烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠血液黏度、TXB2、6-keto-PGF1α、ET、NO、SOD及MDA的影響

黃仕文，戴啟剛

（南京中醫(yī)藥大學，江蘇南京210029）

《金匱要略》中主治陽氣不足、陰寒痼結(jié)心下之胸痹之方烏頭赤石脂丸由蜀椒、制川烏、制附子、干姜、赤石脂組成。前期實驗研究使用異丙腎上腺素復制類似于冠心病、心絞痛等心肌損傷模型，結(jié)果表明烏頭赤石脂丸能減輕大鼠心肌損傷，保護缺血心肌［1］。本實驗擬以冰水游泳加注射垂體后葉素復制大鼠陽虛寒凝胸痹模型，檢測胸痹大鼠血液黏度、血栓素 B2（TXB2）、6-酮-前列腺素 F1α（6-keto-PGF1α）、內(nèi)皮素（ET）、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）活性，探討烏頭赤石脂丸保護寒凝胸痹大鼠損傷心肌的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 SD大鼠72只，（200±20）g，雌雄各半，由南京中醫(yī)藥大學動物中心提供，動物許可證號為SCXK（滬）2007-0005。

1.1.2 藥品和試劑 烏頭赤石脂丸中蜀椒、制川烏、附子、干姜、赤石脂按 2∶1∶1∶1∶2 取一定量，煎煮時先將制川烏、附子放入10倍總藥量水中浸泡30 min后先煎1 h，再放入其他藥煎煮30 min，過濾，藥渣加8倍量水煎煮30 min，過濾，合并濾液，水浴濃縮至每毫升含生藥1.0 g，4℃冰箱保存，備用；垂體后葉素，上海禾豐制藥有限公司；NO、SOD、MDA試劑盒，南京建成生物技術(shù)有限公司；TXB2、ET、6-keto-PGF1α放免試劑盒，北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司，由南京市第一人民醫(yī)院白下區(qū)鑫園分院放免實驗室檢測。

1.1.3 實驗儀器 酶標儀，賽默飛世爾科技；自動放免儀，中國科大中佳公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組與給藥 72只SD大鼠隨機分為空白對照組，ADH模型組，烏頭赤石脂丸低、中、高劑量組（給藥量分別相當于人體等效劑量的1/3量即0.63 g/kg、等效量即1.89 g/kg、3倍量即5.67 g/kg），復方丹參滴丸組（給藥量相當于人體等效劑量72.9 mg/kg）6組，每組12只。空白對照組、模型組大鼠灌胃生理鹽水，其余各組灌胃相應藥物，每日1次，連續(xù)2 w。

1.2.2 模型制備 參考文獻［2］并結(jié)合預實驗結(jié)果建立如下模型：除空白對照組外，其余各組大鼠每日灌胃30 min后，于0℃～4℃冰水中游泳3 min～5 min。于末次游泳結(jié)束后，除空白對照組外，其余各組腹腔注射垂體后葉素20 U/kg。

1.2.3 標本采集與指標檢測 于注射垂體后葉素24 h后，所有大鼠用戊巴比妥鈉麻醉，頸總動脈采血（所采血分三份，二份抗凝、一份不抗凝），不抗凝血常規(guī)分離血清，抗凝血一份分離血漿，一份留測全血黏滯度；按試劑盒說明書方法檢測血清NO（硝酸還原酶法）、SOD（黃嘌呤氧化酶法）、MDA（TBA 法），放免法檢測 TXB2、6-keto-PGF1α、ET活性。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 樣本脫落

本實驗在造模過程中除空白對照組外，其他每組均有死亡，其死亡數(shù)（即樣本脫落數(shù)）及死亡率（即脫落率）見表1。

表1 各組大鼠樣本脫落數(shù)及脫落率

由表1可以看出，各組樣本脫落數(shù)與脫落率存在差異，從而說明相應的藥物干預能夠提高大鼠對寒冷刺激和ADH所致缺血損傷的耐受力。

2.2 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠全血及血漿黏度的影響結(jié)果見表2。

表2 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠全血及血漿黏度的影響 （mPa·s，s）

表2 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠全血及血漿黏度的影響 （mPa·s，s）

注：與空白對照組相比，1）P＜0.01，2）P＜0.05；與模型組相比，3）P＜0.01，4）P＜0.05

組別 n 全血黏度 血漿黏度1 s 5 s 30 s 200 s空白對照組 12 20.13±1.77 9.67±0.86 6.01±0.63 4.94±0.32 1.17±0.06模型組 7 28.63±4.271） 13.01±1.541） 7.73±0.711） 5.90±0.461） 1.22±0.032）低劑量組 10 23.37±1.263） 11.21±1.013） 6.78±0.493） 5.24±0.333） 1.17±0.044）中劑量組 9 20.02±2.673） 11.03±0.543） 6.74±0.303） 5.24±0.223） 1.13±0.053）高劑量組 8 16.78±3.963） 8.41±1.513） 5.42±0.743） 4.36±0.503） 1.12±0.023）復方丹參滴丸組 9 25.01±2.324） 11.62±1.004） 7.01±0.574） 5.40±0.434） 1.17±0.034）

由表2可見，與空白對照組相比，模型組不同切變率的全血及血漿黏度升高（P＜0.01，P＜0.05）；與模型組相比，各治療組不同切變率的全血及血漿黏度均顯著降低（P＜0.01，P＜0.05）。

2.3 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α 水平的影響

結(jié)果如表3。由表3可見，與空白對照組相比，模型組TXB2含量升高（P＜0.05），6-keto-PGF1α含量下降（P＜0.01）。與模型組相比，高、中劑量組TXB2含量顯著降低（P＜0.01），高、低劑量組 6-keto-PGF1α含量升高（P＜0.01）。

表3 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α水平的影響 （s）

表3 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α水平的影響 （s）

注：與空白對照組相比，1）P＜0.01；與模型組相比，2）P＜0.01

?

2.4 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠血清ET、NO水平的影響

結(jié)果見表4。

表4 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠血清ET、NO水平的影響 （s）

表4 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠血清ET、NO水平的影響 （s）

注：與空白對照組相比，1）P＜0.01；與模型組相比，2）P＜0.01，3）P＜0.05

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由表4可以看出，與空白對照組相比，模型組ET值升高、NO值下降（P＜0.01）；與模型組相比，烏頭赤石脂丸各劑量組、復方丹參滴丸組 ET含量顯著降低（P＜0.01，P＜0.05），中、高劑量組 NO 含量升高（P＜0.01，P＜0.05）。

2.5 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠血清SOD、MDA水平的影響

結(jié)果見表5。

表5 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠血清SOD、MDA水平的影響 （s）

表5 烏頭赤石脂丸對寒凝胸痹大鼠血清SOD、MDA水平的影響 （s）

注：與空白對照組相比，1）P＜0.01；與模型組相比，2）P＜0.05

?

由表5可見，模型組較空白對照組SOD含量降低（P＜0.01），與模型組相比，高劑量組 SOD 含量升高（P＜0.05）；MDA值各組間比較差異無統(tǒng)計學意義，尤其是正常組與模型組差異也無統(tǒng)計學意義，其原因值得進一步深究。

3 討論

心肌缺血性損傷的發(fā)病機制主要有：氧自由基的作用、鈣超載、微血管病變和細胞損傷等［3］。機體通過神經(jīng)、體液、免疫等一系列因素進行調(diào)節(jié)，促進或改善心肌損傷狀況。TXA2與PGI2是生物活性完全相反的血管活性物質(zhì)，TXA2具有很強的誘導血小板聚集和血管收縮作用，而PGI2是內(nèi)皮細胞合成并分泌的血管舒張因子，其主要作用抑制血小板的黏附與聚集，拮抗TXA2，使血管擴張。TXA2和PGI2的性質(zhì)極不穩(wěn)定，不易檢測，而其相應的代謝產(chǎn)物血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）則較穩(wěn)定，因此測定TXB2和6-keto-PGF1α的濃度，可反映TXA2和PGI2的含量。當血流動力學改變，可刺激血管內(nèi)皮細胞分泌內(nèi)皮素（ET）或一氧化氮（NO），ET是作用較強的血管收縮劑之一，而NO則具有較強的舒血管作用，兩者改變可調(diào)節(jié)損傷心肌血供。心肌缺血后活化的中性粒細胞大量聚集在缺血區(qū)，加速了自由基的生成，導致氧自由基堆積，而活性氧自由基和細胞膜脂質(zhì)發(fā)生反應，生成大量 MDA，并使抗氧化酶SOD含量降低，導致氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡，清除自由基的能力降低，從而引起心血管組織嚴重損傷，因而SOD、MDA活性可反映機體抗氧自由基的能力。

本實驗結(jié)果表明，烏頭赤石脂丸各劑量組均能降低寒凝胸痹大鼠的全血或血漿黏度，改善寒凝胸痹大鼠的血液流變學，而對血清中活性因子的水平改變則存在差異。烏頭赤石脂丸能增加TXB2的合成分泌、降低6-keto-PGF1α的合成分泌。烏頭赤石脂丸能降低ET的合成分泌，提高NO、SOD的水平，對MDA水平無顯著影響。

烏頭赤石脂丸對冰水游泳加注射垂體后葉素所致的寒凝胸痹大鼠損傷心肌的保護作用可能主要是通過抑制血小板的黏附、聚集，刺激血管內(nèi)皮細胞合成擴血管NO、抑制縮血管ET產(chǎn)生，從而降低血液黏滯度，改善血流動力學來實現(xiàn)的。

［1］戴啟剛，汪受傳，王忠山，等.烏頭赤石脂丸對異丙腎上腺素所致大鼠心肌損傷的保護作用［J］.北京中醫(yī)藥大學學報，2011，34（11）：755-758.

［2］閆娟娟，高文遠.黃芪桂枝五物湯對胸痹陽虛寒凝證大鼠的心電圖和血清酶的影響［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2009，43（1）：75-77.

［3］金惠銘，王建枝.病理生理學［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：141-155.