COX-2和FHIT在非小細胞肺癌中的表達和相關性的研究

【摘要】 目的 探討非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC）中FHIT和COX-2蛋白的表達相關性及其與肺癌發展之間的關系。方法 應用免疫組織化學SP法檢測57例NSCLC組織及6例良性病變肺組織中FHIT和COX-2蛋白的表達。結果 NSCLC組織FHIT和COX-2蛋白的陽性表達率分別為22.80%和82.46%。FHIT在NSCLC組織中表達缺失，與腫瘤的組織分型、TNM分期和淋巴結轉移關系密切（P<0.05），與患者的性別、年齡、腫瘤大小及分化程度無關（P>0.05）。COX-2在NSCLC組織中高表達與腫瘤的組織分型、TNM分期、腫瘤大小及分化程度和淋巴結轉移關系密切（P<0.05），與患者的性別、年齡無關（P>0.05）。癌組織中FHIT和COX-2蛋白的表達呈顯著負相關（r0.342，P0.004）。結論 FHIT和COX-2蛋白在非小細胞肺癌中表達成顯著負相關，提示兩者在非小細胞肺癌的發生發展中可能存在重要的協同作用。【關鍵詞】 FHIT； COX-2； 非小細胞肺癌； 免疫組織化學Study on the expression and correlation of FHIT and COX-2 in non-small cell lung cancer ¹YANG Yong-shan， WANG Yan.¹The Third Clinical Hospital of Harbin Medical University， Daqing， 163318， China【Abstract】 Objective To investigate the correlation of the expression of FHIT and COX-2 proteins and study its role in the development of non-small cell lung cancer （NSCLC）.Methods The expression of FHIT and COX-2 proteins was detected by SP immunohistochemical technique in 57 cases of non-small cell lung cancer and 6 cases of benign lung lesions.Results The positive rates of FHIT and COX-2 proteins were 22.80% and 82.46% respectively in NSCLC. Reduction of FHIT had no relation to the sex or age of the patients， sizes of tumors and tumor differentiation（P>0.05）.The expression of FHIT was closely related to the types of histology， stages of TNM and lymph node metastasis（P<0.05）.The expression of COX-2 was not related to the sex or age of the patients （P>0.05）. The expression of COX-2 was closely related to the types of histology， stages of TNM， sizes of tumors， tumor differentiation and lymph node metastasis（P<0.05）. The expression of FHIT protein has a significant negaitive correlation with that of COX-2 protein in NSCLC（r0.342， P0.009）.Conclusion There is a significant negative correlation between high expressions of FHIT and COX-2 proteins in NSCLC. The high expressions of FHIT and COX-2 proteins are possibly related to the development and metastasis of NSCLC.【Key words】 FHIT； COX-2； Non-small lung cancer； Immunohistochemistry 肺癌是當今世界上最常見的惡性腫瘤，其發病率和死亡率逐年增加，其中非小細胞肺癌占大多數。細胞癌變是多因素、多階段、多基因變異的結果。FHIT基因為多種腫瘤的候選抑癌基因，其表達頻繁地降低或缺失，在細胞增殖、轉化及腫瘤發生中具有十分重要的作用^［1，2］。COX-2是可誘導型表達蛋白，與腫瘤的發生和發展有著密切關系^［3］。已知兩種基因與肺癌的發生發展密切相關，但兩者在肺癌中表達的相關性尚未見報道。本研究旨在探討FHIT蛋白和COX-2蛋白的表達相關性及其與非小細胞肺癌發生發展的關系。1 材料與方法1.1 標本來源 標本隨機取自哈爾濱醫科大學附屬腫瘤醫院病理科2000～2002年經肺部手術切除的NSCLC組織蠟塊57例和良性病變肺組織蠟塊6例。所有材料均經福爾馬林固定，常規石蠟包埋，4 μm后連續切片，常規染色后，復查病理診斷，并按WHO標準分型、分級。其中腺癌26例，鱗癌27例，其它4例；良性病變肺組織6例；高、中、低分化分別為16、11和30例；按腫瘤大小分為D≤3 cm和D>3 cm組，分別為23和34例；其中男38例，女性19例；年齡最小30歲，最大79歲，按年齡分為<60歲和≥60 歲兩組，分別為30和27例，平均58歲；所有病例均有淋巴結轉移情況記錄，其中轉移者19例。臨床分期依據1997年國際抗癌聯盟（UICC）TNM分期標準，其中Ⅰ～Ⅱ期16例，Ⅲ期41例。所有病例術前均未接受放療、化療。1.2 試劑及染色法 COX-2多克隆抗體（兔抗）及鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化染色試劑盒均為美國Santa Cruz公司產品；FHIT多克隆抗體（兔抗）和Envision試劑盒均為Zymed公司產品，均購自北京中山生物技術有限公司。用免疫組化SP法。實驗步驟按SP試劑盒說明書進行，DAB顯色。將已知陽性的肺癌切片作為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照。1.3 結果判定 FHIT和COX-2陽性反應產物均呈棕黃色顆粒狀，定位在細胞漿中。參照有關文獻^［4］，每張切片隨機選取10個高倍視野，每個高倍視野計數100個癌細胞，計算陽性細胞百分率，結果判定采用盲法，并由病理科醫師對染色結果復閱核定。判定標準: （1）陰性（-）：陽性細胞數<5%；（2）弱陽性（+）：陽性細胞數在5%～25%之間， 染色淡；（3）中度陽性（++）：陽性細胞數26%～50%之間， 染色清晰；（4）強陽性（+++）: 陽性細胞數>50%，染色強。1.4 統計學處理 采用SPSS 13.0 統計軟件進行分析，組間比較采用χ²檢驗及Fisher確切概率法， 相關性分析采用Spearman等級相關分析，結果均以P<0.05為差異有統計學意義。2 結果2.1 FHIT和COX-2在NSCLC和肺良性病變組織中的表達 如表1所示，57例NSCLC標本中，FHIT蛋白陽性表達13例，陽性率22.80%；COX-2蛋白陽性表達47例，陽性率82.46%。6例良性病變肺組織標本中FHIT蛋白全部陽性表達，COX-2蛋白全部陰性表達。兩組標本中的FHIT和COX-2表達差異有統計學意義（P<0.05）。表1 FHIT和COX-2在NSCLC和肺良性病變組織中的表達2.2 FHIT和COX-2蛋白表達與NSCLC臨床病理特征的關系 由表2可知，在NSCLC組織中，FHIT在NSCLC組織中表達缺失，與腫瘤的組織分型、TNM分期和淋巴結轉移關系密切（P<0.05），與患者的性別、年齡、腫瘤大小及分化程度無關（P>0.05）。COX-2在NSCLC組織中高表達，與腫瘤的組織分型、TNM分期、腫瘤大小及分化程度和淋巴結轉移關系密切（P<0.05），與患者的性別、年齡無關（P>0.05）。表2 FHIT和COX-2表達與NSCLC臨床病理參數的關系2.3 NSCLC組織中FHIT和COX-2表達的相關性 由表3可見，57例NSCLC組織中，Spearman 等級相關分析顯示FHIT和COX-2表達呈顯著負相關（r0.342，P0.004）。表3 NSCLC 組織中FHIT和COX-2蛋白表達的相關性 注：r0.342，P0.0043 討論脆性組氨酸三聯體（fragilehistidinetriad，FHIT）基因是于1996年首次克隆出的一個新的候選抑癌基因，其定位于染色體3p14.2，跨越人類基因組中一個最普遍的脆性位點FRA3B及腎細胞癌相關性斷裂點t。大量研究表明，FHIT基因在肺癌等腫瘤中均存在異常。本實驗研究發現，FHIT在NSCLC組織中表達缺失，與腫瘤的組織分型、TNM分期和淋巴結轉移關系密切，與患者的性別、年齡、腫瘤大小及分化程度無關。環氧化酶是由兩種基因型，即COX-1 和COX-2組成的催化前列腺素合成的限速酶。其中COX-2在大多數組織正常生理條件下并不存在，僅在細胞受到刺激時迅速合成，催化花生四烯酸產生多種前列腺素類物質，通過多種途徑，參與包括炎癥、腫瘤等多種病理生理過程。研究表明，COX-2在NSCLC組織中高表達與腫瘤的組織分型、TNM分期、腫瘤大小及分化程度和淋巴結轉移關系密切，與患者的性別、年齡無關。兩者在肺癌中的相關性尚未見報道。本實驗中57例肺癌組織中有FHIT大量表達缺失同時COX-2高表達，呈明顯的負相關（r0.342，P0.004），提示兩者在非小細胞肺癌的發生、發展中可能存在重要的協同作用，兩者的聯合檢測可能對肺癌的診治及預后有重要意義，可能會成為肺癌的靶向治療的新目標，但需進一步的研究來探討兩基因間的具體作用機制。參 考 文 獻［1］ Lee YC， Wu CT， Shih JY， et al. Frequent allelic deletion at the FHIT locus assosiate with p53 overexpression in squamous cell carcinoma subtype of Taiwanese non-small-cell lung cancers. Br J Cancer， 2004， 90（12）: 2378-2383.［2］ Pekarsky Y， Palamarchuk A， Huebner K， et al. FHIT as tumou supperssor: mechanisms and therapeutic opportunitiesp. Cancer Biol Ther， 2002， 1（3）: 232-236.［3］ 王志偉，范向軍，朱銘巖，等.PFC，TNF-α和NO在豬胰腺移植急性排斥反應中的意義.中國普通外科雜志，2004，12（10）：754.［4］ Hao XP， Willis JE，Pretlow TG， et al. Loss of fragile histidine triad expression in colorectal carcinomas and premalignant lesions. Cancer Res， 2000， 60（1）: 18-21.（收稿日期：2011-05-25）（本文編輯：車艷）