定方法測定，進樣6次。測定結果顯示，葛根素的平均含量為0.11 g/g，RSD為5.3%。

2.2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的樣品5份，每份約0.25 g，分別精密加入葛根素對照品溶液，按含量測定的方法測定，計算回收率，結果表明葛根素的回收率良好，見表1。

表1 加樣回收率試驗

2.2.9 樣品含量測定

精密稱取適量的葛根素微丸，按供試品溶液的配制方法制備，在上述色譜條件下對3批葛根素微丸溶液進行HPLC分析，結果第1批葛根素含量為0.11 g/g、第2批葛根素含量為0.09 g/g、第3批葛根素含量為0.11 g/g，平均值為0.10 g/g。

3 討論

本實驗制丸所用材料均為常用輔料，價格低廉；噴液、撒粉、干燥同時進行，周期較短；但是由于多功能滾圓機蠕動泵與物料距離較近，使潤濕劑霧粒到達物料表面的距離明顯縮短，附著力較強，在操作過程中要注意控制轉速的穩定和添加輔料的頻率，避免粘粒；制粒過程中由經過窄縫的熱空氣進行干燥，風量較小，干燥強度較低，不致使物粒過早干燥；用粉末制丸時初始階段有粉末飛揚，可采取適量增加潤濕劑的方法用以消除；在制備丸芯的過程中，由于所用的潤濕劑為水，粘合強度較成丸過程中所用的羥丙甲基纖維素溶液小，因此在制備微丸的過程中轉盤轉速應稍大于制備丸芯時的轉速，避免物料粘在制丸機容器壁。

通過用50%甲醇、75%甲醇以及30%的乙醇對同一條件下的相同樣品進行溶解顯示，在實驗所采取的色譜條件下，50%的甲醇測定相同樣品含量準確，峰形好，分離度高，故本實驗采用50%的甲醇作為溶劑。

先后用甲醇-水-冰醋酸（25∶75∶0.2）、乙腈-水（10∶90）、甲醇-水（25∶75）、甲醇-水（30∶70）為流動相，結果在甲醇-水（30∶70）的條件下，供試溶液中的葛根素與相鄰組分分離度好，陰性樣品無干擾。故結合本實驗所采取的實驗條件，選用甲醇-水（30∶70）為流動相，測定結果顯示具有良好的線性關系。

[1]蔡志春,王松青,方云祥.葛根素對溶血磷脂酰膽堿誘導血管平滑肌細胞基質金屬蛋白酶-9表達的影響[J].中國醫藥導報,2010,7(11):15-17.

[2]袁亮,張建琴,林婷婷,等.離心造粒法制備復方丹參微丸[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16(5):10-14.

[3]王錦玉,仝燕,王智民,等.牛黃上清微丸的制備工藝[J].中國實驗方劑學雜志,2010,16(17):10-14.

[4]李曉明,陶秀梅,王曉麗,等.應用離心造粒法制備鹽酸二甲雙胍微丸的研究[J].西安交通大學學報:醫學版,2008,29(5):590-594.

[5]許小紅,趙東虎,王道均.離心造粒法制備貫葉連翹提取物微丸[J].中國藥師,2010,13(9):1283-1285.

[6]李東輝.HPLC測定參蘇感冒片葛根素的含量[J].中國藥事,2008,22(2):135-136.

[7]顧方,李欽,陳曉文,等.HPLC法測定復方冬紅合劑中葛根素含量[J].現代中西醫結合雜志,2010,19(7):908-909.

[8]程杰,劉姣,楊旭杰,等.HPLC法測定愈風寧心軟膠囊中葛根素的含量[J].河北中醫藥學報,2010,25(1):35-36.

Preparation and the content determination of Puerain Pellets

CHANG Naidan,YU Hui,PENG Haisheng,ZHANG Ning
Department of Pharmacy,Daqing Campus of Harbin Medical University in Heilongjiang Province,Daqing 163319,China

Objective:To prepare Puerain Pellets and establish a method for determining the content of Puerain in Puerain Pellets.Methods:The Puerain Pellets were prepared by using a centrifugal granulator.The HPLC method was established for determination of Puerarin in Puerarin Pellets.A ODS C18column was adopted.The mobile phase was methanol-water solution (30∶70)with the flow rate of 1.0 ml/min.The detection wavelength was 250 nm.Results:The productivity was more than 80%,the linearity range was 0.025-0.500 μg,The average recovery of Puerarin was 98.44%,RSD was 1.14%.Conclusion:The method is simple,precise and reliable,which is suitable for preparing and determining Puerain Pellets.

Puerain;Pellets;Centrifugal granulation;HPLC

R927.2

A

1673-7210（2011）10（c）-060-03

常乃丹（1983-），女，本科學歷，主要從事藥物制劑研究。

于輝（1968-）女，本科學歷，副教授，主要從事藥物制劑研究。

2011-07-01）