免疫球蛋白A的分析方法探討

摘要：本文探討了免疫球蛋白A的幾種測定方法及原理，并對其特性進行比較，分析其優缺點；以及簡單介紹了測定免疫球蛋白A的臨床意義。

關鍵詞：免疫球蛋白A 分析方法 臨床意義

中圖分類號： TQ460.1文獻標識碼：A文章編號：1674-098X(2011)12(c)-0000-00

免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）普遍存在于血液、組織液、淋巴液和外分泌液中，在人類免疫應答中起關鍵作用。IgA有血清型和分泌型兩種，存在于血清中的稱血清型IgA，占血清總蛋白量的10%~15%。測定血清中免疫球蛋白A的含量對診斷和指導治療肝臟疾病、結締組織疾病和腎病有實際的臨床意義[1]。目前，檢測IgA的方法主要有瓊脂單向免疫擴散法、火箭免疫電泳法[2]、酶免疫分析法（EIA）、免疫熒光法、金標記陽極溶出伏安免疫分析法[3]及免疫比濁法[4]（表1）等。

1 免疫球蛋白A的分析方法

1.1單向環狀免疫擴散法（RID）

其原理是將抗IgA血清均勻地分散于瓊脂或瓊脂糖膠內，待膠液凝固后于其上打孔，將待測抗原滴加于含相應抗IgA血清的瓊脂板小孔中，檢樣中抗原放射狀向含抗IgA血清的膠內擴散，形成乳白色的沉淀環，在一定濃度范圍內，IgA的含量與沉淀環直徑成正比，與用標準抗原IgA的沉淀環直徑所形成的標準曲線比較，即可達到定量的目的。

1.2 火箭免疫電泳法（RIR）

抗原在電場力的作用下，通過含有抗體的瓊脂凝膠，由陰極向陽極泳動，途中與相應的抗體形成抗原抗體復合物，在兩者比例適宜的部位沉淀下來，形成狀如火箭的沉淀峰。沉淀峰的高度在抗體濃度保持不變的情況下與抗原含量呈正比。

1.3 酶免疫分析（EIA）

它是將抗原、抗體的特異性免疫反應和酶的高效催化作用有機結合起來的一種免疫分析方法。通過化學的方法將酶與抗體或抗原結合起來，形成酶標記物；用酶標記的抗原或抗體與樣品中待測抗原或抗體發生免疫反應后生成有酶標記的抗原抗體復合物，然后在反應液中加入底物，酶催化底物水解顯色，由于顏色變化可放大酶量的變化，然后通過不同的方法進行定性或定量分析。

1.4 金標記陽極溶出伏安免疫分析法（ADSV）

電化學金屬免疫方法是把電化學檢測技術和金屬免疫方法結合起來的一種免疫分析方法。常用的技術有線性掃描伏安法(LSV)、微分脈沖極譜法(DPP)、循環伏安法（CV）、陽極溶出伏安法(AdSV）等。向知峰等[3]提出了一種基于納米金標記的陽極溶出伏安免疫分析方法，通過金標羊抗人IgA抗體與金標兔抗羊二抗形成的免疫復合物，在微孔板的表面引入大量的納米金，結合高靈敏的金屬溶出分析，成功地對IgA進行了檢測。

1.5 免疫比濁法

當抗原（IgA）與抗體在稀釋液中反應而又比例適合（抗體過量）時形成可溶性免疫復合物，此復合物在稀釋液中PEG作用下可自液相析出，形成微粒，使檢樣濁度發生變化。檢樣方法分兩類：透射和散射比濁法。汪敬武等[4]建立了流動注射免疫比濁法；王娜等[5]建立了共振散射比濁法測定IgA 。

1.6 金標記共振散射免疫分析法

先將免疫球蛋白A抗體進行金納米標記，金標抗體和抗原反應生成免疫復合物，在PEG作用下，抗體包裹的金納米從免疫復合物中釋放出來，發生聚集，利用聚集了的金納米的共振散射光譜特征對IgA進行定量分析[6]。

表1 免疫球蛋白A的分析特性

方法線性范圍（mg/L）檢出限(μg/L)評價文獻

火箭免疫電泳-5500靈敏度低，重現性差2

溶出伏安免疫分析0.018-18110通過夾心模式捕獲金標抗，再與金標二抗形成網絡結構，靈敏度高3

透射比濁法90-360-靈敏度低4

散射比濁法0.133-4.6768操作簡單，重現性好5

金標記共振散射法0.0054-1.354.18靈敏度高，操作復雜6

2 臨床意義

若免疫球蛋白A增高，常見于免疫球蛋白A(IgA)型多發性骨髓瘤、類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、肝硬化、濕疹、血小板減少及某些感染性疾病；如患系統性紅斑狼瘡，IgA可高達正常平均值的2倍左右。若免疫球蛋白A降低，常見于自身免疫性疾病、輸血超敏反應、先天性無免疫球蛋白血癥、繼發性免疫缺陷及吸收不良綜合征；如先天性免疫球蛋白異常血癥。有人將其分為許多型，最多見的是缺乏IgA ，患者往往無特殊癥狀，但易患呼吸道感染。

3 結論

某些疾病的確診，除根據病史、臨床癥狀、體癥和其他實驗檢查外，檢查血中免疫球蛋白A的含量是必不可少的，它是作為診斷疾病的一項很重要的指標。通過對免疫球蛋白A測定方法的分析，我們不難找出一種既快又準的測定方法。此外，在判斷結果時，除當IgA的含量超出正常范圍時容易作出結論外，由于人血液中免疫球蛋白正常值的差異很大，有時需參考個人原來免疫球蛋白水平判斷有無增高或減少現象。

參考文獻

[1] 向智男，聶凌鴻，曹勁松，寧正祥.免疫球蛋白的開發及其在食品中的應用研究[J].現代食品科技，2005，21(3):180.

[2] 劉德生.火箭免疫電泳測定免疫球蛋白及補體C3方法的改進[J].武漢醫學院學報，1985，3:206-209.

[3] 向知峰，楚霞.基于納米金標記的陽極溶出伏安免疫分析用于免疫球蛋白A的測定[J].化學傳感器.2005，25(2):57-61.

[4] 汪敬武，王兆喜，楊偉平.流動注射免疫比濁法測定血清中免疫球蛋白A[J].分析化學，2004，32(6):724-728.

[5] 梁愛惠，王娜，等.IgA 免疫復合物微粒的共振散射光譜研究及其分析應用[J].光譜學與光譜分析.2007，27(11):2325-2328.

[6] 蔣治良，王娜，等.免疫納米金共振散射光譜探針檢測痕量免疫球蛋白A[J].化學學報，2008，66(9):1047-1052.