白桃湯劑的抗腫瘤作用機制初探

曹志友，歐陽瑾，金 宏，溫 娜，王新成，王 爽＊

（1.吉林醫藥學院直屬醫院，吉林 吉林132013；2.吉林醫藥學院 實驗中心）

本研究以Lewis肺癌細胞為對象，對白桃湯劑的抗腫瘤作用進行初步研究，為該藥應用于臨床提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

小鼠Lewis肺癌細胞（購于中科院上海細胞庫）。白桃湯劑（吉林醫藥學院制備，含核桃皮15g，白附子15g，甘草10g，黃芪20g等），按常規方法制成1g／ml備用。環磷酰胺（上海生化制劑廠）。小牛血清、DMEM 培養基、胰酶（GIBCO公司），CO2恒溫孵箱（Thermo Electron公司），倒置顯微鏡（Olympus公司）。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養 復蘇小鼠Lewis肺癌細胞，用含10%血清的DMEM培養液，置于培養箱中，37℃，5%CO2，飽和濕度下培養，隔日換液，1∶3傳代。

1.2.2 酶聯免疫吸附（ELISA）法測定培養上清液中Bcl－2、P53蛋白含量將Lewis細胞制成單細胞懸液，以1×105個／孔細胞接種于6孔板中，培養24 h，將細胞分為3組，分別加入白桃湯劑40mg／ml、環磷酰胺（CTX）10μg／ml，對照組用基礎培養基。作用24h、48h留上清，將包被液4∶1稀釋后加入96孔酶標板中（空白對照組為100%包被液）4℃過夜；37℃封閉2h。兔抗鼠多克隆Bcl－2、P53抗體（武漢博士德生物工程有限公司）一抗37℃孵育2 h，HRP標記的二抗37℃孵育2h，顯色液室溫避光10min；有顏色變化時終止反應，酶聯免疫檢測儀492nm處測定吸光度值（?）。用空白對照組調零。

1.3 統計學分析 實驗數據以均數加減標準差x—±s表示。組間比較用t檢驗。

2 結果

2.1 白桃湯劑對小鼠Lewis肺癌細胞的抗腫瘤作用

小鼠Lewis肺癌細胞經白桃湯劑作用后，檢測其培養上清中Bcl－2和P53表達，發現上清中Bcl－2蛋白含量在兩個時間點均有明顯降低，有統計學意義（P＜0.05），并隨時間延長作用更加明顯。與環磷酰胺組對比，白桃湯劑作用后抑制Bcl－2蛋白表達更顯著。而P53蛋白在作用48h后下降有統計學意義（P＜0.05），見表1、2。

表1 白桃湯劑作用于小鼠Lewis肺癌細胞上清中Bcl－2表達水平檢測（x—±s）

表2 白桃湯劑作用于小鼠Lewis肺癌細胞上清中P53表達水平檢測（x—±s）

3 討論

隨著中藥的發展，中藥治療腫瘤也開始投入更多的財力和物力。民間秘方白桃湯劑對Lewis肺癌模型小鼠腫瘤生成具有明顯的抑瘤作用，藥物作用于動物后可引起血清TNF－α水平升高、IL－6水平降低，進而提高機體的免疫功能［1］。白桃湯劑也可以通過降低移植瘤VEGF的表達率，抑制小鼠肺癌血管生成從而抑制腫瘤生長和轉移來發揮其抗腫瘤作用［2］。本實驗在以往研究的基礎上，對白桃湯劑的抗腫瘤作用機制作進一步研究，以明確其抗腫瘤機制。

我們對小鼠Lewis肺癌細胞進行培養，用ELISA方法對白桃湯劑作用細胞后上清進行檢測，結果發現：小鼠Lewis肺癌細胞經白桃湯劑作用后，其培養上清中Bcl－2蛋白含量在兩個時間點均有明顯降低，并隨時間延長作用更加明顯。而P53蛋白在作用48h后也下降，與環磷酰胺組對比，白桃湯劑作用后抑制Bcl－2、P53蛋白表達更顯著。誘導腫瘤細胞發生凋亡在腫瘤多種治療方法中占有重要的地位，Bcl－2、P53等均參與了細胞凋亡的調控［3］，在肺癌的發生、發展過程中起到了重要的作用［4］。而其它抗癌物質如海藻硫酸多糖對肺癌增殖的抑制作用可能是通過Bcl－2、P53等均參與了細胞凋亡的調控而發揮作用［5］。因此，通過實驗我們初步驗證了白桃湯劑可能是通過Bcl－2、P53等調控腫瘤的生長，但其具體作用機制還需進一步研究。

［1］曹志友，王 爽，歐陽瑾，等.白桃湯劑治療Lewis肺癌小鼠的實驗研究［J］.時珍國醫國藥，2009，20（4）：914.

［2］歐陽瑾，曹志友，王 爽，等.白桃湯劑抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生長及其血管生成的實驗研究［J］.時珍國醫國藥，2009，20（10）：2476.

［3］Rom WN，Hay JY，Lee TC，et al.Molecular and genetic aspects of lung cancer［J］.AmJ Respir Crit Care Med，2000，161：1355.

［4］張晨策，魏煜程，沈 毅.非小細胞肺癌組織P53、P16和Bcl－2蛋白表達及意義［J］.齊魯醫學雜志，2011，26（4）：302.

［5］翟振國，蔣捍東，秦筱梅，等.海藻硫酸多糖對肺癌增殖的抑制作用及其機制［J］.中華結核和呼吸雜志，2004，27（2）：97.