腹腔鏡與開腹手術治療卵巢良性腫瘤對患者免疫功能的影響

[摘要] 目的 探討腹腔鏡與開放式手術治療卵巢良性腫瘤對患者免疫功能的影響。方法 選擇120例卵巢良性腫瘤患者，分為對照組及腔鏡組，分別采用開放式手術及腹腔鏡行腫瘤切除術，術后24h采用玫瑰花環實驗檢測紅細胞凝集率，細菌吞噬法檢測中性粒細胞吞噬功能，流式細胞技術檢測CD3+T、CD4+T及CD3+T/CD4+T表達變化。 結果 術后24h腔鏡組患者血清細胞凝集率高于對照組，中性粒細胞吞噬率及吞噬指數高于對照組，CD3+T、CD4+T及CD3+T/CD4+T淋巴細胞表達水平高于對照組。結論 腹腔鏡治療婦科良性腫瘤能夠減少手術的免疫損傷，有利于患者機體免疫功能的保護。

[關鍵詞]腹腔鏡；卵巢良性腫瘤；紅細胞；中性粒細胞；T淋巴細胞

[中圖分類號] R737.31 [文獻標識碼] B [文章編號]1673-9701（2011）24-34-02

Effect of Laparoscope and Open Operation to Immunological Function in Patients with Ovarian Benign Tumor

SUN Yunming TANG Yuxin

Department of Gynaecology and Obstetrics，Maternal and Child Health Hospital of Zhoushan City in Zhejiang Province，Zhoushan 316000， China

[Abstract] Objective To investigate the effect of laparoscope and open operation to immunological function in patients with ovarian benign tumor. Methods One hundred and twenty cases of patients with ovarian benign tumor were selected and randomly divided into control group and laparoscope groups，and ovarian benign tumor were excised with laparoscope or open operation，24h after operation， agglutination rate of red blood cell were detected with rosettes test， phagocytosis function of neutrophil were detected with phagocytosis bacteria way， level of CD3+T，CD4+T and CD3+T/CD4+T were detected with flow cytometry. Results Twenty-four hour after operation， agglutination rate of red blood cell was higher in laparoscope groups than in control groups， phagocytosis rate and phagocytosis index was higher in laparoscope groups than in control groups，level of CD3+T，CD4+T and CD3+T/CD4+T were was higher in laparoscope groups than in control groups. Conclusion laparoscope operation in patients with ovarian benign tumor can decrease immunologic injury，and is beneficial for protecting immunological function.

[Key words] Laparoscope； Ovarian benign tumor； Red blood cell； Neutrophil； T lymphocyte

腹腔鏡技術能夠減少手術創傷，利于患者術后康復，是卵巢良性腫瘤治療的理想微創手術方式，外科手術過程對于機體是創傷應激的過程，對機體的免疫功能存在影響，過度的免疫損傷能夠引起機體免疫力下降，增加術后并發癥的發生幾率，本文就卵巢良性腫瘤腹腔鏡治療對機體免疫功能的影響進行研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院婦產科2006年1月~2010年12月收治的卵巢良性腫瘤患者120例，患者年齡24~63歲，平均（44.7±11.6）歲，其中卵巢囊腫92例，卵巢畸胎瘤11例，卵巢黏液性腺瘤9例，卵巢漿液性腺瘤8例，并排除既往有腹部手術史等腹腔鏡手術禁忌證患者及近期使用免疫抑制劑者。患者入選后隨機分為對照組及治療組，每組60例，對照組年齡24~61歲，平均（43.9±12.4）歲，治療組年齡26~63歲，平均（45.6±11.2）歲，兩組患者年齡及疾病種類無顯著差異。

1.2 手術方法

兩組患者均采用氣管內插管靜脈復合麻醉。對照組采用常規開放式手術，選擇下腹部橫切口或正中切口進腹，探查下腹部及盆腔，紗布墊保護術區，沿瘤體邊緣電刀切開皮質，游離腫瘤，出血點電凝或結扎止血，切除腫瘤后常規放置盆腔引流管。腔鏡組采用標準的四孔操作法，CO2氣腹壓力維持在12~14 mmHg，囊壁處將皮質剪開一小口深達腫瘤囊壁，分離鉗牽拉、電凝鉤及分離鉗分離，血管肽夾夾閉離斷，創面電凝止血，腫瘤較大者放入塑料袋剪碎后取出，放置盆腔引流管，患者術后常規抗生素預防感染。

1.3 檢測方法

1.3.1 紅細胞玫瑰花環實驗 紅細胞凝集率檢測采用C3bR花環試驗，酵母試劑（碧云天生物試劑公司）用Hank’s液洗離心，配成含酵母細胞1.00×108/mL的懸液，新鮮豚鼠血清（碧云天生物試劑公司）致敏，混勻，37℃水浴， Hank’s液恢復原濃度，即為C3b酵母細胞懸液。采集靜脈血1mL，用Hank’s液洗稀釋成1.25×107細胞/mL的懸液。 取致敏酵母菌懸濁液和紅細胞懸液各50μL，混勻，于37℃水浴40min后取出，加0.25%戊二醛溶液20μL固定5min， Hank’s液稀釋、涂片、干燥，甲醛固定，姬姆薩染色，高倍鏡檢查。以1個紅細胞黏附2個或2個以上酵母細胞為1個花環，計數200個紅細胞，求出花環率。

1.3.2 中性粒細胞吞噬功能 中性粒細胞測定采用細菌吞噬法，金黃色葡萄球菌（ATCC12598菌株）接種高溫滅活后用無菌生理鹽水配制成6×108 菌液1mL，潔凈凹玻璃片的凹孔內加入20μL肝素、40μL靜脈血及20μL葡萄球菌菌液混勻，置入37℃預熱鋪有小濕紗布的有蓋容器內，37℃作用30min，間隔10min 攪勻1次。然后載玻片涂片，甲醇固定，堿性美藍染色，油鏡觀察。吞噬細胞百分數：100個中性粒細胞中吞噬有細菌的細胞數；吞噬指數：100個中性粒細胞所吞噬的細菌均數。

1.3.3 CD3+T、CD4+T細胞檢測 T細胞亞群檢測采用Coulter Epics-XL流式細胞儀進行分析，上機管底部加入血液標本100μL，分別加入CD3+、CD4+單克隆抗體（南京建成生物工廠研究所），室溫孵育，加入500μL紅細胞裂解液裂解紅細胞，振蕩混勻。常溫下靜置20min，PBS緩沖液500μL混勻，靜置20min后離心檢測，操作過程嚴格按照試劑及儀器使用說明書進行。

1.4 統計學處理

數據處理采用SPSS11.5統計學軟件，統計學方法采用t檢驗，檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者血液免疫功能及中性粒細胞免疫功能比較

對照組術后24h紅細胞凝集率、中性粒細胞吞噬率及吞噬指數分別為（38.50±5.24）%、（72.80±5.90）%及（4.60±1.76），腔鏡組分別為（44.90±6.29）%、（78.60±5.06）%及（7.40±1.58），腔鏡組紅細胞凝集率、中性粒細胞吞噬率及吞噬指數高于對照組（P ＜0.01）。見表1。

2.2 兩組T細胞免疫功能比較

術后24h腔鏡組CD3+T、CD4+T及CD3+T/CD4+T表達比例高于對照組，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

3 討論

腹腔鏡技術是微創外科的代表技術，近年來發展迅速，該技術手術創傷較小，是婦科良性腫瘤的理想手術方式，其對神經內分泌、代謝、免疫功能、呼吸、循環等方面也有一定的影響，但是相對于開放式手術，其創傷相對較小，腹腔鏡手術采用微創切口，術中腹腔處于密閉環境，因此腹腔內溫度不容易發生變化，有利于術中保持患者體溫恒定，由于體溫波動引起的應激反應相對較輕，而其對腹腔干擾較小，出血量及手術創傷都優于常規的開放式手術，有利于患者的術后恢復。

既往的研究認為[1，2]，腹腔鏡手術術中采用CO2充盈腹腔， 容易被吸收溶解于血液中，引起血液系統高碳酸，損傷血液系統的免疫功能，引起紅細胞免疫及粒細胞免疫功能下降。對卵巢良性腫瘤患者觀察發現，腹腔鏡手術患者紅細凝集率高于對照組，中性粒細胞的吞噬率及吞噬指數高于對照組。紅細胞凝集率能夠反映細胞表面C3b受體的表達情況，C3b抗體是紅細胞與抗原免疫復合物結合的主要受體，能夠通過該區域的過氧化物酶系破壞抗原抗體復合物，同時通過C3b受體的介導，將循環系統中的免疫復合物運送到網狀內皮系統，清除免疫復合物[3，4]。中性粒細胞是血液系統防御的第一道防線，含有豐富的溶酶體、溶菌酶及過氧化物酶等，能夠吞噬血液中的免疫復合物、細菌等，中性粒細胞的功能是機體免疫狀態的直接體現，在免疫力降低時，其吞噬作用及趨化作用減弱，容易發生感染等手術并發癥。兩組的比較發現，術后24h在腔鏡組紅細胞凝集率、中性粒細胞吞噬率及吞噬指數均高于對照組，說明采用腔鏡手術治療腹腔良性腫瘤對于體液免疫功能干擾較小[5]，同時也說明手術對體液系統免疫的影響主要來自手術的創傷，而術中建立氣腹應用的CO2對體液免疫的影響較小，使用較為安全。

T細胞系統是機體細胞免疫的主要形式，CD3+是淋巴細胞的共有標志物[5]，CD4+是輔助T淋巴細胞的表面標志物，CD4+T淋巴細胞主要參與MHCⅡ抗原的識別及呈遞，同時也是免疫記憶產生的主要識別免疫細胞，在研究中發現，腔鏡組術后24h血液中CD3+T、CD4+T及CD3+T/CD4+T高于對照組，說明卵巢良性腫瘤采用腹腔鏡及治療能夠減少T細胞免疫的損傷[7]，同時CD3+T/CD4+T的降低也說明在對照組T淋巴細胞對MHCⅡ類抗原的識別能力及記憶能力下降，腹腔鏡治療不僅能夠保護T細胞免疫，同時也有助于T細胞免疫平衡[8]，減少對T細胞免疫的損傷。研究結果顯示，采用腹腔鏡治療卵巢良性腫瘤，能夠減輕體液系統紅細胞免疫及中性粒細胞免疫損傷，同時有利于保護T淋巴細胞免疫功能及免疫平衡，減輕機體的免疫損傷。

[參考文獻]

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（收稿日期：2010-06-07）