毛大丁草葉對小鼠鎮咳祛痰作用的研究*

陸翠芬， 郭美仙， 柳 斌， 陳光勇

(大理學院藥學與化學學院，云南 大理 671000)

毛大丁草Gerbera piloselloides(L.)Cass.為菊科帚菊木族大丁草屬物，是多年生被毛草本植物。在我國分布于西藏、云南、四川、貴州、廣西、廣東、湖南、湖北、江西等地[1]。又名兔耳風和毛耳風[2]。毛大丁草全草入藥，全草包括葉、花、根、根莖，主治傷風感冒、咳嗽痰多、扁桃腺炎、水腫、胃及十二指腸潰瘍、胃腸炎、毒蛇咬傷等[3]。具有清熱解毒、理氣和血的功效，治癰腫、乳蛾、痄腮、瘰疬結核、胸肋痞氣、疝氣、下血[4～5]。相關研究表明毛大丁草具有鎮咳、祛痰、平喘等作用[6～8]。還有研究表明，毛大丁草有良好的抗菌作用[9]。目前，國內尚未見毛大丁草葉鎮咳、祛痰作用的研究報道，為此筆者進行了毛大丁草葉醇提物對小鼠的鎮咳、祛痰作用進行研究，為更好開發利用毛大丁草提供一定科學依據。

1 材料

1.1 動物 KM健康小鼠，體重為(20±2)g，雌雄各半，由昆明醫學院實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(滇)2011-0004。

1.2 藥品與試劑 苯酚紅(上海試劑三廠，批號：820925)，碳酸氫鈉(重慶制藥六廠，批號：810204)，氨水(上海試劑三廠，批號：820925)，復方甘草口服液(大理學院附屬醫院制劑室，批號：110927)，急支糖漿(太極集團重慶涪陵制藥廠有限公司，批號：11010035)。

1.3 儀器 FW135中藥粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)，SHZ-D循環水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司)，RE-200旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠)，YP3001N電子天平(上海精密科學儀器有限公司)721可見分光光度計(上海第三分析儀器廠)，XK96-A快速混勻器(姜堰市新康醫療器械有限公司)。

2 方法

1.1 樣品來源及有效成分的提取 毛大丁草采自云南省大理市下關鎮，經大理學院生藥學教研室周濃副教授鑒定為菊科大丁草屬植物毛大丁草。將葉粉碎后，取葉粉600 g，無水乙醇回流提取3次，每次2 h。合并提取液，用旋轉蒸發器濃縮成浸膏240 g，提取率為40%。臨用時用蒸餾水配制成15%、30%、45% 的溶液。

1.2 動物分組及給藥 取健康小鼠60 只，隨機分為6 組，每組10 只，即對照組、復方甘草液組、急支糖漿組、毛大丁草葉低、中、高劑量組。對照組灌胃(i.g.)給蒸餾水、甘草液組i.g.給復方甘草口服液、糖漿組i.g.給急支糖漿、毛大丁草葉低、中、高劑量組分別i.g.給15%、30%、45% 的醇提物溶液；給藥體積均為10 mL/kg，每天給藥1 次，連續給藥14 d。

1.3 造模及指標測定

1.3.1 鎮咳試驗 分別對各組小鼠(每組取10 只)進行鎮咳試驗。末次給藥30 min 后，取直徑1 cm 瓶蓋，內墊兩層濾紙扣于1000 mL廣口瓶下，吸取28% 氨水0.5 mL注射于瓶蓋內濾紙上，扣1 min，迅速取出瓶蓋，將小鼠扣于廣口瓶下，觀察和記錄2 min 內咳嗽次數和咳嗽潛伏期(首次開始咳嗽的時間)，并觀察各給藥組與對照組之間鎮咳作用的差異[10～11]。

1.3.2 祛痰試驗 繪制酚紅吸光度(OD)曲線，回歸方程為Y=-0.129406578+13.684599621X。X 為546 nm 處的OD 值；Y為酚紅濃度。分別對各組小鼠(每組取10 只)進行祛痰試驗。末次給藥30 min后，腹腔注射0.5% 酚紅20 mL/kg，注射酚紅30 min后，脫頸椎處死小鼠，仰臥位固定于蛙板上并分離氣管(預先準備5 mL的試管，編號，并加入1.5 mL的5% NaHCO3 溶液)。用1 mL注射器吸取5% NaHCO3 溶液0.5 mL，注入氣管內，反復來回沖洗呼吸道3 次，最后1次將沖洗液收集于相應編號的試管內，按上述方法再重復2 次。將試管放在混勻器上震蕩2 min，用721分光光度計在波長546 nm 處測OD 值。根據回歸方程計算出酚紅含量，根據公式計算校正酚紅含量[10～12]。

校正酚紅含量(ng/kg)=酚紅含量/體重

1.3 數據統計 數據以均數±標準差(±S)表示，采用SPSS 17.0 統計軟件進行方差分析。

1.4 結果

1.4.1 毛大丁草葉醇提物對小鼠的鎮咳作用 表1 顯示：與對照組比較，甘草液組和急支糖漿組均可使小鼠咳嗽潛伏期延長(P<0.01)、咳嗽次數減少(P<0.01)，表明造模成功。與對照組比較，毛大丁草葉低、中、高劑量組均可使小鼠的咳嗽潛伏期延長(P<0.01)、咳嗽次數減少(P<0.01)。結果表明：毛大丁草葉醇提取物低、中、高劑量組鎮咳作用顯著，且均比急支糖漿組強；中、高劑量組鎮咳作用也比復方甘草液組強。

表1 毛大丁草葉醇提物對小鼠的鎮咳作用( ±s ，n=10)

表1 毛大丁草葉醇提物對小鼠的鎮咳作用( ±s ，n=10)

組別給藥劑量潛伏期(s)2min咳嗽次數對照組—17 9±3．436 5±4 7復方甘草液組10mL/kg45 8±5．5??17 6±2 01??急支糖漿組10mL/kg37 0±4．1??25 7±3 2??低劑量組4g/kg40 2±5．9??21 4±3 2??中劑量組8g/kg56 0±9．4??17 4±2 2??高劑量組12g/kg79 4±10．2??10 7±1 9??

注：與對照組比較，**P<0.01

1.4.2 毛大丁草葉醇提物對小鼠的祛痰作用 表2顯示：與對照組比較，復方甘草液組和急支糖漿組均可使小鼠呼吸道酚紅排泌量增加(P<0.05，P<0.01)，表明造模成功。與對照組比較，毛大丁草葉低中、高劑量組均可使小鼠呼吸道酚紅排泌量增加(P<0.01)。結果表明：毛大丁草葉醇提取物中、高劑量組祛痰作用顯著，且毛大丁草葉醇提取物中、高劑量組祛痰作用比甘草液組強；高劑量組祛痰作用也比急支糖漿組強。

表2 毛大丁草葉醇提物對小鼠的祛痰作用( ±s ，n=10)

表2 毛大丁草葉醇提物對小鼠的祛痰作用( ±s ，n=10)

組別給藥劑量體重(g)酚紅含量(ng)校正酚紅含量(ng/kg)對照組—28 3±1 22 57±0 1935 09±2 49復方甘草液組10mL/kg29 0±2 33 00±0 2140 95±2 69?急支糖漿組10mL/kg29 2±2 73 61±0 3049 28±3 97??低劑量組4g/kg29 7±2 62 91±0 2939 65±3 79中劑量組8g/kg28 4±1 33 47±0 3547 35±4 72??高劑量組12g/kg29 0±2 33 57±0 3448 79±4 53??

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

3 討論

咳嗽是人體清除呼吸道內的分泌物或異物的保護性呼吸反射動作。在一般情況下，咳嗽具有重要的呼吸道防御功能；咳痰是呼吸道的反復感染、異物、過熱過冷的空氣、刺激性氣體、香煙或過敏因素的刺激下，支氣管分泌大量痰液。咳嗽、咳痰是臨床常見的癥狀，多種疾病(如感冒、急慢性氣管炎、肺炎等)均可出現，且咳嗽常伴咳痰。嚴重且持續的咳嗽、咳痰使病人不適，妨礙睡眠和休息，可造成呼吸道組織和功能的損害，并可引起全身多種并發癥。臨床上鎮咳藥、祛痰藥的種類繁多，作用機制也不盡相同，但多數藥物具有不同程度的各種副作用。而中藥鎮咳、祛痰的副作用相對較小。

本試驗通過濃氨水誘發小鼠咳嗽，用毛大丁草葉醇提物進行治療，觀察毛大丁草葉的鎮咳作用。結果顯示：毛大丁草葉醇提物對小鼠濃氨水引起的咳嗽有明顯的抑制作用，能明顯延長咳嗽潛伏期，減少咳嗽次數。毛大丁草葉醇提取物低、中、高劑量組鎮咳作用顯著，且均比急支糖漿組強；中、高劑量組鎮咳作用也比復方甘草液組強。本試驗通過給小鼠腹腔注射酚紅，利用酚紅部分從氣管排泌的特點，用分光光度計測出氣管沖洗液內酚紅的量。結果顯示：毛大丁草葉醇提物能明顯增加小鼠氣管排泌酚紅的量，通過促進支氣管分泌物的排泌，使痰液黏度下降，易于咳出。實驗結果表明毛大丁草葉醇提物具有明顯的鎮咳、祛痰作用，毛大丁草葉醇提取物中、高劑量組祛痰作用比甘草液組強；高劑量組祛痰作用也比急支糖漿組強，其作用機制需進一步研究。

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