β-防御素2在潰瘍性結腸炎中的表達及意義

摘 要 目的：研究β-防御素2在潰瘍性結腸炎中的表達及其與病情嚴重程度的相關性，探討β-防御素2在潰瘍性結腸炎的診斷及嚴重程度判斷中的臨床意義。方法：應用免疫組織化學的方法檢測60例潰瘍性結腸炎黏膜組織標本，并根據病情嚴重程度分為3組，輕度26例、中度20例、重度14例，以及15例正常結腸黏膜組織標本中β-防御素2的表達。結果：①正常結腸黏膜組織標本中β-防御素2表達較弱。②β-防御素2在輕、中、重度潰瘍性結腸炎黏膜組織中的陽性表達率分別為38.46%(10/26)、75.00%(15/20)及92.85%(13/14)，并隨病情嚴重程度增高而增高(P＜0.05)。結論：β-防御素2在潰瘍性結腸炎中具有重要的意義。

關鍵詞 潰瘍性結腸炎 β-防御素2 免疫組織化學

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.06.190

Abstract Objective:to study the beta defense element in the expression and ulcerative colitis and in serious condition degree of correlation，this paper discusses the beta defense element in the diagnosis of ulcerative colitis and severity judge the clinical significance.Immunohistochemical method of detection.Methods:60 patients with ulcerative colitis mucosal tissue samples，and according to the illness severity is divided into three groups，26 patients with mild，moderate，and severe 20 cases in 14 cases，and 15 cases of normal colonic mucosal tissue samples in beta defense element 2 expression.Results:①the normal colonic mucosa tissue samples in beta defense element 2 expression are relatively weak.②beta defense element in light，medium，and severe ulcerative colitis mucosal tissue of positive expression rate were 38.46% (10/26)，75.00% (15/20) and 92.85% (13/14)，and with the illness severity and heighten increased(P＜0.05).Conclusion:beta defense element in ulcerative colitis is of great importance.

Key Words Ulcerative colitis;Beta defense element 2;Immunohistochemical

潰瘍性結腸炎是一種非特異性結腸炎癥，其發病可能與環境、遺傳、感染、免疫、精神及過敏等因素有關^［1］，近年來其發病率明顯上升，已引起國內外廣泛關注。故從分子生物學角度探討其發病機制及進展程度已經成為國內外近年來研究的熱點及重點問題，為臨床工作者提供一個診斷及評估其嚴重程度的參考。防御素是一種廣泛存在于動、植物體內具有廣譜抗菌活性的內源性小分子多肽^［2］。防御素在腸道上皮細胞屏障中起重要的保護作用。β-防御素2是最早發現的呈誘導型表達的防御素，在炎癥組織中大量表達，起到防御保護作用^［3］。本文通過免疫組織化學的方法，比較β-防御素2在潰瘍性結腸炎病變黏膜組織中和正常結腸黏膜組織中的表達，并分析潰瘍性結腸炎不同病情輕重與β-防御素2的表達關系，探討β-防御素2在潰瘍性結腸炎發病過程中的診斷及嚴重程度判斷的臨床意義。

資料與方法

2007年9月～2010年6月內鏡室取材及病理證實為潰瘍性結腸炎的標本60例。并根據2000年成都全國慢性炎癥性腸病學術研討會制定的診斷標準，分為輕度(26例)、中度(20例)、重度(14例)3組。標本蠟塊來源于病理科。患者均有詳細的臨床資料和內鏡檢查記錄。男女比例1.7:1；年齡18～68歲。15例正常結腸黏膜組織標本為病理證實正常的病例。所有標本均經10%福爾馬林固定，石蠟包埋，3μm厚連續切片。

方法：⑴Envision System免疫組織化學(IH)檢測步驟：脫蠟至水后按免疫組化Envision System法操作。一抗兔抗人β-防御素2多克隆抗體；二抗和S-P試劑盒。染色以PBS代替一抗，設立陰性對照。⑵圖像采集設備：視野采圖及測量采用BI2000高清晰圖象處理系統軟件。⑶免疫組化染色結果判斷：結果判定采用在400倍鏡下隨機采集10個視野，采用雙項積分法行陽性細胞計數：①細胞陽性率：＜5% 0分；5%～25% 1分；26%～50% 2分；51%～75% 3分；＞75% 4分。②染色強度：淡黃色1分；黃或深黃色2分；褐或棕褐色3分。兩者計分相乘＞1分為陽性。

統計學處理：統計學處理用SPSS 13.0統計軟件進行分析，采用X2檢驗和Spearman相關分析，檢驗水準取0.05，P＜0.05認為有統計學意義。

結 果

在正常結腸黏膜組織標本中β-防御素2表達較弱。

β-防御素2在潰瘍性結腸炎黏膜組織中的表達：潰瘍性結腸炎黏膜組織中β-防御素2的表達為位于胞核的棕黃色顆粒，在輕、中、重度潰瘍性結腸炎黏膜組織中的陽性表達率分別為38.46%(10/26)、75.00%(15/20)及92.85%(13/14)，X2=5.284，P=0.022，其差異有統計學意義。見表1。

在輕度潰瘍性結腸炎黏膜組織中僅見少數細胞β-防御素2陽性染色，并隨惡性程度升高而增加。對研究組潰瘍性結腸炎的病情嚴重程度與β-防御素2陽性表達率應用Spearman相關分析得出：r=0.835，P＜0.05，證實β-防御素2表達率與潰瘍性結腸炎的病情嚴重程度成正相關。見表2。

討 論

潰瘍性結腸炎是一組病因不明的慢性腸道炎癥性疾病，目前大多數研究認為與免疫反應異常有關，尤與腸黏膜局部免疫反應的異常關系密切^［4］。潰瘍性結腸炎是炎癥性腸病的一種，多數文獻報道潰瘍性結腸炎患者體內防御素水平發生了變化，從而推測防御素的異常表達可能是潰瘍性結腸炎發病的重要因素之一。本研究旨在探討防御素與潰瘍性結腸炎的關系。

β-防御素2在結腸黏膜組織表達的各種因子中顯得較為突出，不僅能抵御外來病原微生物的侵害，防止正常腸道菌群的潛在危害，還能調節炎癥反應，并在創傷修復過程中也起到重要作用^［5］，是腸道屏障的重要組成部分。β-防御素2在正常狀態下表達很少，而在受到炎性刺激時，β-防御素2則大量表達，發揮防御作用。通過研究發現β-防御素2在正常結腸黏膜組織中的表達較弱，均低于病變組的表達，且具有統計學意義，這說明β-防御素2的表達與潰瘍性結腸炎的活動有關，這與目前國內外研究一致；本研究還顯示，在不同病情嚴重程度的潰瘍性結腸炎黏膜組織中β-防御素2的表達也不盡相同，在輕度潰瘍性結腸炎黏膜組織中的表達明顯低于高度潰瘍性結腸炎黏膜組織中的表達，并且隨著嚴重程度的增高而增加，具有統計學意義，這說明潰瘍性結腸炎活動性越強，也就是嚴重程度越大，β-防御素2的表達越高，也就越能保護腸道組織，所以臨床上可以通過檢測β-防御素2來判斷潰瘍性結腸炎的嚴重程度。

綜上所述，本研究結果表明β-防御素2參與了潰瘍性結腸炎的發生和發展過程，是潰瘍性結腸炎發病過程中起保護作用的一個重要參與因素。隨著對β-防御素2與潰瘍性結腸炎關系研究的不斷深入，不僅為臨床上診斷潰瘍性結腸炎提供了一個依據。而且在治療上防御素作為一種內源性抗菌肽，是一種理想型的新型藥物，可利用基因工程技術大量制備，為潰瘍性結腸炎的臨床治療提供新的方向。

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