急性白血病患者血清VEGF水平及臨床意義的研究

牟曉梅，蔡尚霞，馬 靖

（1.北華大學附屬醫院 檢驗科，吉林 吉林 132011；2.吉化集團總醫院）

急性白血病是一類造血干細胞的惡性克隆性疾病，與其他實體瘤一樣存在著顯著的新生血管。血管內皮生長因子（VEGF）是促進血管生成的關鍵因子，也是白血病生長、轉移和存活的重要因子。本課題應用酶聯免疫檢測方法，分別檢測初診未治組、復發組、完全緩解組和正常對照組VEGF的血清水平，探討此類與腫瘤相關因子在不同階段急性白血病患者體內的變化規律，以進一步闡明其與急性白血病發生、發展及預后的關系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗組 病例選自2007年1月至2010年10月在北華大學附屬醫院血液科及血液內科住院的急性白血病患者30人，所有病例均由外周血象、骨髓象、細胞化學染色及流式細胞學檢查確診。（1）初診未治組14例：包括急性淋巴細胞白血病（ALL）11例，急性髓系白血病（AML）3例；男8例，女6例，中位年齡20.5歲。（2）復發組5例：其中ALL 2例，AML 3例；男3例，女2例，中位年齡21.3歲。（3）完全緩解組11例：其中ALL 8例，AML3例：男5例，女6例，中位年齡18.9歲。各診斷標準參閱內科學第7版。

1.1.2 正常對照組 健康者12名，均為我院預防保健科經健康體檢合格的兒童，男6名，女6名，中位年齡為22.6歲，其納入均符合以下標準：（1）無心、肝、肺、腎等重要臟器疾患，肝、腎功能試驗正常。（2）無血液病史。（3）無活動性感染，采血前24小時內體溫正常。（4）無免疫性疾病及其他腫瘤性伴發病史。

1.2 方法

采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）雙抗夾心法，試劑盒選用上海信然生物技術有限公司進口自美國的VEGF定量ELISA試劑盒，具體試驗步驟按說明書進行。

1.3 統計學方法

應用SPSS 11.5版軟件包進行統計分析，計數資料以均數±標準差（±s±s）表示，兩均數之間的差別用t檢驗，如果方差不齊用t′檢驗，P＜0.05認為有顯著性差異，P＞0.05認為無顯著性差異。

2 結果

初診未治組和復發組的VEGF血清濃度明顯高于正常對照組（P均＜0.05），完全緩解組的VEGF血清濃度與正常對照組無顯著性差異（P＞0.05），但仍高于正常對照組（表1）。初診未治組、復發組與完全緩解組之間有顯著性差異（P＜0.05）（表2）。

表1 各組VEGF水平與對照組比較

表2 初診未治組、復發組VEGF水平與完全緩解組比較

3 討論

很多生理和病理過程中都存在血管的生成，而血管生成受眾多刺激性和抑制性的血管生成因子調節聯系，VEGF是最重要的促血管生成因子，且有促腫瘤轉移、傷口修復等多種功能，在惡性腫瘤細胞的生長和增殖中扮演重要角色。急性白血病與其他實體瘤一樣存在顯著的血管生成，且大部分腫瘤細胞有 VEGF的高表達［1］。

本實驗采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）雙抗夾心法檢測了30例急性白血病患者和12例健康體檢者的血清VEGF水平。結果顯示，初診未治組和復發組患者的VEGF水平明顯于正常對照組，說明了急性白血病患者血清中VEGF存在異常高表達，而VEGF對白血病發生、發展與轉歸過程起到重要的調節作用，與文獻報道一致［2］。目前認為，這是由于腫瘤細胞的大量增殖、代謝，導致局部相對缺氧，誘導VEGF表達上調所致［3］，并通過抑制細胞凋亡和宿主抗腫瘤免疫，進而增加了白血病細胞的生存能力［4］，同時也與某些原癌基因的激活、抑癌基因的失活和某些細胞因子的改變有關［5］。大量增生的新生血管能夠在化療中存活下來，作為不同的細胞因子和生長因子的來源，通過自分泌和或旁分泌作用，支持殘留白血病細胞的生長。

在本實驗中，完全緩解組患者的血清VEGF水平與正常對照組無顯著差異，但總體水平仍高于正常對照組，這可能是因為急性白血病患者雖然骨髓獲得骨髓緩解，但體內仍存在微量殘留白血病病灶。此外，化療后患者持續的貧血狀態導致的機體缺氧，誘導了機體組織細胞分泌VEGF，化療損害或化療后骨髓抑制期并發的感染性炎癥刺激也可導致血清VEGF繼發性升高，使患者存在骨髓微血管增生，這往往成為日后復發的根源，因而需要不斷強化治療。

通過對初診未治組、復發組與完全緩解組的分別統計分析發現，兩組均有顯著性差異，提示目前采用的化療藥物有可能影響白血病細胞VEGF的分泌途徑、阻斷其信號傳導，減輕骨髓中新生血管的形成。Beigore［6］通過對VEGF在惡性血液腫瘤、實體瘤和正常對照組中的表達發現，血液腫瘤的血清VEGF表達明顯高于對照組，同時也高于實體瘤組。而在應用了抑制血管生成藥物后，腫瘤細胞負荷明顯降低。而Kiser等［7］將抗血管新生藥物用于白血病的模型鼠，經過4周持續性藥物治療后，白血病細胞團減少90%。說明，VEGF能推進急性白血病病情發展，使用VEGF拮抗劑是一種十分有研究價值的急性白血病治療方案。這些研究結果與本課題的初診未治組和復發組的VEGF血清濃度明顯高于完全緩解組和正常對照組。由此可推測血清VEGF水平是一個有獨立意義的預后指標，可用來監測小兒急性白血病的發展，為急性白血病的治療提供更有價值的依據。

［1］De bont Es，Bosafi S，Jacobs S，et al.Increased bone marrow vascularization in patients with acute myeloid leukemia；a possible role for vascular endothelial growth factor［J］.Br J l－laematol，2001，113（2）：296.

［2］Aguayo A，antarjian HM，Estey EH，et al.Plasma vascular endothelial growth factor levels have prognostic significance in patients with acute myeloid leukemia but not in patients with myelodys plastic syndromes［J］.Cancer，2002，95（9）：1923.

［3］Scott PA，Gleadle JM，Bicknell R，et al.Role of the hypoxia sensing system，acidity and reproductive hormones in the variability of vascular endothelial growth factor in duction in human breast carcinoma cell lines［J］.Int J Cancer，1998，75：706.

［4］Katoh O，Takahashi T，Oguri T，et al.Vascular endothelial growth inhibits apoptotic death in hematopoietic ce Hs after exposure tc chemotherapeutic drugs by inducing MCLI acting as all antiapoptotic factor［J］.Cancer Res，1998，58（23）：5565.

［5］Takahashi Y，Bucana CD，Cleary KR，et al.P53，vessel count，and vascular endothelial growth factor expression in human colon cancer［J］.Int J Cancer，1998，79：34.

［6］Beigore FM.I，LIP GY，Wadley M，el a1.Vascular endouthelial growth factor（VEGF）and soluble VEGF receptor（sFLT－1）in haematolosicalcancer［J］.Br Haematol，2003，108（1）：30.

［7］Kiser M，MeCubrey JA.1nhibitors of angiogenesis selectively reduce the malignan cell load in nxlentmodels of human myeloid leukemias［J］.Leukem／a，2002，16（3）：376.