平胃散調控濕困脾胃證大鼠腸道能量代謝的實驗研究

陳繼蘭，黃秀深，曾躍琴，秦玉花，周艷霞

（成都中醫藥大學基礎醫學院，四川成都611137）

濕困脾胃證，又稱濕阻中焦證，是指濕邪困阻脾胃，阻遏氣機所表現出的一組證候。臨床主要表現為頭重身困肢倦，脘悶腹脹，大便溏泄，舌苔白厚而膩，脈濡緩。本研究模擬中醫發生濕困脾胃證的三大病因，“久居濕地，飲食不節，情志不遂”，采用增加濕度、飲食調控結合睡眠控制的方法建立大鼠濕困脾胃證動物模型［1］，并以此為平臺，研究其腸屏障能量代謝變化情況，進一步探究濕困脾胃證模型大鼠腸屏障功能障礙情況及平胃散的調節作用。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 SD大鼠40只，雌雄各半，體重180 g～220 g，由成都中醫藥大學實驗動物中心提供，檢疫后備用。適應性飼養1 w，自由攝食全價顆粒飼料，動物房溫度維持在18℃～25℃左右。

1.1.2 實驗藥物 造模用藥：成都人人樂超市購買的熟豬油，自制4℃冰水。治療用藥：平胃散，配方：蒼術24 g，厚樸18 g，陳皮12 g，炙甘草6 g，均購自同仁堂成都分店，經成都中醫藥大學制劑室鑒定合格。先將藥物加水500 mL浸泡1 h，然后與大棗2枚、生姜2片一同煎煮至300 mL左右，再濃縮成濃度為1 g生藥/mL藥液，4℃冰箱保存備用。

1.1.3 實驗試劑 谷氨酰胺（Gln）測試盒，批號：20070628；ATPase（定磷法）測試盒，批號：20070629；考馬斯亮藍測試盒，批號：20070714，均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 實驗方法

1.2.1 造模及給藥 SD大鼠40只，雌雄各半。隨機分為2批，10只常規飼養（空白組），30只造模。濕困脾胃模型造模方法：使大鼠居住在溫度18℃～25℃，濕度90%以上的造模箱內，每日上午用小站臺法控制睡眠時間5 h，單日禁食并給予4℃冰水灌胃1次（1 mL/只），雙日供應充足飼料并給予豬油灌胃1次（4 mL/只），連續20 d。造模結束后，30只大鼠隨機分為模型組、平胃散組和自然恢復組。平胃散組大鼠給予平胃散湯劑灌胃（10 mL/kg），空白組、模型組和自然恢復組給予等量0.9%生理鹽水灌胃，共3 d。

1.2.2 檢測方法 模型組于造模結束當日處死取材，其他3組3 d后處死取材。冰上取空腸組織各100 mg，冰水勻漿配制成10%勻漿液。待檢測樣品處理方法：Gln：4℃3000 r/min，離心10 min取上清液，-80℃冰凍保存待測；ATPase：4℃ 1500 r/min，離心 15 min取上清液，-80 ℃冰凍保存待測；考馬斯亮藍測定蛋白含量：4℃1500 r/min，離心10 min取上清液，-80℃冰凍保存待測。檢測操作及運算嚴格按照實驗說明書步驟進行。

1.3 統計學方法

實驗資料中的數據采用SPSS11.0 for Windows統計分析軟件分析處理，數據用（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析。

2 結果

2.1 動物一般狀態觀察

空白組大鼠在整個實驗過程中，自始至終形體肥壯，食量較多，活動靈敏，背毛光澤，尾色正常，未見大便溏瀉。模型組大鼠反應遲鈍，體重減輕，嗜臥懶動，皮毛色澤晦暗，毛發打結，尾色蒼白無澤，大便溏，飲水量明顯減少。給藥后，平胃散組大鼠體征有所改善，自然恢復組大鼠體征改善不明顯。

2.2 空腸Gln含量變化

結果見表1。

表1 空腸Gln變化比較 （±s）

表1 空腸Gln變化比較 （±s）

注：與空白組比較，1）P<0.01；與模型組比較，2）P<0.05，3）P<0.01

組別 n 空腸G l n（m m o l/L）空白組 10 3.6065±1.6080 3）模型組 10 1.1114±0.4579 1）平胃散組 10 2.0519±0.6252 1）2）自然恢復組 10 1.3243±0.6525 1）

由表1可知，與模型組比較，平胃散組空腸Gln濃度明顯升高，差異有統計學意義（P<0.05）。

2.3 空腸 Na＋-K＋-ATPase、Ga2＋-ATPase 活力變化比較

結果見表2。

表2 空腸 Na＋-K＋-ATPase、Ga2＋-ATPase 活力變化比較 （±s）

表2 空腸 Na＋-K＋-ATPase、Ga2＋-ATPase 活力變化比較 （±s）

注：與模型組比較，1）P<0.05；與空白組比較，2）P<0.01

空腸 G a 2＋-A T P a s e 活力（m m o l P i/m g·h）空白組 10 3.1101±1.0326 2.6877±1.3768模型組 10 1.7317±0.2791 2） 1.3803±0.3202 2）平胃散組 10 2.4577±0.6859 2.0826±0.5079自然恢復組 10 1.7186±0.5614 1.7628±0.6975 1）組別 n 空腸N a＋-K＋-A T P a s e活力（m m o l P i/m g·h）

由表2可知，與空白組比較，模型組大鼠空腸Na＋-K＋-ATPase、Ga2＋-ATPase活力顯著下降，差異有統計學意義（P<0.01）；Na＋-K＋-ATPase 活 力 自 然 狀 態 下 未 恢 復 ，Ga2＋-ATPase活力自然狀態下有一定恢復，經平胃散治療后均有一定好轉。

3 討論

3.1 濕困脾胃證與Gln水平的探討

目前認為，Gln是腸黏膜屏障中一個非常重要的營養素，它是腸上皮細胞、淋巴細胞和巨噬細胞的重要代謝燃料，腸道70%以上的能量供給依賴Gln。Gln參與三羧酸循環，葡萄糖氧化生成ATP供能，是腸道相關淋巴組織細胞和其他各種免疫細胞中核酸、蛋白質等生物分子合成的主要供氮體和氧化供能底物［2］。眾多研究表明，Gln能夠增加腸黏膜厚度，上皮細胞絨毛長度及縮小緊密連接間隙，維護腸黏膜結構；提高中性粒細胞的殺菌能力及SIgA水平，增強腸黏膜免疫功能，增加黏膜含氮量，減少腸道細菌和內毒素移位，從而提高腸黏膜的通透性，維持腸黏膜功能的完整［3］。同時，Gln也是谷胱甘肽生物合成的前體，有利于還原型谷胱甘肽的儲存；谷胱甘肽又是細胞內抗氧化防御系統的重要組成部分，因此Gln對清除機體自由基堆積也有間接作用［3］。臨床上，Gln已作為治療腸黏膜屏障損傷的最重要療法—腸內營養的首選營養劑［4］。

本實驗中，模型大鼠Gln含量明顯下降，說明濕困脾胃證導致腸道多種細胞供能嚴重不足，腸上皮細胞供能不足，導致腸上皮細胞絨毛變短，緊密連接間隙增大，腸黏膜萎縮，腸道通透性增加，腸黏膜機械屏障損傷；免疫細胞供能不足，SIgA分泌減少，免疫功能下降，腸免疫屏障功能障礙；Gln不足導致谷胱甘肽合成減少，自由基清除不利，加速腸黏膜屏障損傷。自然恢復下大鼠Gln水平難以恢復，給予平胃散治療后，Gln水平有較好恢復，提示平胃散可能通過提高機體Gln水平來修復損傷的腸黏膜屏障。

3.2 濕困脾胃證與ATPase活性的探討

ATPase主要存在于組織細胞及細胞器的膜上，是生物膜上的蛋白酶，它在水液代謝、物質轉運、能量轉換以及信息傳遞方面發揮重要作用，維持細胞內外水、電解質平衡，維持細胞的興奮性和傳導性，調節神經遞質的釋放及代謝。在腸道，Na＋-K＋-ATPase主要分布于質膜上，通過細胞內Na＋和細胞外K＋的跨膜主動交換，使細胞外與細胞內產生 Na＋濃度梯度，然后通過膜上Na＋、Ga2＋交換器將胞漿中Ga2＋排出胞外，維持腸道平滑肌細胞正常膜電位和生理功能［5］。Ca2＋-ATPase在腸道平滑肌電生理中發揮重要作用，Ga2＋是胃腸起搏細胞Cajal間質細胞（Interstitial Cells of Cajal，ICC）重要且必需的離子基礎，ICC 主要依靠 Ga2＋攜帶內向瞬時電流形成電位差起搏腸道平滑肌［6］。

筆者在以前的研究中即發現，濕困脾胃證大鼠紅細胞膜、肝細胞、結腸組織、腦組織 Na＋-K＋-ATPase 活性降低，平胃散均可糾正這種異常。結合本次研究中造模大鼠空腸組織 Na＋-K＋-ATPase、Ga2＋-ATPase 活力均明顯下降，提示多系統ATPase活性下降是濕困脾胃證的基本病理改變之一。其損傷機制可能如下：Na＋-K＋-ATPase受到抑制，細胞內 Na＋增多-Na＋、Ga2＋交換增加-細胞內 Ga2＋堆積，松解緊密連接及提高腸上皮通透性，并激活特異的鈣依賴的磷脂酶和蛋白酶，引起細胞損傷和死亡；細胞外Na＋、Ga2＋濃度降低，ICC自發電生理活動被抑止，腸蠕動減慢；ATPase代謝障礙，降解為次黃嘌呤，繼而被黃嘌呤氧化酶催化為黃嘌呤在組織中聚積，產生大量自由基損傷細胞［7］。在這三重打擊下，腸黏膜機械屏障功能及完整性均遭到破壞，Na＋腸道吸收障礙，細胞外液Na＋濃度繼續降低，導致低鈉血癥發生，臨床上低鈉血癥可見患者無口渴感，飲水減少，少尿或凹陷性水腫，這與濕困脾胃證主癥較為相似。給予平胃散治療后，二酶活性均有較好恢復，效果好于自然恢復組，提示復方平胃散可能是通過提高組織ATPase活性來修復細胞紊亂的能量及水液代謝，發揮燥濕健脾之效。

［1］劉偉，黃秀深，羅玉熙，等.濕阻證動物模型研究進展［J］.四川中醫，2005，24（4）：35-36.

［2］Domeneghini C，Di Giancamillo A，Bosi G，et al.Can nutraceuticals affect the structure of intestinal mucosa？Qualitative and quantitative microanatomy in L-glutamine diet-supplemented weaning piglets［J］.Vet Res Commun，2006，30（3）：331，42.

［3］秦環龍，沈通一.谷氨酰胺在腸道屏障功能障礙中的作用［M］//王興鵬.腸道屏障功能障礙：基礎與臨床.上海：第二軍醫大學出版社，2006：444-451.

［4］Coeffier M，Dechelotte P.The role of glutamine in intensive care unit patients：mechanisms of action and clinical outcome［J］.Nutr Rev.2005，63（2）：65，9.

［5］吳麗穎，王興鵬.腸黏膜內pH值及其氧代謝［M］//王興鵬.腸道屏障功能障礙：基礎與臨床.上海：第二軍醫大學出版社，2006：173-174.

［6］謝勇，周南進.Cajal細胞［M］//王興鵬.腸道屏障功能障礙：基礎與臨床.上海：第二軍醫大學出版社，2006：95-96.

［7］王宏志，劉俊，宋慧，等.烏司他丁聯合三七總皂甙對急性胰腺炎大鼠氧自由基的影響［J］.世界華人消化雜志，2007，15（17）：1956-1959.