健腦Ⅰ號(hào)對(duì)大鼠腦缺血再灌注模型的實(shí)驗(yàn)研究

廖磊 劉魁英 李蜀平 劉冬平 劉洋

腦卒中分為缺血性和失血性腦卒中，缺血性腦卒中即廣義的腦梗死，是指突然發(fā)生的腦組織局部供血?jiǎng)用}血流灌注減少或血流完全中斷，停止供血、供氧、供糖等，使該局部腦組織崩解破壞。本文通過用線栓法手術(shù)造成大鼠腦缺血再灌注模型來考察健腦Ⅰ號(hào)對(duì)大鼠腦缺血再灌注的影響。

1 材料

1.1 試劑與藥物 健腦Ⅰ號(hào)，5 g生藥/ml，本所制劑室提供，批號(hào)20080910;川芎嗪片，50 mg/片，100片/瓶，北京市燕京藥業(yè)有限公司，批號(hào)20071206;2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)，25 g/瓶，上海滬峰生化試劑有限公司專業(yè)生產(chǎn)，批號(hào)20060826。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠，體重250～300 g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，合格證號(hào):SCXK 2006-2009號(hào)。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器和統(tǒng)計(jì)軟件 BL-2200H電子天平，日本島津公司。UNIUX-11顯微鏡，日本。采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 方法

對(duì)大鼠腦缺血再灌注(線栓法)模型的影響［1，2］將雄性大鼠按體重隨機(jī)分組:假手術(shù)組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照(川芎嗪片40 mg/kg)組、健腦Ⅰ號(hào)1.0、0.5、0.25 g/kg劑量組。分別于術(shù)前0.5 h及術(shù)后4、8、12 h口服給藥。于實(shí)驗(yàn)當(dāng)日給藥0.5 h后，腹腔注射10%的水合氯醛溶液(400 mg/kg)進(jìn)行麻醉，大鼠仰臥位于手術(shù)臺(tái)上，沿頸正中線切開皮膚，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)，頸外動(dòng)脈(ECA)，頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)。將ECA結(jié)扎，在頸總動(dòng)脈(CCA)上剪一小口，將一根長(zhǎng)4.0cm，直徑0.23 mm的圓頭硅化尼龍線由此開口插入ICA內(nèi)約1.8～2.0cm。大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)阻斷造成缺血2 h后小心抽出尼龍線，實(shí)現(xiàn)血流再灌注。陰性對(duì)照組進(jìn)行假手術(shù)。于再灌注22 h后進(jìn)行動(dòng)物的行為學(xué)觀察。采用五級(jí)評(píng)分法(行為完全正常為0分;手術(shù)對(duì)側(cè)前肢內(nèi)旋、內(nèi)收者，為1分;手術(shù)對(duì)側(cè)抗力下降者，為2分;其行走，圍繞手術(shù)對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈者，為3分;已無法自主活動(dòng)者，為4分)，分?jǐn)?shù)越高，說明其神經(jīng)行為損傷越嚴(yán)重。大鼠缺血2 h，再灌注22 h后，即刻斷頭取腦，去除嗅束、小腦和低位腦干，將其梗塞側(cè)冠狀切成6片，迅速用TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)進(jìn)行染色，正常組織深染呈紅色，梗死組織呈白色。用4%中性甲醛固定。將每組腦片排列整齊，拍照保存。應(yīng)用圖象分析系統(tǒng)軟件(SPOT3.5軟件)處理并統(tǒng)計(jì)，求算每片腦面積和梗塞面積，并最終疊加換算成梗塞面積。計(jì)算梗塞面積所占大腦半球面積的百分率，即為腦梗死百分率。

3 結(jié)果

對(duì)大鼠腦缺血再灌注模型的影響各劑量組動(dòng)物于腦缺血再灌注24 h后，模型對(duì)照組行為學(xué)評(píng)分、梗塞面積百分率與假手術(shù)組比較均顯著升高(P＜0.01)，模型成立。健腦Ⅰ號(hào)1.0、0.5 g/kg組行為學(xué)評(píng)分、梗塞面積百分率與模型對(duì)照組比較均顯著降低(P＜0.05、P＜0.01)。表明健腦Ⅰ號(hào)1.0、0.5 g/kg劑量能緩解腦缺血再灌注引起的行為改變以及縮小腦梗死面積。結(jié)果見表1。

表1 對(duì)大鼠腦缺血再灌注的影響(±sD)

表1 對(duì)大鼠腦缺血再灌注的影響(±sD)

注:與假手術(shù)組相比較△△P＜0.01，△P＜0.05;與模型對(duì)照組相比較＊＊P＜0.01，*P＜0.05

組別 劑量g/kg N 梗塞面積百分?jǐn)?shù)(%) 行為學(xué)評(píng)分(分)假手術(shù)組-0.25 9 28.80±8.09 2.32±0.45 10 0 0模型對(duì)照組 - 9 37.20±16.90△△ 2.64±0.67△△陽(yáng)性對(duì)照組 0.04 10 9.85±5.50＊＊ 2.13±0.35*健腦Ⅰ號(hào)組 1.0 10 11.59±6.49＊＊ 2.09±0.54*健腦Ⅰ號(hào)組 0.5 10 14.83±6.85＊＊ 2.15±0.40*健腦Ⅰ號(hào)組

4 討論

大鼠腦缺血再灌注試驗(yàn)，是用MCAO方法造成其供血區(qū)域局灶性腦缺血。本試驗(yàn)中，腦缺血再灌注24后，模型對(duì)照組動(dòng)物行為出現(xiàn)異常，動(dòng)物出現(xiàn)原地轉(zhuǎn)圈、手術(shù)對(duì)側(cè)抗力下降、手術(shù)對(duì)側(cè)前肢內(nèi)旋、內(nèi)收等現(xiàn)象。腦梗死面積加大與陰性對(duì)照組比較有顯著差異(P＜0.01)，模型成立。健腦Ⅰ號(hào)1.0、0.5 g/kg劑量組動(dòng)物，同樣出現(xiàn)行為改變，但大多數(shù)動(dòng)物僅出現(xiàn)手術(shù)對(duì)側(cè)抗力下降、手術(shù)對(duì)側(cè)前肢內(nèi)旋、內(nèi)收，沒有出現(xiàn)大鼠原地轉(zhuǎn)圈的現(xiàn)象，行為評(píng)分與模型對(duì)照組比較均明顯下降(P＜0.01)。健腦Ⅰ號(hào)1.0、0.5 g/kg組動(dòng)物的腦梗死面積與模型對(duì)照組比較均明顯縮小(P＜0.01)。

通過本實(shí)驗(yàn)，證明健腦Ⅰ號(hào)1.0、0.5 g/kg對(duì)大鼠腦缺血再灌注有一定保護(hù)作用。本次研究結(jié)果為下一步的工作提供了的藥理學(xué)依據(jù)，但因中藥的藥理實(shí)驗(yàn)復(fù)雜，且動(dòng)物模型與疾病本身還存在一定的差異，故有待進(jìn)一步深入研究來了解其作用機(jī)理。

［1］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:1066-1067.

［2］凌婧，鄧文龍，張杰，等.川芎油對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠的保護(hù)作用.中藥藥理與臨床，2008，24(1):39-41.