頸椎生物塑化薄層切片的制作和臨床意義

文會(huì)龍 胡輝東 吳一雄 黃小斐

利用生物塑化技術(shù)可取得頸椎透明的薄層切片，由于斷面標(biāo)本層厚較薄，連續(xù)性較好，能夠?qū)︻i椎及周圍結(jié)構(gòu)做到連續(xù)斷層顯示和準(zhǔn)確分辨，達(dá)到與斷層掃描對(duì)應(yīng)的要求，對(duì)頸椎臨床影像學(xué)評(píng)價(jià)和外科手術(shù)有較大的幫助。

1 材料與方法

1.1 材料 生物塑化切片的制作:4具正常成年人尸，男3例女1例，年齡45～65歲。

1.2 方法 生物塑化切片的制作參照隋鴻錦等［1］的方法如下:

1.2.1 固定(fixation)及解剖(dissection) 采用福爾馬林對(duì)新鮮標(biāo)本進(jìn)行灌注固定，通過(guò)手工精細(xì)解剖，根據(jù)需要顯露內(nèi)部組織結(jié)構(gòu)。在冰凍狀態(tài)下將標(biāo)本切割成所需要頸椎部分，上至顱骨下緣，下至第7頸椎下緣，頸部長(zhǎng)方體標(biāo)本塊體積約250 mmX150X100 mm。

1.2.2 脫水(dehydration)及脫脂(degreasing) 室溫狀態(tài)下，以丙酮酸替代組織中的水和脂肪成分。脫水時(shí)，在-25℃的冷凍環(huán)境下進(jìn)行，而脫脂則在室溫下完成。

1.2.3 真空浸漬(forced impragnation) 這是塑化技術(shù)的關(guān)鍵步驟。將充滿了可揮發(fā)溶劑(丙酮)的標(biāo)本放入多聚物液體中，在真空環(huán)境下，中介溶劑的沸點(diǎn)降低，以氣體狀態(tài)被持續(xù)抽吸出來(lái)。標(biāo)本中由于丙酮揮發(fā)而致的孔隙，被組織周圍的多聚物所替換。

1.2.4 定型(positioning)和平板箱制作(laying in flat plates)

確定標(biāo)本的姿態(tài)，將解剖結(jié)構(gòu)固定在正確的位置，然后將頸椎標(biāo)本置于平板箱中。

1.2.5 氣體硬化(gas harding)和加熱固化(heat curing) 真空浸滲之后，根據(jù)所用多聚物種類的不同，將標(biāo)本放置在特點(diǎn)環(huán)境下，采用氣體熏蒸、光線照射或水浴加熱等方法，使多聚物單體發(fā)生交聯(lián)聚合反應(yīng)而硬化。

1.2.6 切割(sawing) 經(jīng)硬化處理的標(biāo)本與塑化劑固化為一體，將其固定于鉆石切割儀上，分別按水平面和冠狀面以鉆石鋸線切割3、2套，層厚設(shè)定為1.0 mm，水平面60～70片，冠狀面50～60片。

2 結(jié)果

塑化的取材標(biāo)本為單側(cè)顱底(含中線)軟組織以及骨質(zhì)。塑化后取材，前界至上頜骨中部，后界至顳骨后緣，獲得大小約為80 mm×80 mm×50 mm塑化塊進(jìn)行切割，塑化薄層切片的厚度為1.0 mm，鋸耗率約為0.1～0.2 mm。斷面標(biāo)本為半透明狀，水平切片和冠狀切片對(duì)頸椎骨質(zhì)、肌肉、血管、神經(jīng)顯示較為清楚，顏色基本無(wú)失真，可觀察組織在斷面上的頸前后的器官組織的位置形態(tài)、位置、大小、毗鄰及走行。對(duì)頸椎椎體顯示、頸椎間盤的狀態(tài)、椎動(dòng)脈與神經(jīng)根的解剖關(guān)系非常清晰，頸部脊髓與神經(jīng)根的連接以及與椎管，椎間盤的關(guān)系非常清晰。組織塑化后，鋸切時(shí)不走形，無(wú)移位、脫落，切面干凈，組織清楚，易保存、攜帶。置于顯微鏡下可以觀測(cè)放大的組織結(jié)構(gòu)。

3 討論

生物塑化技術(shù)是由德國(guó)人Hagens于1982年提出的，將高分子化學(xué)和真空物理學(xué)與生物學(xué)相結(jié)合，用于處理、保存和研究生物標(biāo)本的一種新技術(shù)。基本原理是，用丙酮對(duì)標(biāo)本組織進(jìn)行徹底的脫水處理后，將一種特別配制的液態(tài)高分子單體化合物作為生物塑化劑，充填到組織內(nèi)部，最后成為半透明的、堅(jiān)固的塑料塊，經(jīng)過(guò)鉆石鋸線以極薄的層面設(shè)置(一般1～2 mm)層層切割，最后得到一套完整的組織標(biāo)本。采用了鉆石鋸線進(jìn)行鋸切，損耗率較低。此外塑化切片層面較薄，能夠滿足現(xiàn)代診斷和治療技術(shù)對(duì)對(duì)提高解剖學(xué)研究的精確度的要求，切片干凈，可以隨意保存，攜帶，演示。

采用生物塑化技術(shù)制作的薄層切片標(biāo)本，最主要的應(yīng)用在于影響診斷的參照和術(shù)入路的選擇。頸椎前后解剖復(fù)雜，神經(jīng)血管密集，橫斷薄層斷面上較好地顯示了正常解剖結(jié)構(gòu)及其毗鄰關(guān)系，為臨床提供了完整、連續(xù)的薄層斷面解剖學(xué)資料，對(duì)病變的診治具有重要的參考價(jià)值［2-3］。

頸椎薄層切片還可以作為基本圖像元進(jìn)行計(jì)算機(jī)圖像三維重建。不同部位的薄層斷面圖像與對(duì)應(yīng)的cT和MRI圖像對(duì)照觀察，可為影像識(shí)別解剖結(jié)構(gòu)或病變提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。

［1］隋鴻錦，張淑琴，宮連.生物塑化技術(shù)及其應(yīng)用.解剖科學(xué)進(jìn)展，1996，2(1):82.

［2］張會(huì)珍，郭會(huì)利，承根會(huì)，等.Mill對(duì)神經(jīng)根型頸椎病的診斷價(jià)值.中醫(yī)正骨，2007，19(3):20.

［3］崔保剛.頸椎損傷的 Mill診斷與臨床.中原醫(yī)刊，2004，31(10):10-12.