高效液相色譜法測定腎茶膠囊中總黃酮的含量

[摘要] 目的 研究高效液相色譜法測定腎茶膠囊中總黃酮的含量。 方法 通過高效液相色譜法，對線性關系、重復行、精密度、回收率等考察進行考察，并進行多次驗證。 結果 蘆丁標準品在8.03～48.18μg/mL范圍內具有良好的線性關系（r²=0.9995）；該方法精密度良好，RSD<2%；重復性實驗結果良好，RSD=0.98；平均回收率在97.0%～103.0%之間，RSD<2%，準確性良好。 結論 高效液相色譜法測定腎茶膠囊中總黃酮的含量精確科學，能很好地檢測和控制腎總黃酮的質量。

[關鍵詞] 腎茶膠囊；總黃酮；含量測定

[中圖分類號] R917 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2012）21-93-03

Content determinantion of total flavonoids in orthosiphon capsules by HPLC

LU Geng1 LI Fang1 WANG Liqiang2 HOU Zhiyong1 SONG Weijie1

1.No.211 Hospital of PLA.HeiLongjiang Harbin 150080；2.Huaqiao University of Molecular Medicine Research Institute，Quanzhou 362021，China

[Abstract] Objective To research content determination of total flavonoids in orthosiphon capsules by HPLC. Methods A HPLC method is used for observing the linear relationship，repeat line，precision and recovery， and the method is verified. Results The standard rutin is in good linearity in range of 8.03-48.18 mg/mL（r2=0.9995）；This method has good precision（RSD<2%），and also has good repetitive experimental results （RSD=0.98）；The average recoveries are between 97.0% and 103.0%，RSD<2%，which has good accuracy. Conclusion Content determination of total flavonoids in orthosiphon capsules by HPLC is scientific and feasible，which can be in good control and test the flavonoids in orthosiphon capsules.

[Key words] Orthosiphon capsules；Flavonoid；Content determination

腎茶味苦、涼，為唇形科腎茶屬植物，主要分布于福建、臺灣、海南、廣西、廣東和云南各省。民間用于治療急、慢性腎炎、膀胱炎、尿路結石、膽結石、風濕性關節炎等[1-2]。本品為腎茶的干燥莖葉。主要含有黃酮類化合物、甾體皂甙類、蒽醌類甙類、氨基酸、多肽、蛋白質、有機酸、糖類、多糖類、多酚類化合物等。我院對其質量進行了系統研究，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 樣品和材料

腎茶膠囊：單位自制，批號：20040510，規格：0.3 g/粒。標準品：蘆丁（購自中國藥品生物制品檢定所，批號：10080-200705）。

1.2 實驗儀器

天平：北京賽多利斯儀器系統有限公司，型號BP211D；高效液相色譜儀：日本島津，型號2010；紫外-可見分光光度儀：日本島津，型號uv-2100。

1.3 測定方法

1.3.1 對照品溶液的制備 蘆丁對照品120℃減壓干燥至恒重后，精密稱定50 mg，置于25 mL量瓶中，加適量甲醇置水浴上微熱使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻備用。精密量取溶液10 mL，置于100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得（每毫升中含無水蘆丁0.2 mg）。

1.3.2 標準曲線的制備 精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置于25 mL量瓶中，各加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應的溶液為空白，照分光光度法，在500 nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標、濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1.3.3 測定法 取裝量差異項下的本品內容物適量，研細，從中稱取約0.25 g，精密稱定后，置25 mL錐形瓶中，精密稱定，加甲醇25 mL超聲處理（功率250 W，頻率20 kHz）30 min，放冷，精密稱定，補足重量，搖勻。精密量取10 mL，置100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取3 mL，置25 mL量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加水至6 mL”起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的濃度（μg/mL），計算，即得[3-4]。

本品每粒含總黃酮以蘆丁（C₂₇H₃₀O₁₆）計，不得少于45.0 mg。

1.3.4 吸收光譜的測定、光譜一致性檢測 精密吸取蘆丁對照品溶液、供試品溶液各3 mL，分別置于25 mL量瓶中，照分光光度法，在200～750 nm波長范圍內測定吸收光譜。結果蘆丁對照品與供試品光譜可見光區吸收圖譜基本一致，并且在500 nm波長處有最大吸收。

2 結果

2.1 線性關系的考察

精密吸取蘆丁對照品溶液1、2、3、4、5、6 mL（相當于蘆丁8.03、16.06、24.09、32.12、40.15、48.18μg/mL），按上述測定法測定吸收度。以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程。回歸方程為： y=0.0111x+0.0181，r²=0.999 5。表明蘆丁在8.03～48.18μg/mL范圍內具有良好的線性關系。見表1。

2.2 精密度試驗

按“3.3”項下測定法對對照品溶液重復測定6次，計算RSD，結果見表2。試驗結果表明，RSD<2%，方法精密度良好，符合測定要求。

2.3 重復性試驗

按供試品測定方法測定，對同一批樣品（090816）重復測定5次。見表3。

2.4 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的同一批號（批號為090816，含量為250.51 mg/g）的樣品125 mg，分別精密加入蘆丁對照品各27.5 mg，按正文供試品溶液的制備方法制備及上述光譜條件測定，測定并計算回收率，平均回收率在97.0%～103.0%之間，RSD<2%（n=6），方法準確性良好。見表4。

2.5 含量測定

按上述方法測定各批樣品的含量。根據3樣品測定結果，暫定本品含總黃酮不得少于45.0 mg/粒。見表5。

3 結論

腎茶為唇形科腎茶屬植物，又稱貓須草，其主要活性成分有迷迭香酸、熊果酸和肌醇等。傣族醫書記載腎茶用以治療小便熱、澀、疼痛、腰痛等泌尿系統疾病，療效確切。為使腎茶這一民族傳統藥物更好地用于臨床，本課題開發了腎茶有效部位制劑“腎茶膠囊”，并對其藥效學、藥理學和毒理學進行了系統研究。

通過針對腎茶膠囊中總黃酮的系統研究，包括線性關系考察、精密度考察、回收率考察、重復性考察等，證實本測定方法科學可行，完全能控制和檢測腎茶膠囊中總黃酮的質量。

[參考文獻]

[1] Hsu CL，Hong BH，Yu YS.Antioxidant and anti-inflammatory effects of orthosiphon aristatus and its bioactive compounds[J].J Agric Food Chem，2010，58（4）：2150-2156.

[2] 喻陸，吳凡.欣腎膠囊延緩大鼠慢性腎功能衰竭實驗研究[J].中國中藥雜志，2006，31（24）：2058-2060.

[3] Awale S，Tezuka Y，Banskota AH，et al.Inhibition of NO production by highly-oxygenated diterpenes of orthosiphon stamineus and their structure-activity relationship[J].Biol Pharm Bull，2003，26（4）：468-473.

[4] Awale S，Tezuka Y，Banskota AH，et al.Highly-oxygenated isopimarane-type diterpenes from orthosiphon stamineus of Indonesia and their nitric oxide inhibitory activity[J].Chem Pharm Bull（Tokyo），2003，51（3）： 268-275.

（收稿日期：2012-06-21）