甲胎蛋白的臨床檢測與意義

劉鳳琴 廖博 劉麗萍 顏新星

甲胎蛋白(AFP)是一種血清糖蛋白，半壽期5天，電泳時位于白蛋白和α1球蛋白之間。當患肝細胞癌、卵黃囊和胚胎樣腫瘤及部分肝外腫瘤時機體可重新合成，是目前比較有價值的診斷肝癌和生殖細胞腫瘤的重要指標。收集臨床2010年1月至2012年5月收治的臨床甲胎蛋白(AFP)檢測患者120例臨床檢測方法與臨床意義進行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集的120例，其中男74例，女46例，年齡26～80歲，平均46歲。其中原發(fā)性肝癌80例，肝硬化22例，急性肝炎10例，慢性肝炎3例;所有病例均經實驗室檢查、影像、肝穿活檢及手術病理等確診。

1.2 方法

1.2.1 試劑與標本 用抗AFP單抗體包被，酶結合物溶于緩沖液中，含蛋白穩(wěn)定劑。2～8℃保存，有效期內保持穩(wěn)定。顯色液A0.05M乙酸緩沖液，含0.02%過氧化氫，存于滴瓶中。顯色液B含色素基質和穩(wěn)定劑，存于滴瓶中。2～8℃保存，有效期內保持穩(wěn)定。標本僅限于人血清，血漿或再鈣化的血漿。血清標本必須由用標準靜脈穿刺技術采集的全血中分離得到。不立即使用的標本應冷藏于2℃ ～8℃。若貯存期超過3天，須冰凍保存(-20℃)［1］。若標本需運送，則按國家有關病原試劑運輸的規(guī)定包裝。標本中含有沉淀會導致實驗結果不一致。分析前需將標本澄清。含有大量的脂血、溶血或濁度大的血清不能使用。

1.2.2 操作 采用ELISA雙抗體夾心法。自試劑盒中取出已包被抗AFP抗體的微孔反應板條，平衡至室溫(18～25℃)，配制相關試劑。將待測血清用樣本稀釋液做1:10稀釋，每孔加100μl。37℃l小時后洗滌5次。將AFP標準品稀釋成 3、6、12、25、50、100 ng/ml，分別加至微孔中，每孔 100 μl。設置空白孔、陽性對照孔和陰性對照孔。各孔加酶(HRP)標記抗 AFP抗體100 μl(空白孔不加)，37℃ 1小時后洗5次?？馗煽變纫后w后加入酶底物/色原溶液，每孔100 μl，37℃避光反應 15 min，顯色。每孔加 2 mol/L H2SO450 μl終止反應。用酶聯儀在相應波長測吸光度。

2 結果

對AFP標準稀釋系列濃度為橫軸，吸光度為縱軸，建立標準劑量反應曲線;根據上述標準劑量曲線采用點對點得到待測標本的AFP含量，或采用線性回歸得到待測標本的AFP含量。原發(fā)性肝癌患者血清AFP陽性率為75%～80%。其他惡性腫瘤，如胚胎細胞瘤、胃癌、膽道癌、胰癌和肺癌也可增高。

3 討論

AFP是胚胎發(fā)育早期的一種主要血清蛋白，成人由肝細胞產生，含量極微。AFP有很強的免疫抑制功能，肝細胞癌患者血清AFP升高，但有30%患者AFP在正常范圍內。少數其他腫瘤患者AFP也可呈陽性。檢查AFP的常用方法有反相間接血凝法、放射免疫法、火箭電泳法、ELISA法，ELISA法靈敏度高，操作簡便，易于推廣。ELISA法采用ELISA雙抗體夾心法。用抗AFP抗體包被微孔板，分別將待測樣本、標準品及陽性、陰性對照加至包被孔中，反應后加入酶結合物(HRP－抗AFP單克隆抗體)，使特異性地形成固相抗AFP抗體－AFP－酶標抗AFP抗體復合物，再加入酶底物/色原呈色。呈色程度與測定范圍內的樣本中AFP濃度成正比。樣本在離心前，須凝固充分。不要使用在室溫下放置超過8h的樣本。質控物、定標液分裝后，只能凍融一次，不能多次的溶解、冰凍、反復使用，不能儲存在冰箱的自動除霜的冰格中，以免影響測試值。每次勿加入過多的比色杯，不要用手觸摸，易產生靜電，導致進杯的入口和出口或軌道內堵塞。放試劑時應注意是否有氣泡，且混勻的時間不易過長，執(zhí)行手工稀釋。

原發(fā)性肝細胞癌患者血清中AFP明顯升高，血清AFP水平升高超過400ng/ml持續(xù)4周或200～400ng/ml持續(xù)5周以上，在排除其他因素后，綜合影像學檢查，高度提示為肝細胞性肝癌，AFP可用于肝癌高危人群的普查和隨訪，對于肝癌的診斷、鑒別與療效觀察有價值;但也有20% ～30%患者可無AFP升高，值得注意。病毒性肝炎、酒精性肝炎、慢性活動性肝炎、肝硬化患者AFP可呈中、低水平或暫時性增高［2］。AFP升高主要是由于受損傷的肝細胞再生而幼稚化時，肝細胞便重新具有產生AFP的能力，隨著受損肝細胞的修復，AFP逐漸恢復正常。

［1］覃慧鈺.血清腫瘤標志物在肝癌診斷中的應用.中華肝臟病雜志，2005，13(5):379-380.

［2］趙恒，廖靜，劉瑜，等.甲胎蛋白與肝癌.臨床肝膽病雜志，2008，24(5):385-387.