伸筋草中重金屬和農(nóng)藥殘留量分析＊

鄒桂欣，尤獻(xiàn)民，王光函

(遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧 沈陽(yáng) 110034)

農(nóng)藥和重金屬殘留是中藥現(xiàn)代化、國(guó)際化的重要限制因素之一，農(nóng)藥對(duì)人體的危害主要表現(xiàn)為神經(jīng)毒性，而有機(jī)氯農(nóng)藥易產(chǎn)生慢性毒性，因此中藥材中農(nóng)藥和重金屬殘留問題已越來越受到關(guān)注。伸筋草是石松科植物石松的干燥全草，具有祛風(fēng)除濕、舒筋活絡(luò)之功效。我國(guó)伸筋草資源十分豐富，多在海拔2000 m以下。筆者曾對(duì)不同產(chǎn)地及不同海拔高度的伸筋草藥材中玉柏堿進(jìn)行含量研究[1]，但關(guān)于伸筋草藥材安全性方面的研究尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)采用原子熒光光譜法、等離子發(fā)射光譜法及氣相色譜法對(duì)不同產(chǎn)地及不同海拔高度的伸筋草藥材進(jìn)行了重金屬砷、汞、鉛殘留及有機(jī)氯農(nóng)藥殘留分析，并且由于伸筋草作為鋁礦標(biāo)示植物，因此采用等離子發(fā)射光譜法對(duì)鋁離子也進(jìn)行了含量分析，為該藥材的質(zhì)量控制及進(jìn)一步安全地開發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

AFS－2202型原子熒光(北京海光);SP8000型等離子發(fā)射光譜儀(日本精工);PRO－GC型氣相色譜儀(色譜柱為HP50+30 mm ×0.25 mm，0.25 μm);ECD 電子捕獲檢測(cè)器。砷、鉛、鋁和汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液和六六六、滴滴涕(DDT)標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心;硝酸、硫酸(優(yōu)級(jí)純，沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠);所用其他試劑皆為分析純(沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠);水(二次蒸餾水)。

伸筋草分別采集于廣西桂林龍勝各族自治縣花坪國(guó)家自然保護(hù)區(qū)(廣西海拔600 m)、廣西大明山自然保護(hù)區(qū)(廣西海拔1200 m)、廣西桂林貓耳山(廣西海拔1400 m)，浙江省磐安縣城南山(磐安海拔400 m)、浙江天臺(tái)縣赤崗風(fēng)景區(qū)(天臺(tái)海拔300 m)。

2 方法與結(jié)果

2.1 重金屬殘留量測(cè)定

2.1.1 供試液制備

砷(As)及汞(Hg):稱取樣品0.5 g，精密稱定，置玻璃燒杯中，加入10 mL硝酸放置過夜，置電熱板上，加熱消解至消化液呈淡黃色或無色(如消解過程中色澤較深，稍冷補(bǔ)加少量硝酸)，至消解液1.0～2.0 mL時(shí)停止，冷卻后加2 mL鹽酸加熱，然后移入25 mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，同時(shí)隨行空白。

鉛(Pb)及鋁(Al):取樣品 0.5 g，置于 50 mL瓷坩堝中，于馬福爐中500℃以下灰化，取出，加1 mL去離子水溶解殘?jiān)⑥D(zhuǎn)入25 mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，同時(shí)隨行空白。

2.1.2 工作曲線制備

Pb、As、Hg、Al標(biāo)準(zhǔn)液均由國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心提供，質(zhì)量濃度為1 g/L，稀釋至表1中的質(zhì)量濃度。

表1 As，Hg，Pb 及 Al的工作曲線濃度

2.1.3 測(cè)定結(jié)果 結(jié)果見表2。

表2 As，Hg，Pb，Al含量測(cè)定結(jié)果

2.2 農(nóng)藥殘留量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

程序升溫:初始100℃，每分鐘10℃升至220℃，每分鐘8℃升至250℃，保持10 min。理論板數(shù)按α－BHC峰計(jì)算，不低于10，2個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。

2.2.2 溶液制備

對(duì)照品儲(chǔ)備液:精密稱取六六六(BHC)[α－BHC，β－BHC，γ－BHC，δ－BHC]，滴滴涕 (DDT)[PP'－DDE，PP'－DDD，OP'－DDT，PP'－DDT]及五氯硝基苯 (PCNB)農(nóng)藥對(duì)照品適量，用石油醚(60～90℃)分別制成每1 mL約含4～5 μg的溶液，即得。

混合對(duì)照品溶液:精密量取上述各對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，置10 mL量瓶中，用石油醚(60～90℃)稀釋至刻度，即得。各對(duì)照品濃度見表3。

表3 混合對(duì)照品溶液中各對(duì)照品濃度

供試品溶液:取各藥材，于60℃干燥4 h，粉碎成細(xì)粉，取約8 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加水20 mL浸泡過夜，加丙酮40 mL，稱定，超聲處理30 min，放冷，用丙酮補(bǔ)足減失的質(zhì)量，再加氯化鈉約6 g及二氯甲烷30 mL，稱定，超聲處理15 min，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的質(zhì)量，靜置使分層，將有機(jī)相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100 mL具塞錐形瓶中，放置4 h。精密量取35 mL，于40℃水浴減壓濃縮至近干，加少量石油醚(60～90℃)，如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚(60～90℃)溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL具塞刻度離心管中，加石油醚(60～90℃)至5 mL。小心加入硫酸 1 mL，振搖 1 min，離心(3000 r/分)10 min。精密量取上清液2 mL置具刻度的濃縮瓶中，連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，40℃下將溶液濃縮至適量、精密稀釋至1 mL，即得。

2.2.3 測(cè)定法

分別精密吸取供試品溶液和與之相對(duì)應(yīng)濃度的混合對(duì)照品溶液各1 μL，測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中9種農(nóng)藥殘留量。結(jié)果見表4。

3 討論

中藥材中鉛、砷、汞含量過高，會(huì)對(duì)人體健康造成危害[2]，因此我國(guó)在2001年制定的《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》中限定中藥中 Pb≤5 mg/kg，As≤2 mg/kg，Hg≤0.2 mg/kg。從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，產(chǎn)地為磐安的伸筋草中鉛、砷、汞和鋁的含量均低于其他產(chǎn)地，產(chǎn)地對(duì)重金屬含量有影響，同在廣西但海拔高度不同的3批樣品中重復(fù)金屬含量無明顯差異，說明海拔高度可能影響不大。5批伸筋草中藥材中鉛不超過百萬分之五，砷不超過百萬分之二，汞不超過千萬分之五，均符合國(guó)家藥材標(biāo)準(zhǔn)。另外，在重金屬監(jiān)測(cè)時(shí)重點(diǎn)關(guān)注了鋁離子含量，因?yàn)樯旖畈菔卿X礦的標(biāo)志植物，在伸筋草各批藥材中發(fā)現(xiàn)鋁含量都較高，在0.46%～1.05%之間，鋁離子具有神經(jīng)毒性[3]，它可影響神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)，促進(jìn)不溶性β淀粉樣蛋白的形成和聚集，與老年癡呆及一些退行性疾病相關(guān)。藥理試驗(yàn)中，一般采用口服三氯化鋁溶液誘導(dǎo)建立小鼠老年癡呆模型，劑量為10 mg/kg，連續(xù)給藥45 d。世界衛(wèi)生組織研究表明，人體每千克體重對(duì)外允許攝入的鋁不能超過1 mg，伸筋草藥材中0.46% ～1.05%的含鋁量不能忽視;另有資料報(bào)道[4]，伸筋草提取液預(yù)防性治療給藥對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性矽肺有較好療效，伸筋草中的鋁含量值特別是“有機(jī)鋁”的含量值與其抗矽作用密切相關(guān)，因此建議在臨床應(yīng)用中應(yīng)注意鋁元素的影響[5]。

表4 伸筋草藥材中農(nóng)藥殘留量測(cè)定結(jié)果(mg/kg)

國(guó)家《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》中限定BHC≤0.10 mg/kg，DDT≤0.10 mg/kg，PCNB 在《中國(guó)藥典一部》(2005年版)黃芪項(xiàng)下規(guī)定小于0.10 mg/kg。由測(cè)定結(jié)果看，5批伸筋草藥材中PCNB均未檢出，BHC和DDT的含量均符合標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)地及海拔高度對(duì)其影響均不顯著。

[1]鄒桂欣，尤獻(xiàn)民，王光函.HPLC法測(cè)定伸筋草中α－玉柏堿含量[J].中藥材，2010，33(6):934 －936.

[2]李廣誠(chéng)，楊 聘，董克禮.兩種不同老年癡呆模型鼠學(xué)習(xí)記憶能力和探索行為的比較[J].中國(guó)行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2008，17(2):109－110.

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