膽紅素對新生鼠缺氧缺血性心肌損傷SOD、MDA變化的影響

張 冰 宮紅梅 李曉艷 張亞琴

鄭州市第一人民醫院新生兒科，河南鄭州 450052

新生兒窒息是以腦損傷、心臟損傷等為主的多臟器損害性疾病，病情重，病死率高。近年來，國內外大量的研究表明，膽紅素可有效抑制各種活性氧的產生及脂質過氧化。在氧化應激時發揮對心血管系統的保護作用[1]。為此選用7日齡SD乳鼠，建立HIR模型作為窒息程度的標準，用膽紅素干預缺氧缺血致心肌損傷時的乳鼠，檢測心肌超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）變化，探討缺氧缺血性腦損傷時的心肌損傷并觀察膽紅素在其中的保護作用，并期望能以此提供臨床依據。

1 材料與方法

1.1 一般材料

實驗動物由昆明醫學院實驗動物中心提供，實驗動物生產許可證號SCXK（渝）20020001，選用健康SD大鼠，雌雄不限，7日齡，12～15 g，SOD活力、MDA含量及考馬斯亮蘭總蛋白試劑盒均購于南京建成試劑公司。CYS-1測氧儀由上海嘉定學聯儀器廠生產。微型動脈夾由上海手術器械廠生產。

1.2 動物模型

參照張國慶等[2]動物模型的制作方法。SD大鼠（7 d齡），稱重后編號，乙醚麻醉，取仰臥位固定，消毒皮膚后頸部正中切口，分離雙側頸總動脈，用微型動脈夾夾閉雙側頸總動脈，消毒紗布覆蓋切口。將實驗動物置于缺氧箱（8%氧濃度）中，1 h后松開動脈夾后再次放回箱內，缺氧2 h后取出，絲線（6-0號）縫合切口，備用。

1.3 實驗分組

選實驗動物24只，隨機分為3組：對照組取頸部正中切口后暴露頸總動脈，不建立腦缺氧缺血再灌注損傷模型；模型組為建立模型后向實驗動物腹腔注射生理鹽水（生理鹽水劑量同膽紅素組膽紅素的劑量）；膽紅素組為模型建立后即刻給予實驗動物腹腔注射膽紅素10 mg/kg；各組實驗動物于術后6 h處死。

1.4 取材和標本制作

解剖實驗動物后快速取心肌組織塊，勻漿，低溫離心，取上清，保存于-80℃超低溫冰箱中，備用。

1.5 指標檢測

取心肌組織，勻漿后測SOD活性及MDA含量，黃嘌呤氧化酶法測定心肌組織SOD活性用，硫代巴比妥酸法測定MDA含量。SOD活力、MDA含量及考馬斯亮蘭總蛋白方法嚴格按試劑盒說明書操作，采用波長分別為550、532、539 nm處比色，比色杯光徑為1 cm，測定采用島津紫外可見分光光度儀。

1.6 統計學處理

采用SPSS13.0軟件包進行，數據以（）表示，兩組之間采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

對照組、膽紅素組與模型組相比，模型組心肌組織SOD活性水平明顯下降，MDA含量明顯升高，兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05）；膽紅素組與模型組比較，膽紅素組心肌組織中SOD活性升高，MDA含量下降，兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

注：與對照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05

3 討論

新生兒窒息時，缺氧窒息后血液重新分布，以保證腦、心等重要器官的血供[3]。窒息致缺氧缺血性心肌損傷機理：若缺氧時間的持續延長及程度的繼續加重，肺循環阻力增高，右心室后負荷增加，耗氧量增加，加重心內膜下心肌和左室壁的心肌缺血[4]。搶救復蘇時吸氧，復氧致心肌組織發生再灌注損傷，產生大量氧自由基[5]。大量氧自由基使細胞膜的不飽合脂肪酸發生過氧化而損傷細胞膜；O2-、H2O2與DNA鏈中糖磷酸鹽反應，使DNA發生斷裂而破壞DNA的結構；氧自由基與蛋白分子中的甲硫氨酸、半胱氨酸等殘基直接發生反應破壞蛋白質的一級結構[6]，故而損傷心肌細胞。本研究顯示，對照組與模型組比較，模型組SOD活性顯著下降，而MDA含量明顯升高，差異均有統計學意義（P＜0.05）。說明窒息致心肌損傷時產生大量氧自由基，消耗較多超氧化物歧化酶，并產生大量脂質過氧化產物丙二醛。

膽紅素是血紅蛋白的代謝產物，多年來一直被認為是人體的排泄物， 近年的研究表明它是內源性抗氧化劑，能有效清除氧自由基，防止氧自由基對組織產生損傷作用。研究證實膽紅素為生理性抗氧化劑，可能與膽紅素的分子結構有關，其分子結構中白蛋白的不對稱性使膽紅素C10上的氫轉化為活性氫原子，而與超氧陰離子等自由基結合更容易，進而使氧自由基清除等有關[1]。本研究證實，膽紅素組與模型組比較，膽紅素組心肌組織SOD活性顯著高于模型組MDA含量低于模型組，說明膽紅素具有清除自由基的作用。

綜上所述，窒息新生SD大鼠心肌損傷時，膽紅素使心肌組織中SOD的活性升高，MDA含量下降，提示在新生大鼠窒息心肌損傷時膽紅素具有清除心肌組織產生的氧自由基，提高心肌組織抗氧自由基的能力。

[1] 楊俊娟，程宇彤，張鈞華.膽紅素和氧自由基與心血管疾病的關系[J].中國動脈硬化雜志，2006，14（8）：728-730.

[2] 張國慶，陳惠金，蔣明華，等.新生大鼠腦缺氧缺血再灌注損傷模型的建立[J].上海實驗動物科學，2003，23（1）：39-42.

[3]沈曉明，王衛平.兒科學[M].第7版.北京：人民衛生出版社，2008：98.

[4]金漢珍，黃德珉，宮希吉.實用新生兒學[M].北京：人民衛生出版社，2003：408.

[5] 金惠銘，王建枝.病理生理學[M].第7版.北京：人民衛生出版社，2008：209-212.

[6] 何平等.三七總皂甙對新生鼠腦缺氧缺血再灌注損傷時心肌抗氧化系統的影響 [J].中國婦幼雜志 ，2010，21（4）：104-105.