加味溫膽湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性冠心病痰濁血瘀證家兔模型血清IL—6水平的影響

張麗麗　李雁

[摘要] 目的 通過觀察加味溫膽湯對(duì)冠心病痰濁血瘀證動(dòng)物模型血清IL—6水平的影響，以探討其在冠心病發(fā)病中的作用機(jī)制。 方法 采用冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)和高脂飼料喂養(yǎng)法，建立近似冠心病痰濁血瘀證動(dòng)物模型，將家兔40只隨機(jī)分成5組，每組8只，即空白組、模型組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組，中藥低、中、高劑量組分別以加味溫膽湯治療14 d，采用ELISA法觀察加味溫膽湯對(duì)冠心病痰濁血瘀證動(dòng)物血清IL—6水平的影響。 結(jié)果 中藥高、中、低劑量組，與模型組相比，可改善家兔血液流變學(xué)變化，抑制血清IL—6水平。 結(jié)論 加味溫膽湯能夠改善家兔血液流變學(xué)變化，抑制血清IL—6水平，能夠穩(wěn)定冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，對(duì)冠心病痰濁血瘀證起到一定的防治作用。

[關(guān)鍵詞] 加味溫膽湯；冠心病痰濁血瘀證；IL—6

[中圖分類號(hào)] R541.4[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1673—9701（2012）24—0001—02

Effect of Wendan Decoction on serum IL—6 level of experimental coronary heart disease phlegm and blood stasis syndrome model in rabbits

ZHANG Lili LI Yan

Cardiovascular Division，Heilongjiang Academy of TCM，Haerbin 150036，China

[Abstract] Objective To observe Wendan Decoction infulence on serum IL—6 level of the coronary heart disease phlegm and blood stasis syndrome model in rabbits and to investigate its mechanism for coronary heart disease. Methods Replicated the animal models with the method of coronary artery ligation and high fat feeding. 40 rabbits were devided into 5 groups at random， the blank group and the other four groups with 8 rabbits each. Treat the rats of high dose traditional Chinese medicine group and low dose traditional Chinese medicine group with the treatment of Wendan Decoction about 14 days. At the same time， elise method was used to to observe the effect on the coronary heart disease Phlegm and blood stasis Syndrome Model in rabbits serum IL—6 level. Results The high dose traditional Chinese medicine group and low dose traditional Chinese medicine group comparison with model group，prescription of Wendan Decoction can improve the blood rheology of the rabbits model with coronary heart disease. It also can inhibit serum the level of serum IL—6. Conclusion The prescription of Wendan Decoction can improve the blood rheology of the rabbits model with coronary heart disease and inhibit serum the level of serum IL—6. To stabilize the coronary atherosclerotic plaque. Phlegm Blood Stasis Syndrome of coronary heart disease plays a role in prevention and treatment.

[Key words] Wendan Decoction； Coronary heart disease phlegm and blood stasis syndrome； IL—6

冠心病是指冠狀動(dòng)脈粥樣硬化管腔狹窄，冠狀動(dòng)脈循環(huán)改變，心肌缺血、缺氧引起冠狀動(dòng)脈血流和心肌需求的不平衡的心臟疾患。其病因與高脂血癥、高血壓病和吸煙等因素有關(guān)。冠心病是一種嚴(yán)重的致殘性和致死性疾病，近年來冠心病的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，位于嚴(yán)重威脅人類健康的三大主要疾病之首，因此，對(duì)冠心病的防治具有十分重要的意義。近年來發(fā)現(xiàn)IL—6在動(dòng)脈粥樣硬化形成及冠心病心絞痛的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用。本文通過檢測(cè)冠心病動(dòng)物模型血清IL—6含量，以探討其在冠心病發(fā)病中的作用機(jī)制，旨在找出更加有效的治療冠心病痰濁血瘀證的中藥制劑，為中醫(yī)治療冠心病痰濁血瘀證提供有效的治療藥物，以減輕患者的痛苦。

1材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑

加味溫膽湯組成：半夏、陳皮、茯苓、甘草、膽星、竹茹、蒼術(shù)、元胡、丹參、川芎、赤芍、牛膝、黃芪等藥物經(jīng)兩次煎煮后，過濾、混合，分別濃縮成濃度為1∶1（2.4 g生藥/mL）、2∶1（4.8 g生藥/mL）、4∶1（9.6 g生藥/mL）的水煎劑備用；IL—6試劑盒購(gòu)自晶美生物工程有限公司。

1.2 動(dòng)物模型制備及分組

將4～5月齡雄性家兔40只隨機(jī)分成5組，每組8只，即空白組、模型組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組。空白組家兔以普通飼料喂養(yǎng)，其余4組家兔均以高脂飼料喂養(yǎng)，高脂飼料配方：膽固醇1%，蛋黃粉15%，豬油15%，基礎(chǔ)飼料79%。在第35天施冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)，予以30 mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，剪毛，常規(guī)消毒，開胸，暴露心臟于胸腔外，于冠狀動(dòng)脈左前降支完全結(jié)扎，心電圖監(jiān)測(cè)，以J點(diǎn)和T波顯著改變?cè)u(píng)價(jià)結(jié)扎是否成功。結(jié)扎后關(guān)胸，縫合，連續(xù)3 d注射青霉素預(yù)防感染。造模成功后，中藥低、中、高劑量組分別以一定濃度的中藥灌胃，灌胃14 d，同時(shí)模型組每日以等容積的生理鹽水灌胃。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物。

1.3 血液流變學(xué)檢測(cè)

治療后進(jìn)行血液流變學(xué)檢測(cè)，檢測(cè)指標(biāo)：全血黏度高切變率（ηbH）、全血黏度低切變率（ηbL）、血漿黏度（ηp）、纖維蛋白原（Fib）。檢測(cè)儀器：北京普利生LBY—N6B血流變儀。

1.4 血清IL—6檢測(cè)

應(yīng)用ELISA法檢測(cè)各組動(dòng)物的血清IL—6水平，簡(jiǎn)要步驟：從室溫平衡20 min后的鋁箔袋中取出所需板條，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μL；待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10 μL，再加樣本稀釋液40 μL；隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100 μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60 min。棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1 min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。每孔加入底物A、B各50 μL，37℃避光孵育15 min。每孔加入終止液50 μL，15 min內(nèi)在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多個(gè)樣本均數(shù)比較用方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)。P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。全部數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行。

2 結(jié)果

加味溫膽湯治療后血液流變學(xué)和IL—6變化。與空白組相比，各組家兔血液流變及血清IL—6水平明顯升高（P < 0.05）；與模型組相比，中藥高、中、低劑量組血液流變及血清IL—6水平明顯受到抑制（P < 0.05）；中藥高劑量組與中藥低劑量組相比，血液流變及血清IL—6水平抑制更明顯（P < 0.05）。

3 討論

血液流變學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)在冠心病的診斷和防治方面是一項(xiàng)重要的檢測(cè)指標(biāo)，包含血液黏度、血漿黏度和纖維蛋白原等幾個(gè)主要指標(biāo)；其中血液黏度是血液流變學(xué)的核心指標(biāo)，它是血漿黏度、血細(xì)胞比容、紅細(xì)胞聚集性、變形性等流變學(xué)指標(biāo)的綜合表現(xiàn)，主要作用是維持血流的正常運(yùn)行。如果血液黏度增高，易發(fā)生血栓性疾病，主要是由于血流速度減慢，血液攜氧減少能力減弱，導(dǎo)致二氧化碳潴留引起的。血漿黏度和纖維蛋白原在血流變檢測(cè)中也具有重要的意義，尤其是纖維蛋白原的地位不容忽視，許多學(xué)者認(rèn)為纖維蛋白原可作為反映血栓狀態(tài)的重要指標(biāo)，纖維蛋白原是大分子糖蛋白，可破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞，聚集在紅細(xì)胞表面，增加紅細(xì)胞的吸附力，減慢血液流動(dòng)，增加黏附力，導(dǎo)致細(xì)胞變形和凝固，促進(jìn)血栓形成。

本實(shí)驗(yàn)中全血黏度、血漿黏度、纖維蛋白原指標(biāo)明顯高于空白組，說明血液成分和血液流變學(xué)的改變是冠心病發(fā)病的重要因素，血液黏度增高，血流緩慢、組織供氧能力降低，自由基代謝紊亂，導(dǎo)致動(dòng)脈內(nèi)膜受損、纖維素壞死、血管壁粥樣硬化以及血栓形成。與模型組相比，中藥高、中、低劑量組血液流變明顯受到抑制（P < 0.05），說明加味溫膽湯對(duì)血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)均有一定程度的抑制作用，可以改善血液黏度增高、血流速度緩慢、組織供氧能力降低等問題，從而改善冠脈血管的功能，因此，改善血液流變性是冠狀動(dòng)脈供血、心肌供氧的重要保證。

炎癥貫穿了冠心病的發(fā)生、發(fā)展過程的始終，是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定的主要發(fā)病機(jī)制，血清IL—6參與了炎癥反應(yīng)的全過程，人們已對(duì)炎癥標(biāo)志物IL—6進(jìn)行了深入研究，血清IL—6是重要的細(xì)胞因子之一，發(fā)現(xiàn)它在冠心病的發(fā)病過程中起了重要的作用。本實(shí)驗(yàn)中與空白組相比，各組家兔血清IL—6水平明顯升高（P < 0.05），IL—6 水平與心血管事件的發(fā)生呈明顯正相關(guān)，與模型組相比，中藥高、中、低劑量組血清IL—6水平明顯受到抑制（P < 0.05），說明加味溫膽湯對(duì)冠心病家兔血清IL—6水平有一定的抑制作用，尤以中藥高劑量組作用最為明顯，由此可見通過對(duì)細(xì)胞因子的抑制作用，減輕炎癥過程反應(yīng)，對(duì)于減少心血管事件的發(fā)生具有重要的臨床價(jià)值。

[參考文獻(xiàn)]

[1]許文榮，王建中. 臨床血液學(xué)與檢驗(yàn)[M]. 第5版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：361—367.

[2]周強(qiáng)，張文，黃憲章. 慢性阻塞性肺疾病急性加重期血流變性觀察[J].微循環(huán)學(xué)雜志，2003，13（2）：32—33.

[3]袁惠敏，劉芳，李東霞，等. 老年冠心病患者血漿D—二聚體和纖維蛋白原檢測(cè)及臨床意義[J]. 中國(guó)醫(yī)師雜志，2006，8（12）：1704.

[4]Biasucci LM，Santamaria M，Liuzzo G. Inflammation，atherosclerosis and acute coronary syndromes[J]. Minerva Cardioangiol，2002，50（5）：475—486.

[5]Ralllidis LS，Zolindaki MG，Manioudaki HS，et al. Prognostic value of C—reactive protein，fibrinogen，interleukin—6，and macrophage colony stimulating factor in severe unstable angina[J]. Clin Cardiol，2002，25（11）：505—510.

（收稿日期：2012—06—07）