Ang-2在嬰幼兒皮膚血管瘤組織中的表達及意義①

袁爽 宋俐 葛清蓮

(鄭州市兒童醫院皮膚科 鄭州 450053)

皮膚血管瘤是嬰幼兒最常見的一種良性腫瘤,是以毛細血管內皮細胞增生為主要特征。血管瘤好發于頭面部,發生率在嬰幼兒時期較高,表現為出生時或出生后不久呈鮮紅色斑,并迅速增大,經6個月～1年的增生期后進入退化期,7～8歲時大部分退化,退化后可遺留色素沉著、毛細血管擴張、纖維和脂肪沉積。血管瘤較引人注目的是其發生、發展和自行退化的機制。血管生成是多種因子調控與影響的過程,Ang-2是其中一種重要的促血管生成因子。現已證實Ang-2在生理性和病理性血管生成過程中發揮著重要作用。而且參與血管瘤的發生和增殖,為了研究Ang-2在血管瘤中的作用,我們利用免疫組織化學方法測定Ang-2在血管瘤中的表達情況,進而探討其在血管瘤增殖中的作用及意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取河南省人民醫院血管瘤科2005至2010年共60例手術切除標本,其中男30例,女30例,患兒年齡為1個月～13歲,平均5.5歲。按照Mulliken標準[1],將血管瘤標本分為增殖期、消退早期和消退晚期。血管瘤標本共50例,其中增殖期30例,消退早期10例,消退晚期10例;均取自皮膚。另取10例含有正常血管的皮膚標本作為對照。全部標本為10%甲醛固定,石蠟包埋。

1.2 主要試劑

鼠抗人單克隆抗Ang-2抗體、S-P超敏免疫組織化學試劑盒、DAB酶底物顯色試劑盒、EDTA均購于武漢博士德生物技術公司。

1.3 實驗方法

免疫組織化學方法檢測采用鏈霉菌素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法(即S-P法)。4μm厚度連續切片,常規脫蠟入水,一抗為鼠抗人單克隆抗Ang-2抗體(克隆號JH121),所有操作按照SP試劑盒說明進行。抗原修復采用EDTA抗原修復液熱浴修復。DAB染色,蘇木素復染。同時用已知陽性片作陽性對照,用PBS代替一抗作陰性對照。

表1 Ang-2在血管瘤不同時期中的表達

1.4 結果判定

每張切片隨機選取5個視野,每個視野計數100個細胞,計算陽性細胞的百分比。以血管內皮細胞胞漿出現棕黃色顆粒為陽性表達。按著色細胞百分數記分,＜20%為0分;20%～50%為1分;＞50%為2分。按著色強度記分,無著色為0分;淺棕色為1分;深棕色為2分。將著色細胞百分數記分與著色強度記分相乘,總記分0分為陰性(-);1～2分為弱陽性(+);4分為強陽性(++)。

1.5 統計學分析

采用SPSS 11.5 統計分析軟件進行分析,對Ang-2在血管瘤不同分期中及不同年齡組中的表達采用卡方檢驗和確切概率法。P<0.05有統計學意義。

2 結果

Ang-2定位于血管內皮細胞胞漿,呈棕黃色顆粒。在30例增殖期血管瘤標本中有27例Ang-2表達呈陽性,陽性表達率為90%;在10例消退早期血管瘤標本中有6例Ang-2表達呈陽性,陽性表達率為60%;在10例消退晚期血管瘤標本中有2例Ang-2表達呈陽性,陽性率為20%。在10例正常血管標本中均未見陽性表達。對Ang-2的表達進行χ2檢驗,結果發現在血管瘤的不同分期中其表達率存在顯著性差異(表1,P<0.05)。

3 討論

Fam等[2]認為血管形成包括細胞外基質的蛋白分解,內皮細胞移行和增生,細胞外基質的產生,血管狀結構的形成和管道再通。血管瘤是血管生成異常性疾病,血管生成不受控制是其增殖的主要原因[3]。Ang-2可以對血管生成的各步驟產生影響,從而調節血管的生成。Ang-2是存在于內皮細胞的特異性生長因子,對內皮細胞有極強的促有絲分裂作用,而對其它細胞無此作用[4]。在腫瘤、缺血缺氧等情況下,Ang-2及其受體呈現高表達,而Ang-2不足時會導致血管腔閉合、血管退化[3]。在對HE染色的血管瘤標本進行分類時觀察到:在增生期的血管瘤標本中可見血管叢的內皮細胞增生活躍,細胞肥大,界限不清,常聚集成團,管腔不規則,甚至閉塞。間質內纖維組織很少并有較多的肥大細胞。而從消退早期到消退晚期,則血管內皮細胞逐漸變扁平,內皮細胞數目逐漸減少,管腔明顯可見。同時血管間距逐漸增大,血管間結締組織逐漸增多,并且出現較多脂肪細胞。在血管瘤的標本中發現血管密集,管腔擴張明顯,且其內皮細胞與正常的血管內皮細胞無差別,無異常增生現象。免疫組化結果顯示:Ang-2在血管瘤增殖期、消退早期、消退晚期的表達陽性率是依次遞減的,而在正常血管標本中均未見陽性表達。目前認為血管內皮細胞的增殖受多種因素的調節,而Ang-2正是其中之一。Ang-2的作用機制包括:(1)刺激血管新生的作用是通過誘導VEGF的表達而實現的[3～4]。(2)可以提高血管通透性。(3)可以改變胞外基質,使其更有利于血管的生長。我們的實驗結果也證明了Ang-2在促血管瘤發生中的重要作用。

[1]Mulliken JB,Glowack i J.Hemangiom as and vascular malform ations in infants and children:A classif icat ion based on endothelia lcharacterist ics[J].Plast Reconst Surg,1982,69:412.

[2]袁新初,周乾毅.轉化生長因子1在毛細血管瘤組織中的表達[J].武漢大學學報(醫學版),2002,23(3):213～214.

[3]Fam NP,Verm a S.C l in ical gu ide to angiogenesis[J].Circular-tion,2003,108(21):2613～2618.

[4]易成剛,郭樹忠.血管新生的機制及在整形外科領域中的研究進展[J].實用美容整形外科雜志,2004,15:315～317.