普羅帕酮在家兔體內的死后分布1）

朱培培，楊澤國，王 莉，嚴 鵬，贠克明

普羅帕酮（propafenone，PPF），又名心律平、丙苯酮、丙胺苯丙酮、羥丙苯丙酮，主要用于致命性室性心律失常的治療，也用于治療室上性心律失常以及在急性心肌梗死時出現的心律失常。由于在臨床患者中應用較多，醫生對病人的監管有一定的局限性，故誤服中毒成為常見原因之一，偶有中毒或死亡的病例報告[1－4]。有關普羅帕酮法醫毒物動力學研究報道較少，僅見個別中毒（死）案件的檢驗報道[5－7]。本實驗建立了普羅帕酮口服中毒致死家兔的動物模型，研究普羅帕酮在家兔體內的死后分布規律，為口服普羅帕酮自殺和中毒案件的法醫學鑒定提供理論和實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康家兔9只，體重（2.0±0.3）kg，雄性，由山西醫科大學動物實驗中心提供，實驗前隔夜禁食。

1.2 試劑和藥品 PPF和地西泮標準品購于公安部物證鑒定中心。標準液：普羅帕酮標準品溶液，4℃冰箱保存。內標液：地西泮標準品甲醇溶液，4℃冰箱保存。普羅帕酮片劑每片50 mg，石藥集團中諾藥業（石家莊）有限公司生產，批號：H13021670。

1.3 染毒和樣品采集 健康家兔9只，分實驗組和對照組。實驗組家兔6只，經胃管注入8LD50劑量的普羅帕酮0.44 g/kg，觀察其表現，待家兔血壓、呼吸和心電全部消失后，迅速解剖動物，取心血、膽汁、尿液、玻璃體液各1 mL，心、肝、脾、肺、腎、腦、肌肉等組織各1 g，按下述方法提取，高效液相色譜內標法定量檢測其中普羅帕酮。

1.4 主要儀器及檢測條件 日本島津LC－20AT高效液相色譜儀，C18柱（日本島津5μm；150 mm×4.6 mm）；柱溫25℃；流動相：甲醇－水－冰醋酸－三乙胺（62.3∶37.7∶0.034∶0.068）；檢測波長310 nm；流速1 mL/min；進樣量20μL。

1.5 檢材提取 取固體檢材1 g或液體檢材1mL，固體檢材超聲細胞粉碎勻漿3 min，加入內標液20μL，振蕩，加入p H＝10的緩沖液0.5mL，振蕩搖勻，加入5mL乙醚，振蕩15 min，3 000 r/min離心10 min，將上清液移入另一干凈且干燥試管中，重復萃取一次。40℃恒溫水浴揮干，500μL甲醇定容，取20μL進樣。利用保留時間定性，內標法和工作曲線法（液相色譜）定量[8，9]。

1.6 精密度實驗 取濃度為10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的三種普羅帕酮標準溶液在上述液相色譜條件下每樣品每日測定5次，連續測定2 d，由峰面積計算日內，日間變異系數（CV＝S/X×100%）。

1.7 工作曲線和回收率實驗 取空白檢材（血、肝臟），分別加入普羅帕酮標準溶液及地西泮溶液，配制成含有普羅帕酮0.05 μg/g、0.1μg/g、0.2μg/g、0.5μg/g、1μg/g、2μg/g、4μg/g、8 μg/g、10μg/g、20μg/g和地西泮20μg/g的系列樣品，按照上述方法提取并檢測。以普羅帕酮濃度（μg/g或μg/mL）為橫坐標（x），普羅帕酮與內標地西泮的峰面積之比為縱坐標（y）進行線性回歸，所得血線性回歸方程Y＝1.1012X－0.283，R2＝0.994，肝臟線性回歸方程Y＝1.025 6X＋0.035 3，R2＝0.997；取肝組織1 g或心血1mL，各9份，分別加入標準品4μg（3份）、6μg（3份）、8μg（3份），按上述方法提取檢測，標準曲線計算回收率。

2 結 果

2.1 中毒癥狀 實驗組家兔染毒后，均出現精神萎靡、尿失禁、驚厥、昏迷、死亡。對照組無死亡。

2.2 液相色譜圖 高效液相色譜檢測，普羅帕酮和內標物地西泮可完全分離，峰形對稱，溶劑和臟器提取內源性雜質對普羅帕酮和地西泮無干擾。空白對照組未見異常峰。詳見圖1。

圖1 染毒家兔血中普羅帕酮高效液相色譜圖

2.3 死后分布 染毒死亡家兔膽汁、肺和肝中普羅帕酮濃度最高，玻璃體、肌肉中含量最低，與其他組織臟器樣本檢測值比較有統計學意義（P＜0.05）。其含量順序為膽汁、肺、肝＞腎、脾、尿＞心血、心、腦＞玻璃體液、肌肉。詳見表1。

表1 普羅帕酮在中毒死亡家兔體內含量（±s） μg/g

表1 普羅帕酮在中毒死亡家兔體內含量（±s） μg/g

最大值 最小值心樣品（±s 7.47±10.63 28.07 0.06肝 47.11±53.97 132.63 0.12脾 20.09±15.02 43.44 2.82肺 78.59±37.82 130.29 33.19腎 20.57±12.78 37.99 6.19腦 5.62±5.99 17.33 1.29肌 1.96±1.61 3.88 0.00心血 12.99±15.87 43.09 0.31尿 20.05±18.85 45.71 0.06膽汁 109.59±66.25 212.39 35.62玻璃體液2.10±3.51 8.75 0.00

3 討 論

3.1 HPLC檢測 普羅帕酮的檢測方法主要有薄層掃描和高效液相色譜法[10]。薄層掃描法簡便、快速、定性好，但定量重復性稍差。已報告的高效液相色譜檢測方法主要是藥物和血清中普羅帕酮的檢測，生物組織檢材中普羅帕酮的高效液相色譜檢測方法報告較少[11]，而高效液相色譜質譜聯用法未見報告。本文采用本實驗室先期建立的生物檢材中普羅帕酮的提取方法，建立了生物檢材中普羅帕酮的高效液相色譜檢測方法，未見內源性雜質干擾，具有操作簡便快速﹑定性定量準確的特點，組織檢材中普羅帕酮提取物檢測線性范圍、最小檢出濃度均達到生物檢材中藥物檢測要求[12]，可應用于普羅帕酮中毒的法醫學鑒定。

3.2 死后分布 劉佳佳等[13]報道4LD50染毒致死大鼠體內鹽酸普羅帕酮含量順序為肌肉、肺、脾、肝、外周血、心血、心、腎、大腦。本實驗結果顯示，4LD50染毒死家兔各臟器組織樣本中普羅帕酮含量由高到低分別為：膽汁、肺、肝＞脾、腎、尿＞心血、心、腦＞玻璃體、肌肉。其中膽汁、肺和肝中濃度最高，玻璃體、肌肉樣本中含量最低。說明鹽酸普羅帕酮的死后分布可能存在劑量和種屬差異。因此，在普羅帕酮中毒（死）案件法醫學鑒定時，除血外，還應采取胃（胃內容）、膽汁、肺、肝等藥物分布量高的臟器，進行全面定性和定量分析，并應考慮中毒量、中毒死亡時間和種屬差異的影響。其死后分布含量關系還可用于極端條件下尸體血中普羅帕酮含量的推斷。

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