Ang-2在嬰幼兒皮膚血管瘤組織中的表達及意義①

袁爽 宋俐 葛清蓮

(鄭州市兒童醫(yī)院皮膚科 鄭州 450053)

皮膚血管瘤是嬰幼兒最常見的一種良性腫瘤,是以毛細血管內(nèi)皮細胞增生為主要特征。血管瘤好發(fā)于頭面部,發(fā)生率在嬰幼兒時期較高,表現(xiàn)為出生時或出生后不久呈鮮紅色斑,并迅速增大,經(jīng)6個月～1年的增生期后進入退化期,7～8歲時大部分退化,退化后可遺留色素沉著、毛細血管擴張、纖維和脂肪沉積。血管瘤較引人注目的是其發(fā)生、發(fā)展和自行退化的機制。血管生成是多種因子調(diào)控與影響的過程,Ang-2是其中一種重要的促血管生成因子。現(xiàn)已證實Ang-2在生理性和病理性血管生成過程中發(fā)揮著重要作用。而且參與血管瘤的發(fā)生和增殖,為了研究Ang-2在血管瘤中的作用,我們利用免疫組織化學(xué)方法測定Ang-2在血管瘤中的表達情況,進而探討其在血管瘤增殖中的作用及意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取河南省人民醫(yī)院血管瘤科2005至2010年共60例手術(shù)切除標(biāo)本,其中男30例,女30例,患兒年齡為1個月～13歲,平均5.5歲。按照Mulliken標(biāo)準(zhǔn)[1],將血管瘤標(biāo)本分為增殖期、消退早期和消退晚期。血管瘤標(biāo)本共50例,其中增殖期30例,消退早期10例,消退晚期10例;均取自皮膚。另取10例含有正常血管的皮膚標(biāo)本作為對照。全部標(biāo)本為10%甲醛固定,石蠟包埋。

1.2 主要試劑

鼠抗人單克隆抗Ang-2抗體、S-P超敏免疫組織化學(xué)試劑盒、DAB酶底物顯色試劑盒、EDTA均購于武漢博士德生物技術(shù)公司。

1.3 實驗方法

免疫組織化學(xué)方法檢測采用鏈霉菌素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法(即S-P法)。4μm厚度連續(xù)切片,常規(guī)脫蠟入水,一抗為鼠抗人單克隆抗Ang-2抗體(克隆號JH121),所有操作按照SP試劑盒說明進行。抗原修復(fù)采用EDTA抗原修復(fù)液熱浴修復(fù)。DAB染色,蘇木素復(fù)染。同時用已知陽性片作陽性對照,用PBS代替一抗作陰性對照。

表1 Ang-2在血管瘤不同時期中的表達

1.4 結(jié)果判定

每張切片隨機選取5個視野,每個視野計數(shù)100個細胞,計算陽性細胞的百分比。以血管內(nèi)皮細胞胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達。按著色細胞百分?jǐn)?shù)記分,＜20%為0分;20%～50%為1分;＞50%為2分。按著色強度記分,無著色為0分;淺棕色為1分;深棕色為2分。將著色細胞百分?jǐn)?shù)記分與著色強度記分相乘,總記分0分為陰性(-);1～2分為弱陽性(+);4分為強陽性(++)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 11.5 統(tǒng)計分析軟件進行分析,對Ang-2在血管瘤不同分期中及不同年齡組中的表達采用卡方檢驗和確切概率法。P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

Ang-2定位于血管內(nèi)皮細胞胞漿,呈棕黃色顆粒。在30例增殖期血管瘤標(biāo)本中有27例Ang-2表達呈陽性,陽性表達率為90%;在10例消退早期血管瘤標(biāo)本中有6例Ang-2表達呈陽性,陽性表達率為60%;在10例消退晚期血管瘤標(biāo)本中有2例Ang-2表達呈陽性,陽性率為20%。在10例正常血管標(biāo)本中均未見陽性表達。對Ang-2的表達進行χ2檢驗,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在血管瘤的不同分期中其表達率存在顯著性差異(表1,P<0.05)。

3 討論

Fam等[2]認為血管形成包括細胞外基質(zhì)的蛋白分解,內(nèi)皮細胞移行和增生,細胞外基質(zhì)的產(chǎn)生,血管狀結(jié)構(gòu)的形成和管道再通。血管瘤是血管生成異常性疾病,血管生成不受控制是其增殖的主要原因[3]。Ang-2可以對血管生成的各步驟產(chǎn)生影響,從而調(diào)節(jié)血管的生成。Ang-2是存在于內(nèi)皮細胞的特異性生長因子,對內(nèi)皮細胞有極強的促有絲分裂作用,而對其它細胞無此作用[4]。在腫瘤、缺血缺氧等情況下,Ang-2及其受體呈現(xiàn)高表達,而Ang-2不足時會導(dǎo)致血管腔閉合、血管退化[3]。在對HE染色的血管瘤標(biāo)本進行分類時觀察到:在增生期的血管瘤標(biāo)本中可見血管叢的內(nèi)皮細胞增生活躍,細胞肥大,界限不清,常聚集成團,管腔不規(guī)則,甚至閉塞。間質(zhì)內(nèi)纖維組織很少并有較多的肥大細胞。而從消退早期到消退晚期,則血管內(nèi)皮細胞逐漸變扁平,內(nèi)皮細胞數(shù)目逐漸減少,管腔明顯可見。同時血管間距逐漸增大,血管間結(jié)締組織逐漸增多,并且出現(xiàn)較多脂肪細胞。在血管瘤的標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)血管密集,管腔擴張明顯,且其內(nèi)皮細胞與正常的血管內(nèi)皮細胞無差別,無異常增生現(xiàn)象。免疫組化結(jié)果顯示:Ang-2在血管瘤增殖期、消退早期、消退晚期的表達陽性率是依次遞減的,而在正常血管標(biāo)本中均未見陽性表達。目前認為血管內(nèi)皮細胞的增殖受多種因素的調(diào)節(jié),而Ang-2正是其中之一。Ang-2的作用機制包括:(1)刺激血管新生的作用是通過誘導(dǎo)VEGF的表達而實現(xiàn)的[3～4]。(2)可以提高血管通透性。(3)可以改變胞外基質(zhì),使其更有利于血管的生長。我們的實驗結(jié)果也證明了Ang-2在促血管瘤發(fā)生中的重要作用。

[1]Mulliken JB,Glowack i J.Hemangiom as and vascular malform ations in infants and children:A classif icat ion based on endothelia lcharacterist ics[J].Plast Reconst Surg,1982,69:412.

[2]袁新初,周乾毅.轉(zhuǎn)化生長因子1在毛細血管瘤組織中的表達[J].武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2002,23(3):213～214.

[3]Fam NP,Verm a S.C l in ical gu ide to angiogenesis[J].Circular-tion,2003,108(21):2613～2618.

[4]易成剛,郭樹忠.血管新生的機制及在整形外科領(lǐng)域中的研究進展[J].實用美容整形外科雜志,2004,15:315～317.