湖北省規模化養鴨主要疫病流行情況調查

摘要：對２００６～２００９年湖北省規模化養鴨主要疫病的流行情況進行實地調查和實驗室診斷。共調查７個地（市）７９個養鴨戶和養鴨場１８２ ８５０只鴨的主要疾病流行情況。成年鴨主要疾病有禽流感、鴨瘟、副粘病毒病、巴氏桿菌病、大腸桿菌和沙門氏菌混合感染等，調查３６群成年鴨共８３ ２００只，其中發病２６ ８９０只，發病率３２．３％；死亡６ ７３７只，病死率２５．１％；對產蛋鴨生產性能均有不同程度影響。雛鴨的主要疾病有鴨病毒性肝炎、鴨疫里默氏桿菌病、大腸桿菌病和沙門氏菌病等，調查４３群雛鴨共９９ ６５０只，其中發病１９ ７２０只，發病率１９．８％；死亡５ ５４１只，病死率２８．１％。從采集的病料中分別分離到７株禽流感病毒、３株副粘病毒和３株鴨肝炎病毒；分離到１７株鴨疫里默氏桿菌、３６株大腸桿菌、９株巴氏桿菌等病原菌。

關鍵詞：鴨；流行病學調查；病原分離鑒定；湖北省

中圖分類號：Ｓ８５８．３２ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０11）23－4896-04

Ｅｐiｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｔｈｅ Ｍａｉｎ Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ Ｄｕｃｋｓ ｉｎ Ｈｕｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ

ＹＡＮＧ Ｊｕｎ，ＬＵＯ Ｑｉｎｇ－ｐｉｎｇ，ＡＩ Ｄｉ－yｕｎ，ＬＵＯ Ｌｉｎｇ，ＷＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｌｉｎ，ＷＥＮ Ｇｕｏ－ｙｕａｎ，

ＺＨＡＮＧ Ｒｏｎｇ－ｒｏｎｇ，ＳＨＡＯ Ｈｕａ－ｂｉｎ

（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ / Ｈｕｂｅｉ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｅｍｂｒｙｏ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ， Ｗｕｈａｎ ４３００７０， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｉｎ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ ｓｃａｌｅ ｄｕｃｋ－ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｆａｒｍｓ ｆｒｏｍ ２００６ ｔｏ ２００９ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｏｎ－ｓｉｔｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ． １８２ ８５０ ｄｕｃｋｌｉｎｇｓ ａｎｄ ｄｕｃｋｓ ｆｒｏｍ ７９ ｄｕｃｋ ｆａｒｍｓ ｉｎ ７ ｄｉｓｔｒｉｃｔｓ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｕｃｋｓ ｗｅｒｅ ｍａｉｎｌｙ ｍｉｘ－ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｖｉａｎ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ， Ｄｕｃｋ ｐｌａｇｕｅ ｖｉｒｕｓ，ａｖｉａｎ Pａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ ｖｉｒｕｓ， ａｖｉａｎ Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ mｕｌｔｏｃｉｄａ， Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ａｎｄ ａｖｉａｎ ｓａｌｍｏｎｅｌｌｏｓｉｓ． Ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ８３ ２００ ｄｕｃｋｓ ｆｒｏｍ ３６ ｆｌｏｃｋｓ， ２６ ８９０ ｄｕｃｋｓ ｗｅｒｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ， ａｎｄ ６ ７３７ ｄｕｃｋｓ ｄｉｅｄ， ｔｈｅ ｍｏｒｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｍｏｒｔｉｌｉｔｙ ｗａｓ ３２．３％ ａｎｄ ２５．１％， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｄｕｃｋｌｉｎｇｓ ｗｅｒｅ ｍａｉｎｌｙ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｄｕｃｋ ｖｉｒａｌ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ， Ｒｉｅｍｅｒｅｌｌａ ａｎａｔｉｐｅｓｔｉｆｅｒ， Ｅ. ｃｏｌｉ ａｎｄ ａｖｉａｎ ｓａｌｍｏｎｅｌｌｏｓｉｓ． Ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ９９ ６５０ ｄｕｃｋｌｉｎｇｓ ｆｒｏｍ ４３ ｆｌｏｃｋｓ，１９ 7２０ ｄｕｃｋｌｉｎｇｓ ｗｅｒｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ａｎｄ ５ ５４１ ｄｕｃｋｌｉｎｇｓ ｄｉｅｄ， ｔｈｅ ｍｏｒｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｍｏｒｔｉｌｉｔｙ ｗａｓ １９．８％ ａｎｄ ２８．１％， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｆｒｏｍ ｔｈｅｓｅ ｓａｍｐｌｅｓ， ７ ＡＩＶ ｓｔｒａｉｎｓ， ３ Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ ｖｉｒｕｓ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ３ ＤＨＶ ｓｔｒａｉｎｓ， １７ Ｒ. ａｎａｔｉｐｅｓｔｉｆｅｒ ｓｔｒａｉｎｓ， ３６ Ｅ. ｃｏｌｉ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ９ ａｖｉａｎ Ｐ. mｕｌｔｏｃｉｄａ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄs： dｕｃｋ； eｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ； iｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｙ； Hubei province

隨著全球氣候變暖、養殖規模擴大、市場交流頻繁和環境污染不斷加劇，近幾年鴨病出現了一些新的流行動態，即對水禽不致病的禽流感病毒成為主要病原，強毒株的感染能導致不同年齡鴨的大批死亡；副粘病毒感染能致鴨死亡，成為一種新的病原［１－３］；新型肝炎病毒給疫病防控帶來困難［４］；細菌病原的耐藥性、病毒病原的變異與新的病毒出現［５－７］、多種病原的混合感染等因素給鴨病防控工作帶來巨大障礙。為了給規模化養鴨疾病防控提供依據，對本實驗室２００６～２００９年湖北省規模化養鴨主要疫病流行情況的調查資料和實驗室診斷資料進行總結分析，對主要鴨病的流行特點進行了描述，供臨床防控參考。

１ 材料與方法

１．１ 流行病學調查與病料取樣

根據湖北省近幾年規模化養鴨發展情況，重點調查５ ０００只以上的種鴨場和２ ０００以上的商品肉鴨、蛋鴨養殖戶，實地調查記錄發病鴨日齡、精神、食欲、發病率、死亡率、臨床癥狀、病理解剖變化、免疫情況和蛋鴨的產蛋狀況。對當日死亡的鴨解剖取樣，主要取肺、腦、脾、肝等實質器官組織，冷藏保存送實驗室檢測。對主要傳染病發病鴨群跟蹤調查，檢測自然感染鴨的抗體消長情況，評價疾病對生產造成的損失。送檢病料需記錄病料來源及發病情況，跟蹤疾病造成的損失和康復過程。

１．２ 病毒病的檢測

根據發病鴨臨床癥狀及流行病學特點作出初步判斷，實驗室首先進行ＰＣＲ檢測，提出病毒分離方案，然后進行病原分離鑒定［８］。

１．２．１ 引物設計 在參考美國國家生物信息數據庫（ＮＣＢＩ）中已發表的病毒核酸序列的基礎上，尋找病毒的保守區域，共設計合成了４對ＰＣＲ引物，分別用于檢測禽流感病毒、禽副粘病毒、鴨瘟病毒和鴨病毒性肝炎病毒。引物序列如下：禽流感病毒擴增引物（跨度５４１ ｂｐ）：ＰＰ３：５′-ＴＧＧ ＣＡＧ ＧＧＡ ＡＴＧ ＧＴＡ ＧＡＴ Ｇ-３′，ＰＰ４：５′-ＴＡＧ ＧＧＡ ＡＣＴ ＣＧＣ ＣＡＣ ＴＧＴ ＴＧ-３′；禽副粘病毒ＰＣＲ檢測引物（跨度２５０ ｂｐ）：Ｎ１：５′-ＧＣＴ ＣＧＧ ＴＴＣ ＧＴＣ ＧＡＣ ＡＡＴ ＣＴ-３′，Ｎ２：５′-ＧＧＧ ＡＴＣ ＧＣＧ ＣＴＴ ＧＴＴ ＴＣＡ Ａ-３′；鴨瘟病毒ＰＣＲ檢測引物（跨度４９８ ｂｐ）：Ｄ１： ５′-ＧＧＡ ＣＡＧ ＣＧＴ ＡＣＣ ＡＣＡ ＧＡＴ ＡＡ-３′，Ｄ２： ５′-ＡＣＡ ＡＡＴ ＣＣＣ ＡＡＧ ＣＧＴ ＡＧ-３′；鴨病毒性肝炎病毒（ＤＨＶ Ⅰ型）ＰＣＲ檢測引物（跨度４４０ ｂｐ）：Ｆ４４０：ＡＣＡ ＡＴＧ ＡＣＣ ＣＡＧ ＣＣＴ ＴＡＧ，Ｒ４４０：ＣＣＡ ＣＴＧ ＴＡＴ ＣＴＴ ＣＣＣ ＴＴＣ。

１．２．２ 用于檢測鴨瘟病毒病料的ＤＮＡ提取 將病料進行充分研磨（病料1 g加4 mL ＰＢＳ），反復凍融３次，４ ℃ １２ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心１０ ｍｉｎ，取上清液５００ μＬ，加入蛋白酶Ｋ至終濃度為５００ μｇ／ｍＬ，ＳＤＳ至終濃度為１％，充分混勻后，置５５ ℃水浴作用３０ ｍｉｎ。然后用Ｔｉｒｓ飽和酚抽提１次，吸取水相，加１／１０體積３ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＡｃ及２．５倍體積無水乙醇沉淀，離心棄上清。沉淀用７５％乙醇洗滌，自然涼干后溶解于一定量的滅菌去離子水中，作為ＰＣＲ擴增模板。

１．２．３ 鴨瘟病毒ＰＣＲ反應體系 組成為：１０×ＰＣＲ Bｕｆｆｅｒ ５ μＬ，ｄＮＴＰｓ（２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ）４ μＬ，ＭｇＣｌ２（２５ ｍｍｏｌ／Ｌ）３ μＬ，ＰＣＲ上、下游引物各１ μＬ，模板ＤＮＡ ２ μＬ，ｒＴａｑ酶（５ Ｕ／μＬ）０．５ μＬ，加滅菌超純水至５０ μＬ。反應條件為：９５ ℃預變性１０ ｍｉｎ；按９４ ℃變性１ ｍｉｎ，５４ ℃退火１ ｍｉｎ，７２ ℃延伸１．５ ｍｉｎ，共進行３３個循環；最后７２ ℃延伸１０ ｍｉｎ。ＰＣＲ產物用２％瓊脂糖凝膠進行電泳，紫外燈下觀察其擴增片段大小。以出現特異且大小相符條帶的樣品為陽性。

１．２．４ 用于檢測禽流感病毒、禽副粘病毒、鴨病毒性肝炎病毒病料的ＲＮＡ提取 取步驟１．２．２ 制備的２００ μＬ組織病料懸浮液上清，加入８００ μＬ Ｔｒｉｚｏｌ ＲＮＡ裂解液混勻，室溫放置１０ ｍｉｎ；加入２００ μＬ 氯仿，混勻，４ ℃ １２ ０００ ｒ／ｍｉｎ 離心１０ ｍｉｎ，吸取水相，加入等體積的異丙醇，冰浴放置１０ ｍｉｎ 后，４ ℃ １２ ０００ ｒ／ｍｉｎ 離心１０ ｍｉｎ；沉淀用７５％乙醇洗滌，在超凈臺中通風晾干；ＲＮＡ 沉淀溶解于２０ μＬ 用ＤＥＰＣ 處理過的滅菌去離子水中，作為ＲＴ－ＰＣＲ檢測模板。

１．２．５ ＲＴ－ＰＣＲ檢測 禽流感、副粘病毒、鴨病毒性肝炎病毒的擴增條件基本一致。ＲＴ反應總體積為２５ μＬ，組成如下：５×ＲＴ Bｕｆｆｅｒ ５ μＬ，ｄＮＴＰｓ（１０ ｍｍｏｌ／Ｌ） ２ μＬ， ＭｇＣｌ２ （２５ ｍｍｏｌ／Ｌ）１ μＬ， ＲＮａｓｉｎ（４０ Ｕ／μＬ）１ μＬ，ＲＴ引物１ μＬ，ＲＮＡ 模板１３ μＬ，混勻離心。６５ ℃作用１５ ｍｉｎ，待稍微冷卻后，加入Ｍ－ＭＬＶ（２００ Ｕ／μＬ）１ μＬ，４２ ℃ １ ｈ；９５ ℃作用５ ｍｉｎ，冷卻后即可進行ＰＣＲ。

ＰＣＲ反應總體積為５０ μＬ，包括：１０×ＰＣＲ Bｕｆｆｅｒ 5 μＬ，ＭｇＣｌ２ （２５ ｍｍｏｌ／Ｌ）１．４ μＬ，ｄＮＴＰｓ（２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ）４ μＬ，兩條ＰＣＲ引物各１ μＬ，ＲＴ 產物２ μＬ，ｒＴａｑ 酶（５ Ｕ／μＬ）０．５ μＬ，加去離子水至５０ μＬ，混合均勻。將混合物９５ ℃變性５ ｍｉｎ 后進入ＰＣＲ 循環。參數設置為９４ ℃ １ ｍｉｎ，５１ ℃ １ ｍｉｎ，７２ ℃ １ ｍｉｎ。30個循環。待ＰＣＲ結束，取ＰＣＲ 產物進行１．５％瓊脂糖凝膠電泳，觀察擴增片段大小。以ＰＣＲ 產物中出現目的條帶的樣品為陽性。

１．２．６ 病毒分離鑒定 經ＰＣＲ測定禽流感病毒（ＡＩＶ）為陽性的病料，用含雙抗的Ｈａｎｋ’ｓ液洗滌３次，磨碎（1 g病料加8 mL Ｈａｎｋ’ｓ液）乳劑，然后反復凍融３次，３ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心２０ ｍｉｎ，取上清液雜檢無菌后保存于－１０ ℃備用，按殷震等［８］介紹的方法，分別接種ＳＰＦ雞胚、鴨胚或細胞，對分離物按照鴨瘟病毒、禽流感病毒、禽副粘病毒、鴨病毒性肝炎病毒的鑒定方法分別進行鑒定。

１．３ 細菌病的檢測

無菌取發病鴨的肝臟、心臟等組織，劃線接種于普通瓊脂平板和ＳＴＡ平板，分別置二氧化碳培養箱和普通培養箱３７ ℃培養１８～２４ ｈ，觀察菌落生長情況。將生長的菌落接種于麥康凱（Ｍ．Ｃ）瓊脂、伊紅美藍（ＥＭＢ）瓊脂、ＳＳ瓊脂、三糖鐵（ＴＳＩ）瓊脂進行純化培養及鑒別鑒定。

涂片鏡檢：將生長的菌落涂片，革蘭氏染色鏡檢，觀察菌落形態。

生化試驗：分離菌株進行糖發酵試驗、Ｍ．Ｒ、ＶＰ、靛基質、硝酸鹽還原、枸櫞酸鹽利用試驗、Ｈ２Ｓ試驗、尿素酶試驗［９］。

致病性試驗：取分離菌株接種于普通肉湯，置３７ ℃培養１８～２４ ｈ后，按０．２ ｍＬ／只（２×１０９個菌／ｍＬ）的劑量分別腹腔接種小鼠和２周齡雛鴨，對照組腹腔注射普通肉湯０．２ ｍＬ／只，觀察小鼠和雛鴨１周內發病與死亡情況。

２ 結果與分析

２．１ 流行病學調查結果

共調查７個地（市）７９個養鴨戶和養鴨場

１８２ ８５０只鴨的主要疾病流行情況（表１、表２）。其中調查成年鴨８３ ２００只，主要疾病有禽流感、鴨瘟、副粘病毒病、巴氏桿菌病、大腸桿菌和沙門氏菌混合感染等，發病２６ ８９０只，發病率３２．３％；死亡６ ７３７只，病死率２５．１％；對產蛋鴨生產性能均有不同程度影響。調查育雛鴨９９ ６５０只，其主要疾病有里默氏菌與大腸桿菌混合感染、鴨病毒性肝炎、沙門氏菌病和曲霉菌病等，發病１９ ７２０只，發病率１９．８％；死亡５ ５４１只，病死率２８．１％。

２．２ 病原的分離鑒定

從采集的病料中分別分離到７株禽流感病毒、３株副粘病毒和３株鴨肝炎病毒；分離到１７株鴨疫里默氏菌、３６株大腸桿菌、９株巴氏桿菌等病原菌。

２．３ 主要疾病流行特點

１）鴨瘟雖然是對養鴨業危害很大的傳染病，但由于養殖戶高度重視，加強防疫，4年內只發現１例，且是臨床診斷與ＰＣＲ檢測結果，沒有分離到鴨瘟病毒。

２）禽流感已成為危害養鴨業的主要傳染病，近幾年呈蔓延趨勢，雖然分離到的病毒多為弱毒株（臨床癥狀疑為強毒的病例全部進行無害化處理），但對成年鴨的危害是很大的，特別是產蛋鴨，死淘率達３０％～１００％。但近幾年雛鴨未發現禽流感流行的病例。

３）副粘病毒的感染是養鴨業潛在的危險，成年鴨主要引起產蛋下降和腹瀉，對一些未作副粘病毒免疫的鴨群抗體檢測結果表明，副粘病毒的ＨＩ抗體水平達到５～７ log２，說明自然感染比較普遍。

４）病毒性肝炎仍然是雛鴨的主要傳染病，其發病快，死亡率高，發病日齡越來越小。在調查的１２個病例中，病死率達３７．８％。另一個特點是部分免疫鴨肝炎疫苗的雛鴨仍發生病毒性肝炎流行，是否是病毒發生變異有待進一步研究。

５）鴨疫里默氏菌和大腸桿菌混合感染是本次調查的細菌病流行特點，也是對育雛鴨危害較大的疾病，在１９個病例中其病死率達２3．１％，由于細菌病原易產生抗藥性，臨床用藥效果不好，耐過的鴨生長緩慢。

６）沙門氏菌和大腸桿菌感染成年鴨大部分是因為環境污染所致，臨床以常年散發為主，多表現為敗血癥，一些鴨場常年靠投藥維持鴨的生長，一旦停藥，鴨群即出現死亡，成年鴨病死率可達９.0％，是養鴨業中的難點。

７）曲霉菌病是冬春季雛鴨易發的疾病，是由曲霉菌感染引起的肺炎、氣囊炎，其死亡率很高，在４個病例中病死率達２７．９％。其主要發病原因是墊料和空氣中霉菌污染所致。該病癥狀明顯，易于診斷，但由于初養農戶缺乏相關知識和處理方法，易造成較大損失。

８）禽巴氏桿菌病（霍亂）是常見病，農村田間放養的蛋鴨群發生較多，以秋冬季散發為主，病死率可達２２．７％，可引起產蛋下降１０％～２０％，但易于恢復。

９）成年鴨感染病毒后大部分引起產蛋下降，有些混合感染病例在臨床上很難判定，也是一個值得重視的問題。

３ 小結與討論

１）通過對２００６～２００９年湖北省規模化養鴨主要疫病的流行情況進行實地調查并結合實驗室診斷資料分析，對湖北省內主要鴨病流行情況有了較全面的了解，為鴨病的防控提供了依據。

２）近幾年由于全球氣候變暖、養殖規模擴大、市場交流頻繁和環境的污染等因素的影響，鴨病出現了一些新的流行動態，老病依然，新病不斷出現。據不完全統計，水禽大約每２～３年增加一種新疫病，表明新疫病的病原微生物和老疫病的病原微生物的變異株不斷出現［５］。此次調查結果表明，禽流感已成為危害養鴨業的主要傳染病，副粘病毒的感染是潛在的危險。特別是商品肉鴨，由于生長周期短，滅活疫苗免疫很難達到預期效果，是鴨病防控中的難點。

３）多病原的混合感染已是一個普遍現象，增加了疾病防控的難度，一些病毒病的流行導致了細菌病的繼發感染，使病禽的發病死亡率大大提高。細菌病原普遍存在耐藥性，也是疾病防控的難點。

４）免疫失敗也是生產實際中存在的較普遍現象，其因素較多。根據相關資料介紹，病毒病原和某些免疫抑制疾病的感染是造成免疫失敗的主要原因［５］。本次調查中發現部分雛鴨免疫鴨肝炎疫苗后發生鴨肝炎，說明可能有新的病毒出現。

５）此次調查結果表明，規模化養鴨疾病防控難點多，難度大。針對這些問題，我們必須在環境的控制、病原的快速檢測、新型疫苗的研究等方面堅持不斷創新，以保障養鴨業的健康發展。

參考文獻：

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