微柱凝膠技術配血影響因素分析

摘 要 目的：探討微柱凝膠配血技術的影響因素，以保證輸血安全。方法：分別采用血液中心供血袋所連接的血辮中血樣和患者未抗凝血樣進行交叉配血，以研究抗凝劑對配血結果的影響；對不同廠家的微柱凝膠采用不同的孵育時間，以研究孵育時間對配血結果的影響；采用不同的離心機離心，以研究不同離心速度對配血結果的影響；采用與新生兒血型不同的供血進行交叉配血，以觀察新生兒抗體的產生規律。結果：采用血辮中的標本，由于其未能與抗凝劑充分混合，假陽性率為86.67%(52/60)；患者血樣不抗凝，配血假陽性結果為90.63%(87/96)；如果孵育時間由15分鐘縮短至5分鐘，陽性標本的漏檢率為66.67%(8/12)；使用不配套的離心機配血結果假陽性率為23.81%(5/21)，假陰性率為25%(3/12)；有21.3%(32/150)的新生兒血清中抗體形成不完全，采用異型血交配，可呈現出“假配合”結果。結論：擅自改變離心力、孵育時間，會出現假陽性或假陰性配血結果。因血清中含有未完全消耗的纖維蛋白絲或紅細胞凝集，使患者血樣和供血者抗凝不完全或不抗凝，可出現假陽性配血結果或配血結果難以判斷。21.3%的新生兒血型抗體產生不完全，說明保證其輸血安全的前提是正確的血型鑒定，為新生兒輸血不能僅僅依賴配血結果。

關鍵詞 微柱凝膠技術 交叉配血 影響因素

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.06.250

本科室最早用鹽水配血法做交叉配血試驗，但是只能檢測出血清中的完全抗體；以后科室又用過酶法和抗人球法，最多是用聚凝胺配血法，直到2010年初取消聚凝胺配血法而采用抗人球蛋白微柱凝膠技術配血。由于微柱凝膠技術具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、標本用量少、結果可較長時間保存等優點^［1］，雖然后幾種方法也可檢測出血清中的不完全抗體但也有被微柱凝膠技術配血取代的趨勢?，F經過一年多的反復試驗，總結出了一定的經驗和教訓，總結報告如下。

資料與方法

試劑來源：西班牙戴安娜微柱凝膠8孔抗人球蛋白卡和血型卡、美強生ortho 6孔柱凝集卡。

樣本來源：濟寧市血液中心供血血樣60份，本院產科留取的新生兒臍血血樣150份，本科收集的12例不規則抗體陽性的標本和常規配血標本96份。

實驗方法：①實驗原理：把獻血員的紅細胞和患者的血清按一定比例加入微柱凝膠中與其混合，如果是陰性結果則不凝集的紅細胞會完全沉到微柱底部。如患者血清中有完全抗體，經37℃孵育后，相對應的紅細胞表面抗原會直接與完全抗體結合發生凝集，離心后這些凝塊或顆粒也無法通過微柱凝膠篩即為陽性結果，其陽性的強弱一般根據微柱中凝集顆粒散布的程度、凝集顆粒的多少，以及微柱上面的凝塊來判定。如果有不完全抗體經37℃孵育后，由于微柱凝膠中含有一定量的抗人球蛋白經其搭橋，不完全抗體致敏在獻血員的紅細胞上，便會形成大的凝集顆粒甚至成塊狀。②操作：按照試劑說明書嚴格操作，首先配制3%(v/v)紅細胞懸液。做血型檢查只需加10μl3%(v/v)紅細胞懸液直接離心。如果配血需要先加10μl紅細胞懸液，再加40μl血清，孵育15分鐘后離心，最后觀察結果。

結 果

供血血樣對結果的影響：取60份供血血袋上的配血“辮子”配制成3%(v/v)的紅細胞懸液配血，發現有些微柱中散落著細沙樣的紅色顆?？芍率菇Y果出現假陽性，程度在(+-～++)，這樣的占86.67%(52/60)。

患者血樣不抗凝對配血結果的影響：采用患者血清進行配血中，有些微柱離心后柱上部有放射狀的紅色顆粒或有一條很粗的紅線，從而使結果難以判斷，這樣的占90.63%(87/96)。

不同孵育時間對配血結果的影響：我們把不規則抗體陽性標本12例拿來孵育，5分鐘孵育時間時出現陽性的只有4例，15分鐘孵育時間則全為陽性，可見其漏檢率為66.67%(8/12)。

不同離心機對配血結果的影響：我們用12份不規則抗體陽性的標本和21份陰性配血結果的標本做試驗。用Ortho的卡而用戴安娜離心機，則不規則抗體陽性標本中有3份呈陰性(假陰性率為25%)，陰性標本全部呈陰性；用戴安娜配血卡而用Ortho離心機，12份不規則抗體陽性的標本則全部呈陽性，21份陰性標本中有5份出現假陽性，假陽性率為23.81%。

新生兒血型對配血結果的影響：我們用的新生兒臍血血樣150例，有21.3%(32/150)正反定型不相符。其中20例我們拿來進行相反血型交叉配血(即A型配B型，B型配A型)，結果18例為陰性，其余2例弱陽性。

討 論

微柱凝膠技術作為一種新型技術早晚會替代傳統試管法而越來越普及，但如果要避免假陽性和假陰性的出現，保證安全輸血，一定要正確使用此技術。如果患者血液處理不好會出現假陽性結果，如用血清樣標，特別是急診時因為趕時間，配血標本血漿纖維蛋白未完全析出就做試驗常會出現假陽性。同樣如果供血血細胞處理不好，血液未得到有效抗凝從而使血液中存在凝集顆粒，這種顆粒由于難以通過微柱也會出現假陽性，如血液中心在采血時由于操做不當“辮子”中的血沒有與抗凝劑接觸，后來我們先把血液的白細胞過濾后再配血，逐步解決了這一問題。

本實驗室用戴安娜和Ortho產品作過互換試驗，其中博唯優的離心機，采取兩種離心速度，第一分鐘采用1000r/分，后四分鐘改為1500r/分，離心時間設設計為5分鐘，戴安娜離心機離心速度是均一的，離心時間設計為10分鐘^［2］。所以不同的卡對離心力的要求不同，而不同廠家的微柱凝膠卡也不能混用，否則會影響配血結果，因此卡式配血必須使用其配套的離心機。另外在實驗中，我們有時為了節省時間而縮短孵育時間最后會出現假陰性結果，因此為了輸血安全不能單純求快即使急診實驗也不行。

新生兒血型鑒定是一個需要特別重視的問題，正定型由于其紅細胞上抗原性弱而容易漏檢抗原，反定型由于抗體產生的滯后也容易出現錯誤，所以做新生兒血型鑒定時一定要認真仔細加強自己的責任心。我們科室就曾遇到血型錯誤的情況，兒科醫生由于粗心將A型血患者寫成了B型，我們在復查血型時發現血型錯誤，但用B型血進行交叉配血時結果呈現陰性，為了證實一下我們又為該A型新生兒找了5個B型血再進行交叉配血試驗，結果5個全是陰性，為了進一步證實，我們用24例新生兒血清進行相反血型的交叉配血試驗(即A、B型新生兒的血清分別用B、A型的紅細胞交配)，結果正反相符的有20例，而其余4例結果呈陰性，經檢測此4例新生兒的正反定型不符。后來我們做了150例新生兒反定型試驗，結果有21%(32/150)的正反定型不符，與文獻報道相符^［3］。我們把其中20例標本進行相反血型交叉配血，結果18例出現陰性結果，其余2例為弱陽性。所以，正確的血型鑒定在新生兒的交叉配血試驗中顯得十分重要，如果血型錯了即使配血試驗通過也不能保證不出問題。

現在采用卡式配血雖然簡單方便，但也不能過于依賴卡式而忽視了其影響因素，尤其是在新生兒的交叉配血試驗中要特別注意。在配血試驗中一定要膽大心細，加強責任心，排除任何干擾因素。

參考文獻

1 舒象武.應用微柱凝膠抗球蛋白技術進行交叉配血［J］.中國現代醫學雜志，2003，13(13):116-118.

2 Dittmar-kristin，Procter JL，cipolone-Karen，et al.comparison of DATs using traditional tube aggluti-nation to gel coulumn affinity coulumn procedures［J］.Transfusion，2001，41:1258-1262.

3 李勇，楊貴貞.人類紅細胞血型學實用理論與實驗技術［M〗］.北京:中國科學技術出版社，1999:251-276.