高脂血癥恒河猴血清RETN與血脂的相關性分析

李艷艷，和占龍，趙 遠，楊鳳梅，禹文海，陳麗雄，王俊斌，魯帥堯

（中國醫學科學院北京協和醫學院醫學生物學研究所，云南省重大傳染病疫苗研發重點實驗室，昆明 650118）

高脂血癥（hyperlipidemia）是脂肪代謝或運轉異常使血漿一種或多種脂質高于正常值的一種全身性疾病，其主要危害是導致動脈粥樣硬化，進而導致眾多的相關疾病。大量研究表明，高脂血癥是腦卒中、冠心病、心肌梗死、心臟猝死獨立而重要的危險因素，也是促進高血壓、糖耐量異常、糖尿病的一個重要危險因素。此外，高脂血癥還可導致脂肪肝、胰腺炎，高尿酸血癥等疾病，已嚴重威脅著人類的健康，深入研究其發病機理和相關因素具有一定的意義。抵抗素（resistin，RETN）是一種主要由脂肪細胞分泌的多肽類激素，已有的研究表明，RETN水平可能影響體內能量代謝和平衡，與糖代謝、脂代謝的關系更為密切。初期主要是研究其與肥胖、胰島素抵抗和Ⅱ型糖尿病之間的關系［1］。目前對其與高尿酸血癥、高血壓、冠心病、急性腦梗死等疾病的相關性研究較多［2-5］，而對于血清RETN與高脂血癥的關系，報道較少。恒河猴在組織結構、生理和代謝功能等方面與人類極為相似，是人類疾病基礎研究和臨床前研究的理想動物模型。本實驗通過檢測恒河猴血清RETN及血脂，了解高脂血癥恒河猴的血清RETN的水平，旨在探討高脂血癥恒河猴血清RETN水平與血脂是否存在相關性，為人類高脂血癥及脂類代謝疾病的研究提供實驗數據。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

實驗恒河猴由中國醫學科學院醫學生物學研究所醫學靈長類研究中心提供，普通級恒河猴實驗動物生產許可證號：SCXK（滇）2010-0006；實驗動物使用許可證號為：SYXK（滇）2010-0009，并按實驗動物使用的3R原則給予人道的關懷。

1.2 儀器設備及試劑

移液器（eppendorf 100μL）、離心機（Thermo LEGEND MICRO 21R）、酶標儀（BIO-RAD680）、羅氏全自動生化分析儀（P800）、human-resistin ELISA定量檢測試劑盒（上海依科賽生物制品有限公司，批號：ZIAZBZZ101）。

1.3 方法

1.3.1 動物分組：隨機挑選正常飼養的成年健康恒河猴16只，分為兩組，飼喂正常飼料為對照組，飼喂高脂飼料為實驗組；前期的實驗結果表明，經4個月后實驗組恒河猴血脂水平發生顯著變化，符合高脂血癥的臨床特征，說明已初步建立了實驗性高脂血癥恒河猴模型。

1.3.2 血清樣品采集：采血前受試動物禁食12 h以上，后肢靜脈采血2 m L，分裝在一次性自動定量采血管中，3000 r/min離心30 min，分離血清后收集，于-20℃凍存備用。

1.3.3 檢測項目：TC、TG采用氧化酶法測定，HDL-C、LDL-C采用直接法測定。

1.3.4 血清RETN測定：由于先前研究結果表明，人類與恒河猴的RETN氨基酸序具有較高的同源性，并且趙遠等［6］的實驗結果已證實人RETN ELISA試劑盒可用于恒河猴RENT的檢測，且測定結果具有較好的穩定性。因此本實驗采用Humanresistin ELISA定量檢測試劑盒測定恒河猴血清RETN水平。

1.4 數據統計分析

2 結果

2.1 血脂及血清RETN測定結果

實驗組恒河猴血清TC、LDL-C以及RETN水平與對照組比較，顯著升高（P＜0.05）；實驗組TG較對照組顯著降低（P＜0.05）；HDL-C，兩組比較差異不顯著（P＞0.05）（表1）。

表1 對照組與實驗組血脂及血清RETN的測定結果Tab.1 The determination Results of resistin and lipids of experimental group and control group

2.2 血清RETN與血脂的相關性分析結果

通過相關性分析得出，血清RETN水平與TC、 LDL-C呈直線正相關（回歸方程為：y=0.0009x+ 0.4384，r=0.776，P＜0.001；y=0.001x-1.4385，r =0.791，P＜0.001），與TG呈直線負相關（y=-0.00006x+1.1162，r=-0.754，P=0.001），與HDL-C無相關性（表2）。線性關系（圖1，圖2，圖3）。

表2 血清RETN與血脂的相關性分析Tab.2 Correlation analysis between serum resistin and lipids

圖1 血清RETN與TC相關性Fig.1 Correlation between serum concentration of resistin and TC

圖2 血清RETN與TG相關性Fig.2 Correlation between serum concentration of resistin and TG

圖3 血清RETN與LDL-C相關性Fig.3 Correlation between serum concentration of resistin and LDL-C

3 討論

非人靈長類動物與人的遺傳物質有75％～98.5％的同源性，而恒河猴與人類基因組的同源性大于95％，顯示了許多相似的生物學和行為學特征，用恒河猴作為實驗動物可較好的研究人類相似的疾病及其發病機制，因此廣泛用于傳染病學、藥理毒理學、生殖生理、營養代謝等方面的研究，也是研究人類高脂血癥的理想動物模型。根據血清TC、TG和HDL-C的含量，高脂血癥可分為四類：高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、混合型高脂血癥即血清TC和TG含量均增高、低高密度脂蛋白血癥。本研究中實驗組恒河猴TC、LDL-C顯著高于對照組，TG顯著低于對照組，提示實驗組恒河猴血脂代謝已經發生紊亂，符合部分高脂血癥特征，說明已初步建立了恒河猴高脂血癥動物模型。

RETN主要是由白色脂肪細胞分化產生的，是脂肪細胞特異性分泌的具有內泌激素性質的一種蛋白質［7］，有抵抗胰島素的作用，可使血糖水平升高及脂肪細胞增生繁殖。所以近年來圍繞RETN和肥胖、胰島素抵抗及糖尿病的關系進行了大量研究，而糖代謝與脂代謝關系密切。有資料顯示，RETN與脂代謝紊亂也有關［8］。本研究對高脂血癥恒河猴血清RETN與血脂水平進行測定，發現高脂血癥恒河猴血清TC、LDL-C、RETN水平均顯著高于對照組，這與解金紅［9］報道的高脂血癥病人LDL-C及血清RETN水平明顯高于正常人群的研究結果一致。相關性分析結果表明，血清RETN水平與TC、LDL-C呈顯著正相關，與寇忠愛［5］，史艷［10］等報道的急性腦梗死、高血壓患者血清RETN水平與LDLC呈正相關的觀點相一致。有研究表明，RETN與血脂及載脂蛋白代謝相關［11］，而載脂蛋白A5的主要功能是降低血漿TG的水平，在血漿脂質動態平衡中起關鍵作用［12-14］，這可能是在本實驗中高脂血癥恒河猴血清RETN與TG呈負相關的結果產生的原因，但目前RETN影響載脂蛋白代謝的機制尚不清楚，是否因RETN的調控作用導致血清TG的降低還不能確定，有待進一步研究證實。

實驗結果顯示，RETN與血脂代謝密切相關，并與部分血脂指標呈現伴隨狀態，提示RETN對血清脂質代謝可能有較廣泛的影響，很可能是脂代謝紊亂的一個早期標志性因子，但其具體機制有待進一步研究。RETN作為一種新發現的脂肪細胞分泌性細胞因子，不僅與肥胖、Ⅱ型糖尿病和炎癥有關，與脂肪代謝也有密切關系，有可能為改善人類脂類代謝研究提供新的途徑，對人類高脂血癥的研究具有一定的意義。

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