HPLC法測定前列舒樂咀嚼片中淫羊藿苷的含量

[摘要]目的 建立反相高效液相色譜法測定前列舒樂咀嚼片中淫羊藿苷含量的方法。方法 采用BOS Hypersil C18 ODS2（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，乙腈-水（29：71）為流動相；流速為1 mL/min，檢測波長為270nm。按外標法進行檢測。結果 淫羊藿苷在濃度為（49.00～147.00）μg/ mL 范圍內線性關系良好，r=0.9995（n=5），樣品加樣平均回收率為99.84%，RSD為0.82%。結論 該方法簡便，準確、重復性好、專屬性強，可作為前列舒樂咀嚼片的含量測定有效方法。

[關鍵詞] 前列舒樂咀嚼片；高效液相色譜法；淫羊藿苷；含量測定

[中圖分類號]R927.2[文獻標識碼] B [文章編號]1673-9701（2011）19-91-02

前列舒樂咀嚼片具有補腎益氣、化瘀通淋的作用，用于腎脾雙虛、氣滯血瘀、前列腺增生、慢性前列腺炎。原標準中沒有含量測定項目，為更好地控制產品質量，我們選用高效液相色譜法對方中主藥淫羊藿中淫羊藿苷的含量進行了測定。淫羊藿具有溫腎壯陽、強筋骨、祛風濕的功能，有降壓、強心、抗心律失常、鎮咳、祛痰、平喘、抗炎、抗衰老的作用[1]。淫羊藿含有多種黃酮類成分，能調整機體免疫功能，促進核酸代謝，改善心腎血液循環[2]，其含量測定具有重要意義。結果表明，此方法可行，專屬性較好。現報道如下。

1儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；GB15-DAD二極管陣列檢測器；G1314A -VWD可變波長檢測器；Agilent化學工作站；Hypersil C18 ODS2色譜柱（250mm×4.6mm， 5μm，大連依利特公司）；UV-1201型紫外可見分光光度計（北京瑞利分析儀器公司）；BP-211D電子天平（德國賽多利斯公司）；SB3200T超聲波清洗器（上海必能信有限公司）。

乙腈為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。淫羊藿苷對照品（批號110737-200412，由中國藥品生物制品檢定所提供，含量測定用）；前列舒樂咀嚼片樣品（自制）。

2色譜條件[3]

色譜柱：大連依利特公司Hypersil C18 ODS2色譜柱（250mm×4.6mm5μm）；流動相：乙腈-水（29：71）；檢測波長為270nm；流速：1.0mL/min，柱溫為室溫；進樣量10μL。理論板數按淫羊藿苷峰計算不低于4000。

3方法與結果

3.1測定溶液的制備

3.1.1#8195;樣品溶液的制備取本品適量，研細，稱取0.6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）45min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3.1.2#8195;陰性對照溶液的制備按質量標準中處方比例同法制備不含淫羊藿的陰性樣品溶液。

3.1.3#8195;對照品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.05mg的溶液，即得。

3.2檢測波長的選擇及空白試驗

取上述對照品溶液，用紫外可見分光光度計在波長190～400nm的范圍內進行掃描[4]，結果淫羊藿苷對照品溶液的最大吸收波長為270nm。因此確定本含量測定的波長為270nm。

取對照品溶液、陰性對照品溶液和供試品溶液，在上述色譜條件下測定HPLC圖譜。淫羊藿苷的分離度較好，陰性樣品在相應出峰時間區域沒有干擾峰出現，故對樣品的測定無干擾作用。

3.3線性關系考察

精密吸取上述對照品儲備液各1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取20μL溶液注入色譜儀，記錄峰面積。

以濃度y 為縱坐標，峰面積x為橫坐標繪制標準曲線，計算，得回歸方程y=25.1309+43.0624S，r=0.9995（n=5）結果表明，淫羊藿苷在濃度為（49.00～147.00）μg/ mL范圍內，進樣濃度與峰面積呈良好的線性關系。

3.4 精密度試驗

精密吸取濃度為98.00μg / mL的對照品溶液，連續進樣6次，每次進樣10μg ，記錄峰面積，RSD為0.09%，說明儀器精密度好。

3.5重復性試驗

按供試品溶液的制備方法，對同一批樣品制備6份供試品溶液，各吸取10μL進行測定，記錄峰面積，RSD為1.04%，說明本方法重復性良好。

3.6穩定性實驗

取同一批號樣品溶液，在室溫放置，分別于0、2、4、6、8、10h進樣測定，RSD為0.03%，說明本法穩定性良好，能滿足測定要求。

3.7回收率試驗

采用加樣回收率試驗， 取已知含量（含量：2.56mg/g）的樣品精密稱取6份，分別置具塞錐形瓶中，分別加對照品溶液（0.05423mg/ mL）10mL，照供試品溶液制法操作，測定含量，計算加樣回收率，6次平均回收率為99.84%，RSD為0.82%。結果表明，該測定方法回收率高，結果準確。見表1。

3.8 樣品測定

取樣品溶液與對照品溶液，按上述色譜條件進樣，記錄峰面積，按外標法計算含量，結果見表2。 結果表明本品重復性良好。

4討論

4.1 提取溶劑的選擇[5]

分別以甲醇、乙醇、氯仿、乙酸乙酯為溶劑對樣品進行超聲提取，提取液進行HPLC測定。結果表明，乙醇提取液測得色譜峰的峰面積最大，于是選擇乙醇為提取溶劑。比較以不同濃度乙醇為溶劑所測的峰面積，結果70%乙醇測得的峰面積最大，且峰形好，故本實驗選用70%乙醇進行提取。

4.2 提取方法的選擇[6]

分別采用回流提取法和超聲提取法進行提取，所得提取液采用HPLC法測定淫羊藿苷色譜峰面積。結果表明，超聲提取法測得淫羊藿苷含量較高，且時間較短，無其他組分峰干擾，操作步驟簡單，故本實驗采用超聲提取法進行提取。

4.3 含量限度的確定[7]

樣品中淫羊藿苷的平均含量為1.28mg/片，考慮到工藝及藥材產地的差異、質量情況與實際生產工藝的穩定性等原因及結合10批樣品穩定性考察試驗結果，建議按該平均值的80%定限度即1.28×80%=1.02mg，暫定本品含量限度為：本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷（C33H40O15）計，不得少于1.0mg。

[參考文獻]

[1]陳文杰. 淫羊藿的研究現狀[J]. 甘肅中醫，2007，20（5）：71-73.

[2]呂清文.淫羊藿臨床應用舉隅[J].甘肅中醫，2005，18（4）：33-34.

[3] 張云端，郭長強，張升愛，等. 高效液相色譜法測定益精補腎沖劑中淫羊藿苷的含量 [J].中國藥業，2004，13（9）：32-33.

[4] 李勇軍，陳怡，陶玲，等. HPLC 測定前列舒樂膠囊中淫羊藿苷含量[J].貴州醫學院學報，2001，26（4）：310-311.

[5] 中華人民共和國衛生部藥典委員會. 中國藥典一部[M]. 北京:化學化工出版社，2005：229.

[6] 楊柳，鐘靜嫻，林巧玲，等.淫羊藿中淫羊藿苷的提取工藝研究[J]. 中藥新藥與臨床藥理，2005，16(4).:286-288.

[7] 汪勝，劉映，周安成.古漢養生精片中淫羊藿苷含量測定方法研究[J].藥物鑒定，2009， 16（18）：32.

（收稿日期：2010-07-01）

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