復方肌苷口服液中肌苷含量的兩種測定方法比較

陳葉琴，唐風雷，于忠興

(江蘇省常州市第三醫院藥劑科，江蘇 常州 213001)

肌苷為輔酶類藥物，能參與體內能量代謝及蛋白質的合成，具有提高各種酶(特別是輔酶A)的活性及改善機體代謝作用，用于各種肝臟疾病、心臟病、白細胞減少癥、血小板減少癥、中心視網膜炎、視神經萎縮等。復方肌苷口服液為我院自制制劑，肌苷含量測定的方法采用的是《江蘇省藥品標準》[1]中的紫外分光光度法(UV法)，而中國藥典[2]中肌苷制劑含量測定采用的是高效液相色譜(HPLC)法，現采用兩種方法測定肌苷含量并進行比較，報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－10AT型高效液相色譜儀，SPD－10A型檢測器，島津N2000型色譜數據工作站;TU－1810型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)。肌苷對照品(河南新鄉華星藥廠，批號為1001061);復方肌苷口服液(本院自制，批號分別為100714，100812，100916，規格為 20 mL/支，肌苷含量 0.4 g);甲醇為色譜純，水為二次純化水。

2 方法與結果

2.1 UV 法

2.1.1 溶液制備

精密稱取肌苷30.50 mg，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得肌苷質量濃度為305μg/mL)的對照品溶液。精密吸取復方肌苷口服液5.0 mL(約相當于100 mg)，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，再精密吸取稀釋液1 mL，置100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液。按處方比例配成不含肌苷的溶液，按供試品溶液的制備方法制得陰性對照品溶液。

2.1.2 波長確定

吸取對照品貯備溶液1.0 mL，置25 mL容量瓶中，加水至刻度，于200～400 nm波長范圍內掃描。結果溶液在248 nm波長處有最大吸收峰，而陰性對照品溶液無干擾，故選定248 nm為檢測波長。

2.1.3 方法學考察

標準曲線繪制:精密吸取對照品貯備溶液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0 mL，分別置 50 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，以水為空白，在248 nm波長處測定吸光度，以吸光度(A)對質量濃度(C)進行回歸，得回歸方程 A=0.04597C－0.00587，r=0.9999，肌苷的質量濃度線性范圍為 3.05 ～24.4μg/mL。

精密度試驗:取同一對照品溶液(12.2μg/mL)，依法重復測定6次。結果的 RSD=0.61%，表明方法精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，室溫放置，分別于 0，1，3，5，10，24 h時在248 nm波長處測定吸光度。結果的 RSD=1.12%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

回收率試驗:精密吸取已知含量的樣品2.5 mL(批號為100916，含肌苷 49.40 mg)，分別加入肌苷對照品約 30，50，70 mg，置 100 mL容量瓶中，照2.1.1項下方法制備溶液，在248 nm波長處測定吸光度，計算回收率。結果見表1。

表1 回收率試驗結果(n=6)

2.1.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制成供試品溶液并測定含量。結果見表2。

2.2 HPLC 法

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Kromasil C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動相:甲醇－ 水(10 ∶90);檢測波長:248 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;進量樣:20 μL。在該色譜條件下，肌苷的保留時間約為6 min。色譜圖見圖1。

2.2.2 溶液制備

精密稱取肌苷51.20 mg，置100 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得肌苷質量濃度為512μg/mL的對照品溶液。精密吸取復方肌苷口服液5.0 mL(約相當于100 mg)，置100 mL容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，再精密吸取稀釋液2 mL，置100 mL容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，用0.45 μm的濾膜濾過，得供試品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.2.3 方法學考察

標準曲線繪制:精密吸取對照品貯備液 2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 mL，分別置 100 mL 容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別進樣20 μL以各質量濃度(X)為橫坐標、峰面積(Y)為縱坐標進行回歸，得回歸方程 Y=55452 X－6705.4(r=0.9999)。結果表明，肌苷質量濃度在10.24～35.84μg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:取同一對照品溶液(20.48μg/mL)，按擬訂的色譜條件進樣6次，結果的 RSD=0.70%，表明該法精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0，1，3，5，10，24 h時分別進樣測定峰面積。結果的 RSD=1.23%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

回收率試驗:精密吸取已知含量的樣品 2.5 mL(批號為100916，含量 49.40 mg)，分別加入對照品約 30，50，70 mg，置 100 mL容量瓶中，照2.2.2項下方法制備溶液，依法測定。結果見表1。

2.2.4 樣品含量測定

取對照品溶液4 mL(含肌苷2048μg)，置100 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，取此對照品溶液和3批樣品按2.2.2項下方法制成供試品溶液各20 μL，分別注入色譜儀，按外標法以峰面積計算含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果比較(標示量%，，n=3)

表2 樣品含量測定結果比較(標示量%，，n=3)

3 討論

復方肌苷口服液除含有肌苷外，還有硒酸脂多糖，但在248 nm波長處不干擾，故樣品可不經處理直接測定。本試驗分別采用UV法和HPLC法對3批樣品中肌苷含量進行測定，結果比較無顯著性差異(P＞0.05)，而UV法更具有操作簡單，方法便捷、快速，費用低廉，更適合生產時中間體含量及醫院制劑測定的優點。

[1]江蘇省衛生局.江蘇省藥品標準[M].南京:江蘇科學技術出版社，1985:38.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業出版社，2005:205.