HPLC測(cè)定荷葉中堿鹽的含量

閻 娜王煒華李 俶劉成梅王一銘

（1.南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047；2.南昌濟(jì)順制藥有限公司，江西 南昌 330008）

HPLC測(cè)定荷葉中堿鹽的含量

閻 娜1王煒華1李 俶1劉成梅1王一銘2

（1.南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047；2.南昌濟(jì)順制藥有限公司，江西 南昌 330008）

以荷葉為原料，建立一種荷葉堿鹽含量的測(cè)定方法。運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定，色譜柱為Hypersil ODS2（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈－磷酸鹽緩沖溶液（0.05% 磷酸－0.2%三乙胺－水）（25∶75，V/V），流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。結(jié)果顯示，荷葉堿鹽在0.053～0.159mg/mL（R2＝0.999 2）范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，平均回收率為96.4%，RSD為0.05%。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好，可用于荷葉堿鹽成分的含量測(cè)定。

荷葉堿鹽；含量測(cè)定；高效液相色譜

荷葉為睡蓮植物蓮（nelumbo nucifera gaertn）盛產(chǎn)于江西、福建、湖南和浙江等省。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，荷葉味苦、平，歸肝、脾、胃、經(jīng)，具有清熱解暑、升發(fā)清陽(yáng)、涼血止血之功效［1］，可用于暑熱煩渴、暑濕泄瀉、便血便漏。現(xiàn)代藥理學(xué)研究［2］表明，荷葉生物堿有降脂減肥、抑菌、抗病毒、抗氧化等活性。荷葉中的生物堿是荷葉的主要功能因子之一，一般難溶于水，而生物堿鹽易溶于水［3］，且穩(wěn)定，易被人體吸收。趙俊等［4］曾經(jīng)研究過(guò)荷葉中生物堿與生物堿鹽的降血脂作用，結(jié)果顯示生物堿鹽的效果要更好。有關(guān)荷葉堿鹽的含量測(cè)定方法鮮見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)建立了一種測(cè)定荷葉中堿鹽含量的HPLC方法，為荷葉堿鹽的相關(guān)研究提供一定依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

荷葉堿對(duì)照品：含量＞99%，購(gòu)自江西省藥品檢驗(yàn)所；

荷葉：江西省安遠(yuǎn)縣；

甲醇、乙腈：色譜純，天津市大茂化學(xué)試劑廠；

水：雙蒸水，由Millipore Simplicity超純水系統(tǒng)制得；

其它所用試劑：均為分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀：Agilent 1200，安捷倫科技有限公司；

紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器：G1314BVWD，安捷倫科技有限公司；

四元泵：G1311A，安捷倫科技有限公司；

色譜工作站：Agilent LC Chemstation，安捷倫科技有限公司；

1.3 方法

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil ODS2柱（250mm ×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈－磷酸鹽緩沖溶液（0.05%磷酸－0.2%三乙胺－水）（25∶75，V/V）；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm；柱溫：25℃，進(jìn)樣量：20μL。

1.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取荷葉堿對(duì)照品20mg放至25mL容量瓶中，加pH＝2.6的磷酸稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1.32mg/mL的溶液，備用。

1.3.3 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)取粉碎后過(guò)60目篩的荷葉粉2g，至于圓底燒瓶中，加入pH 2.0的乙醇溶液80mL，回流提取2h，提取2次，合并提取液，全部轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，定容，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾，即得。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取荷葉堿鹽對(duì)照品溶液 1.0，1.5，2.0，2.5，3.0mL，分別置于25mL容量瓶中，加超純水稀釋至刻度。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)圖1。從圖1可得出其回歸方程為：y＝46 629x＋71.308，R2＝0.999 2，表明荷葉堿鹽在0.053～0.159mg/mL范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系。

圖1 荷葉堿鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 1 The standard curve of Nuciferine Salt

圖2為荷葉堿鹽對(duì)照品的液相色譜圖，圖3為樣品的液相色譜圖。通過(guò)對(duì)照，可以說(shuō)明在上述條件下荷葉堿鹽能夠和其他組分達(dá)到基線分離，出峰時(shí)間在11.5min左右。

圖2 荷葉堿鹽對(duì)照品液相色譜圖Figure 2 The reference standard of Nuciferine Salt

圖3 供試品溶液液相色譜圖Figure 3 The chromatogram of sample

2.2 精密度考察

精密吸取對(duì)照品溶液20μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定荷葉堿鹽峰面積積分值，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，本方法的精密度良好，RSD為0.96%。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Precision of Nuciferine Salt（n＝6）

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于配制后0，2，4，8，12，24h依法分析測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定，測(cè)定結(jié)果均無(wú)顯著變化，RSD為1.5%。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Stability of Nuciferine Salt（n＝6）

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取荷葉供試品5份，依法分析測(cè)定，計(jì)算荷葉堿鹽含量，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明，RSD為1.0%，說(shuō)明該法重現(xiàn)性好。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Repeatability of Nuciferine Salt（n＝5）

2.5 回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量（0.031 3%）的同批荷葉1g，共5份。分別精密加入荷葉堿鹽對(duì)照品溶液（0.010 6mg/mL）各1mL，按上述供試品溶液的配制方法及色譜條件，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果平均回收率為96.4%，RSD＝0.05%。表明測(cè)定方法準(zhǔn)確、可靠。

表4 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 4 Average recoveries of Nuciferine Salt（n＝5）

2.6 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取對(duì)照品荷葉堿鹽溶液適量，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于200～800nm［5］波長(zhǎng)段掃描，荷葉堿鹽在270nm處有最大吸收，故選定270nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)采用高效液相色譜法建立了荷葉中的荷葉堿鹽成分的檢測(cè)方法。荷葉堿鹽在0.053～0.159mg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，R2＝0.999 2，平均回收率為96.4%，RSD＝0.05%。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好，可用于荷葉堿鹽成分的含量測(cè)定。

1 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000：231.

2 朱秀萍，徐翔.荷葉生物堿研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥房，2008，19（6）：459～461.

3 肖培根，李連達(dá)，劉勇.重要保健食品安全性評(píng)估系統(tǒng)的初步研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2005，30（1）：9～11.

4 趙俊，高嵐，齊召朋.荷葉總生物堿及其鹽的提取和降脂作用的比較［J］.天津中醫(yī)藥，2005，22（2）：161.

5 曾建國(guó)，張靜，羅煉輝.博落回總生物堿鹽及其制備方法和應(yīng)用：中國(guó)，200510032062.1［P］.2006－03－01.

Study on determination of nuciferine salt by HPLC

YAN Na1WANG Wei－h(huán)ua1LI Ti1LIU Cheng－mei1WANG Yi－ming2

（1.State Key Laboratory of Food Science and Technology，Nanchang University，Nanchang，Jiangxi330047，China；2.NanChang Jishun Pharmaceutical Co.Ltd，Nanchang，Jiangxi330008，China）

To establish an HPLC method for the determination of nuciferine salt on lotus leaf.Methods：Analyses were carried out on Hypersil ODS2（4.6mm×250mm，5μm）column with acetonitrile：0.05%phosphoric acid－0.2%triethylamine－water（25∶75，V/V）as the mobile phase.The flow rate was 1.0mL/min and the UV detection wavelength was 270nm.Results indicated，Linearities of nuciferine salt was good in the ranges of 0.053～0.159mg/mL（R2＝0.999 2）.The average recovery was 96.4%，andRSDwas 0.05% （n＝6）.The method was simple，accurate，sensitivity and reproducible.The method can be used to the determination of nuciferine salt.

nuciferine salt；determination；HPLC

10.3969/j.issn.1003－5788.2011.03.021

閻娜（1986－），女，南昌大學(xué)在讀碩士研究生。E－mail：dogsday10＠163.com

李俶

2011－03－05