凋亡抑制基因Survivin在胃癌中的表達及臨床意義

摘 要 目的：研究凋亡抑制基因Survivin在胃癌組織中的表達及其臨床意義。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法，檢測Survivin在30例胃癌組織，10例癌旁正常組織中的表達。結(jié)果：①胃癌組Survivin蛋白表達率為70.0%（21/30），顯著高于正常胃組0%（0/10），P＜0.05。②淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Survivin蛋白陽性表達率（80.0%，16/20）顯著高于無淋巴轉(zhuǎn)移組（50.0%，5/10），P＜0.05；⑤根據(jù)臨床病理分期，Ⅰ+Ⅱ期組（64.3%，9/14）與Ⅲ+Ⅳ組（62.5%，10/16）期之間Survivin蛋白陽性表達率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；隨臨床分期增加、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，Survivin蛋白陽性表達率逐漸升高（P＜0.05）。結(jié)論：Survivin的異常表達與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可能是影響胃癌預(yù)后的重要分子指標。

關(guān)鍵詞 胃癌 Survivin 免疫組織化學(xué)

胃癌是我國的常見病、多發(fā)病，嚴重威脅著人民的身體健康，其發(fā)生是一個多階段、多基因改變的過程，與細胞凋亡過程被抑制有關(guān)。細胞凋亡受抑作為細胞增殖的對立面，在腫瘤的發(fā)生、消退和轉(zhuǎn)歸方面起著重要作用^［1］。Survivin是凋亡抑制蛋白家族（IAP）的一個新成員，是相對分子量最小的IAP，具有抑制細胞凋亡的功能和廣譜的惡性腫瘤表達特性，是迄今發(fā)現(xiàn)最強的凋亡抑制因子^［2］。近年的研究表明，Survivin與腫瘤的發(fā)生，發(fā)展密切相關(guān)，survivin在胃癌以及許多惡性腫瘤中廣泛特異表達，和腫瘤的早期發(fā)生、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后有很高的相關(guān)性，并可能參與腫瘤細胞耐藥性的產(chǎn)生。同時，survivin基因也為胃癌的早期診斷、靶向基因治療應(yīng)用提供了新的前景。本研究旨在探討胃癌組織Survivin蛋白的表達及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，為臨床治療及提高患者的生存率提供理論依據(jù)。

資料與方法

一般資料：采用吉林省人民醫(yī)院病理科2007～2009年胃癌根治術(shù)后存檔蠟塊30例，均經(jīng)病理學(xué)診斷為腺癌，術(shù)前均未接受放射治療和化學(xué)治療。其中男18例，女l2例；年齡35～75歲，平均51.5歲。按1997年UICC制訂的胃癌TNM分期標準分期：I期4例，Ⅱ期10例，Ⅲ期12例，Ⅳ期4例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者20例，無轉(zhuǎn)移者10例。病理分化程度：高中分化19例，低分化11例。另取1O例癌旁非腫瘤胃組織標本作對照。

Survivin的檢測：采用免疫組織化學(xué)鏈酶抗生物素蛋白-過氧化物酶（SP）法染色，用兔抗人Survivin多克隆抗體檢測Survivin的表達，嚴格按照說明書操作。已知陽性胃癌切片作為陽性對照，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

結(jié)果判定標準：以細胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞，400倍鏡下計數(shù)500個細胞，≥10%為陽性，＜10%為陰性。

統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSSl0.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料的比較采用Fisher檢驗。相關(guān)分析采用Spearman等級分析。

結(jié) 果

Survivin蛋白陽性表達：Survivin在正常胃組織中不表達，腫瘤組織中Survivin蛋白陽性染色顆粒主要定位于腫瘤細胞胞質(zhì)內(nèi)，細胞膜亦可有少量著色，周圍間質(zhì)亦見少量陽性染色。胃癌組Survivin蛋白陽性表達率70.0%（21/30）顯著高于正常胃組0%（0/10），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

Survivin蛋白陽性表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Survivin蛋白陽性表達率（80%，16/20）顯著高于無淋巴轉(zhuǎn)移組（50.0%，5/10），P＜0.05，根據(jù)臨床病理分期，I+Ⅱ期組（64.3%，9/14）與Ⅲ+Ⅳ組（62.5%，10/16）期之間Survivin蛋白陽性表達率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），隨臨床分期增加及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，Survivin蛋白陽性表達率逐漸升高（P＜0.05）。另外，Survivin蛋白陽性表達與患者年齡、性別及分化程度無關(guān)（P＞0.05）。見表1。

討 論

隨著人們對細胞凋亡認識的逐步加深，新的觀點認為腫瘤的發(fā)生發(fā)展也是細胞凋亡的結(jié)果，細胞凋亡的抑制與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系^［3］。Survivin基因是一個新近發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制基因，具有強大的凋亡抑制功能，其異常表達與多種人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)，成為人們研究的一個熱點。Ambrosini等利用效應(yīng)細胞蛋白酶受體1（EPRl）cDNA在人類基因組文庫中雜交篩選并克隆產(chǎn)生了1個IAP基因家族新成員，即Survivin基因^［2］。組織分布上Survivin只表達于胚胎和發(fā)育的胎兒組織，成人組織除胸腺、生殖腺外未見表達^［10］。相反在大多數(shù)腫瘤組織中均可檢測到Survivin的表達。Survivin的主要生物學(xué)功能就是抗凋亡，它是目前已知作用最強的凋亡抑制蛋白。細胞凋亡主要有兩條途徑：死亡受體途徑和線粒體途徑，兩條途徑最終都通過激活下游效應(yīng)因子caspase-3及caspase-7使細胞凋亡。Survivin可以直接粘附于活化的caspase-3及caspase-7，使其不能發(fā)揮作用，從而阻斷細胞凋亡過程^［7］。

本研究顯示，Survivin在正常胃組織中不表達，Survivin在胃癌組織中的陽性表達率顯著高于正常胃組織，提示Survivin基因的表達發(fā)生在胃癌惡性轉(zhuǎn)化的早期，表明Survivin基因與胃癌的發(fā)生有關(guān)。Survivin基因在胃癌組織中的表達可能抑制了異常突變細胞的凋亡。從而擾亂了細胞生長和凋亡途徑，促使細胞逃離生長監(jiān)控，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。對Survivin蛋白的檢測可作為早期胃癌的輔助診斷。Satoh^［8］等研究了胰腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺組織標本，發(fā)現(xiàn)Survivin僅在胰腺癌組織中有高表達，并與凋亡指數(shù)呈負相關(guān)。Suga等^［5］對大腸組織從增生到癌變不同時期標本的Survivin表達情況進行了研究，所得到的結(jié)論基本相似。從而認為Survivin基因的表達是癌變早期事件。

本研究證實，Ⅰ+Ⅱ期組與Ⅲ+Ⅳ組期之間Survivin蛋白陽性表達率差異有統(tǒng)計學(xué)意義；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Survivin蛋白陽性表達率顯著高于無淋巴轉(zhuǎn)移組；隨臨床分期增加及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，Survivin蛋白陽性表達率逐漸升高。提示Survivin基因不但參與原位腫瘤形成過程的調(diào)節(jié)，促進其發(fā)展，可能還參與癌細胞轉(zhuǎn)移過程的調(diào)節(jié)，在轉(zhuǎn)移過

程中發(fā)揮作用。由于Survivin對凋亡的抑制，癌細胞得以繼續(xù)分裂，造成腫瘤的臨近和遠隔部位轉(zhuǎn)移灶的形成。也有研究表明，Survivin mRNA的表達與胃癌侵犯的深度和腹膜轉(zhuǎn)移有關(guān)，認為Survivin在胃癌的局部侵犯過程中有一定的作用。Sarela^［9］等認為，在惡性腫瘤中，脫落的癌細胞因為Survivin對凋亡的抑制而受到了保護，得以繼續(xù)存活并分裂增殖，進而形成腫瘤鄰近或遠離部位的轉(zhuǎn)移。從而引起預(yù)后不良。

Survivin的異常表達與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，其在胃癌中的高表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床病理分期密切相關(guān)，可能是影響胃癌預(yù)后的重要分子指標。

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表1 Survivin與胃癌的臨床病理特征的關(guān)系