燈臺葉堿抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

楊坤芬， 趙云麗， 尚建華

(云南省藥物研究所， 云南 昆明 650111)

燈臺葉為云南特色天然民族藥，其粗提物制劑“燈臺葉顆粒”和“燈臺葉片”已上市使用多年，安全性和有效性均得到臨床驗(yàn)證。燈臺葉堿，是從燈臺葉中提取分離的有效部位，具有止咳平喘、清熱解毒的功效，用于急性氣管-支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作期(風(fēng)熱襲肺證)，癥見咳嗽、咯痰、發(fā)熱、咽癢不適、惡風(fēng)、氣急、頭痛、口渴、尿黃。本文主要考察燈臺葉堿的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，并與市售“燈臺葉片”進(jìn)行比較，為深度開發(fā)的必要性和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥品與試劑 燈臺葉堿，棕黃色粉末，水中混懸，常溫密閉保存，批號20070512(含量53.58%)，由中科院昆明植物研究所和云南省藥物研究共同研制提供；燈臺葉片，國藥準(zhǔn)字Z20025348，0.3 g/片，云南大唐漢方制藥有限公司，批號060803；阿斯匹林腸溶片(拜阿斯匹靈、ASP)，進(jìn)口藥品注冊證號H20050059，100mg/片，Bayer Health Care AG生產(chǎn)，批號BTA4RE2；醋酸潑尼松片，國藥準(zhǔn)字H33021207，5 mg/片，浙江仙居制藥股份有限公司，批號061112；冰醋酸，分析純，天津市化學(xué)試劑三廠，批號20030908；二甲苯，分析純，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，批號2006-10-15；羧甲基纖維素鈉，化學(xué)純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號F20040826；雞蛋清，取自農(nóng)戶家產(chǎn)3日內(nèi)的鮮蛋。

1.2 主要儀器 AL104型電子分析天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；JJ2000電子天平，常熟市雙杰測試儀器廠；PV-200型足趾容積測量儀，成都泰盟科技有限公司；101型電熱鼓風(fēng)干燥箱，北京儀器有限公司。

1.3 動物 SPF級ICR小鼠，雌雄兼用，體重19～24 g；SPF級雄性SD大鼠，體重170～240 g；動物生產(chǎn)許可證：SCXK(滇)2005-0008，飼料生產(chǎn)許可證：SCXK(滇)2005-000 9；均由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

透明塑料盒群養(yǎng)，雌雄分籠，小鼠每箱≤10只，大鼠每箱≤6只；飼養(yǎng)于IVC動物實(shí)驗(yàn)室，溫度20～25 ℃(日溫差≤3 ℃)；濕度40%～70%；照明12 h：12 h明暗交替，照度150～300lx；噪音≤60dB。實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK(滇)2005-0001。每日喂飼鼠用配合飼料，自由飲水，視情況更換籠具和墊料；

2 方法與結(jié)果

2.1 抗炎作用研究

2.1.1 對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響[1]選用19～22 g小鼠70只，雌雄各半，按體重和性別隨機(jī)分為7組，每組10只。除阿斯匹林組僅于實(shí)驗(yàn)當(dāng)天灌胃給藥1次外，其余各組均預(yù)先每日灌胃給藥1次，連續(xù)3天，對照組灌服等容量1%CMC-Na，各組灌胃容積均為20 mL/kg.bw。末次灌胃后30 min，各組小鼠于右耳兩面均勻涂抹二甲苯0.05 mL/只，左耳不涂為對照。致炎后1 h脫頸椎處死動物，用直徑8 mm的打孔器于雙耳同部位等面積切下，以兩耳片重量之差作為腫脹度。結(jié)果見表1。

表1 燈臺葉堿對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

由表1可見，阿司匹林、燈臺葉片及燈臺葉堿10、20、40、80 mg/kg劑量連續(xù)灌胃給藥3 d，均能明顯抑制二甲苯致小鼠的耳廓腫脹，與對照組相比差異非常顯著；燈臺葉堿10、20 mg/kg劑量的作用與1.2 g/kg的燈臺葉片相當(dāng)，40、80 mg/kg的作用又與0.2 g/kg阿司匹林相當(dāng)，均強(qiáng)于1.2 g/kg的燈臺葉片。

2.1.2 對蛋清致大鼠足跖腫脹的影響[1]取170～220 g雄性SD大鼠70只，按體重隨機(jī)分為7組，每組10只，給藥方法同2.1.1，給藥容積為10 mL/kg.bw。末次給藥后30 min，于每鼠右后足跖皮下注射新鮮蛋清0.1 mL致炎。分別測定致炎前及致炎后0.5、1、2、3、4 h的足容積，以致炎前后足容積的差值作為腫脹度，并計算腫脹率。結(jié)果見表2。

腫脹率=(給藥后足容積-給藥前足容積)÷給藥前足容積

表2 燈臺葉堿對蛋清致大鼠足跖腫脹的影響(n=10)

由表2可見，阿司匹林、燈臺葉片及燈臺葉堿以30、60、120 mg/kg的劑量連續(xù)灌胃給藥3天，均能明顯抑制蛋清所致大鼠的足跖腫脹；30 mg/kg劑量的燈臺葉堿作用持續(xù)時間比燈臺葉片長，但短于阿司匹林組。

2.1.3 對大鼠棉球肉芽腫的影響[1]取180～240 g雄性SD大鼠70只，按體重隨機(jī)分為7組，每組10只。各鼠于消毒條件下在左右后肢蹊部皮下各植入(20.0±1.0)mg滅菌棉球1個(植入前加青霉素和鏈霉素混合液0.2 mL浸潤、60℃烘干)，手術(shù)當(dāng)日各組動物開始按劑量灌胃給藥，每日1次，連續(xù)10天。第11日禁食不禁水12 h后稱重，脫頸椎處死大鼠，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，于60 ℃烘箱內(nèi)干燥24 h后稱重，減去棉球重量即為肉芽凈重；按體重折算成肉芽系數(shù)(每100 g體重所占的肉芽腫重量)，并與對照組比較各給藥組對棉球肉芽腫的抑制率。結(jié)果見表3。

抑制率=(對照組肉芽系數(shù)-給藥組肉芽系數(shù))÷對照組肉芽系數(shù)×100%

表3 燈臺葉堿對大鼠棉球肉芽腫的影響(n=10)

由表3可見，醋酸潑尼松、燈臺葉片及燈臺葉堿以15、30、60、120 mg/kg的劑量連續(xù)灌胃給藥10 d，均能明顯抑制大鼠皮下棉球肉芽腫的生成，各組間抑制率無明顯差異。

2.2 對醋酸致小鼠扭體性疼痛的影響[1]選用20～24 g ICR小鼠70只，雌雄各半，按性別和體重隨機(jī)分為7組，每組10只。各組動物分別按劑量灌胃給藥1次，對照組灌服等容量1%CMC-Na，容積均為20 mL/kg體重。給藥后30min，每鼠腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.1 mL/10 g體重，觀察并記錄15 min內(nèi)各鼠因疼痛引起的扭體次數(shù)，計算抑制率。為消除系統(tǒng)誤差，實(shí)驗(yàn)采用平行操作。結(jié)果見表4。

表4 燈臺葉堿對醋酸致小鼠疼痛的影響

由表4可見，燈臺葉堿以10、20、40及80 mg/kg的劑量單次灌胃給藥，能不同程度抑制醋酸所致小鼠的扭體性疼痛，10 mg/kg 劑量有作用趨勢，其余3劑量組與對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；3劑量組的作用強(qiáng)度與0.2 g/kg阿司匹林相當(dāng)；1.2 g/kg的燈臺葉片無抑制作用。

3 討論

急性支氣管炎通常是由病毒或細(xì)菌感染引起的氣管-支氣管黏膜炎癥，而慢性支氣管炎是由于感染或非感染因素引起氣管、支氣管黏膜及其周圍組織的慢性非特異性炎癥。本研究圍繞燈臺葉堿的臨床適應(yīng)癥，選擇多種動物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停^察燈臺葉堿對鎮(zhèn)痛及抗炎作用的影響。結(jié)果表明，燈臺葉堿能明顯抑制醋酸所致小鼠的扭體性疼痛，明顯抑制二甲苯致小鼠耳廓炎癥和蛋清所致大鼠足趾腫脹，并對大鼠棉球肉芽腫有明顯抑制作用。提示燈臺葉堿提具有鎮(zhèn)痛、抗炎作用，可能對感冒和支氣管炎引起的疼痛、繼發(fā)性感染的炎癥有預(yù)防或治療作用。研究結(jié)果為燈臺葉堿的臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]陳奇.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：308～378.