腦膠質(zhì)瘤患者手術(shù)前后血清內(nèi)皮抑素的表達(dá)及對(duì)比分析

樊曉軍

腦膠質(zhì)瘤患者手術(shù)前后血清內(nèi)皮抑素的表達(dá)及對(duì)比分析

樊曉軍

目的研究手術(shù)前后人腦膠質(zhì)瘤患者血清內(nèi)內(nèi)皮抑素(ES)的表達(dá)程度和臨床意義。方法檢測(cè)術(shù)前術(shù)后腦膠質(zhì)瘤患者體內(nèi)血清中內(nèi)皮抑素的表達(dá)程度，采用ELISE方法檢測(cè)46例患者。于此同時(shí)抽取9例健康人的血清標(biāo)本來(lái)進(jìn)行正常對(duì)照。結(jié)果在健康人的血清內(nèi)，ES平均的含量在19.26ng/ml到22.22ng/ml之間。而神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者在手術(shù)之前體內(nèi)血清中 ES的平均含量可達(dá)21.00ng/ml到32.26ng/ml之間，而且膠質(zhì)瘤的惡性程度越高，患者血清內(nèi)ES的含量也越高。結(jié)論術(shù)后5、6 d之后，膠質(zhì)瘤患者血清內(nèi)ES含量平均在17.38ng/ml到26.16ng/ml之間，比手術(shù)前明顯偏低。結(jié)論內(nèi)皮抑素在血清中的含量可以反映出腫瘤生長(zhǎng)的情況，并且還和腫瘤的惡變程度和患者的預(yù)后有著關(guān)系。

膠質(zhì)瘤;內(nèi)皮抑素;血清

膠質(zhì)瘤是一種含血管豐富的腫瘤，較高的血管化以及血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生則是惡性膠質(zhì)瘤的主要特征［1］。增生的內(nèi)皮細(xì)胞可導(dǎo)致心血管的形成，這與腫瘤的惡性程度臨床復(fù)發(fā)的概率以及生物提的侵襲性都有著密切關(guān)系。所以就有專家提出膠質(zhì)瘤的最適宜治療方案是抗血管生成治療［2］。而目前已經(jīng)知道的抗血管生成因子中作用最強(qiáng)的是內(nèi)皮抑素(ES)，它具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的特異性，能夠有效地阻礙血管的生成以及抑制腫瘤的生長(zhǎng)。通過(guò)采用ELISE方法，本研究檢測(cè)不同惡性程度膠質(zhì)瘤患者體內(nèi)的學(xué)清中Endostatin的含量，并比較術(shù)前和術(shù)后的水平。旨在探討膠質(zhì)瘤的惡變程度和預(yù)后與Endostain的關(guān)系，為基因治療應(yīng)用Endostain奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 取經(jīng)病理證實(shí)并且已經(jīng)手術(shù)切除的腦膠質(zhì)瘤患者46例，女15例，男31例，年齡15～64歲，平均年齡為41.6歲。根據(jù)WHO在1990年制定的腫瘤在中樞神經(jīng)系統(tǒng)分類的標(biāo)準(zhǔn)，可將本次46例患者分為四個(gè)級(jí):7例Ⅰ級(jí);18例Ⅱ級(jí);13例Ⅲ級(jí);8例IV級(jí)。所有的患者都是首次接受手術(shù)切除的腦膠質(zhì)瘤患者，手術(shù)前沒(méi)有就受過(guò)其他的放化療。選取健康人9例作為正常對(duì)照組。

1.2 采集及保存血清標(biāo)本 分別在手術(shù)前一天和手術(shù)后五到六天進(jìn)行血清標(biāo)本采集。抽取清晨空腹時(shí)外周靜脈血并對(duì)3 ml血清進(jìn)行分離，在零下80℃環(huán)境下保存。正常對(duì)照組血清標(biāo)本的采集以及保存方法方式和實(shí)驗(yàn)組相同。

1.3 ES在血清中的檢測(cè)方法 使用的人Endostain ELISA試劑盒產(chǎn)自美國(guó)Rapidbio公司，根據(jù)試劑盒的參考說(shuō)明書進(jìn)行相關(guān)操作，在450nm處用產(chǎn)自瑞士的TECAN酶標(biāo)儀讀取OD值。以縱坐標(biāo)為OD值，橫坐標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)品濃度來(lái)繪制所需要的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)所測(cè)得的血清樣品OD值來(lái)計(jì)算ES濃度。

2 研究結(jié)果

手術(shù)前膠質(zhì)瘤患者血清中ES平均含量為21ng/ml到32.26ng/ml之間，健康人的平均含量在 19.26ng/ml到19.26ng/ml之間，此含量比膠質(zhì)瘤患者的含量明顯偏低，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有非常顯著的差異存在。手術(shù)前膠質(zhì)瘤患者血清中ES的含量比手術(shù)后有非常顯著地下降，認(rèn)為有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

1997年哈佛大學(xué)學(xué)者從小鼠的內(nèi)皮細(xì)胞瘤上分離并提純出一種可以抑制內(nèi)源性血管生長(zhǎng)的抑制劑及內(nèi)皮抑素［3］。這種物質(zhì)具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移、生長(zhǎng)并具有誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡抑制其生長(zhǎng)的作用。內(nèi)皮抑素是一種抑制因子，它是公認(rèn)的目前最有效的血管生長(zhǎng)抑制因子之一。國(guó)際文獻(xiàn)報(bào)告一致認(rèn)為內(nèi)皮抑素與腫瘤的病理特征、腫瘤的惡性程度以及患者的預(yù)后都有著緊密的關(guān)系。但是當(dāng)前膠質(zhì)瘤患者的血清清內(nèi)皮抑素在手術(shù)前手術(shù)后的變化很少有報(bào)道。

本次研究用ELISA方法對(duì)9個(gè)健康人群以及46例患有膠質(zhì)瘤的患者手術(shù)前后血清內(nèi)皮抑素進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)患有膠質(zhì)瘤患者體內(nèi)血清內(nèi)皮抑素含量比正常的健康人要高出許多，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義非常顯著。而且患者血清內(nèi)的內(nèi)皮抑素含量與腫瘤的惡性程度很有關(guān)系，惡性程度越高的患者體內(nèi)的內(nèi)皮抑素水平也越高。并且III到IV級(jí)腫瘤已經(jīng)有了非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。導(dǎo)致這種高表達(dá)的原因可能與膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)過(guò)程有關(guān)系。伴隨著腫瘤細(xì)胞越多、惡性程度越高和血管形成越多，為了抵抗機(jī)體這種血管和腫瘤高度生長(zhǎng)的趨勢(shì)，腫瘤細(xì)胞分泌的蛋白水解酶量會(huì)增加。所以降解腫瘤細(xì)胞核血管基底膜內(nèi)膠原蛋白而產(chǎn)生的內(nèi)皮抑素量也會(huì)隨之增加。

增加的內(nèi)皮抑素會(huì)隨循環(huán)帶到腫瘤所在部位，抑制腫瘤血管和腫瘤的生長(zhǎng)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。上面各項(xiàng)研究結(jié)果都表明血清內(nèi)皮抑素含量反映了腫瘤的活躍程度和生長(zhǎng)情況，可作為診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。有助于疾病的早起診斷和治療。而手術(shù)前后血清中內(nèi)皮抑素的含量變化則可作為手術(shù)療效和預(yù)后的有效觀測(cè)指標(biāo)，更有利于對(duì)疾病的把握。惡性膠質(zhì)瘤在術(shù)后短期內(nèi)容易復(fù)發(fā)，可能由與術(shù)后遺留微小轉(zhuǎn)移灶的生長(zhǎng)有著關(guān)系。而且術(shù)后內(nèi)皮抑素的下降是加速轉(zhuǎn)移灶生長(zhǎng)的原因。最新研究證實(shí)，如果沒(méi)有新的血管張入，如果沒(méi)有血流的灌注，腫瘤的生長(zhǎng)體積一般不會(huì)超過(guò)2 mm3。腫瘤會(huì)進(jìn)入休眠態(tài)。還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮抑素抑制腫瘤的作用在血管形成期要大于血管成熟期。這就要求膠質(zhì)瘤手術(shù)后要立即應(yīng)用內(nèi)皮抑素，這對(duì)手術(shù)的預(yù)后和延遲腫瘤的復(fù)發(fā)都有著積極的治療作用。本實(shí)驗(yàn)研究為內(nèi)皮抑素在膠質(zhì)瘤的應(yīng)用提供了重要的理論依據(jù)。

［1］O'R eilly M S，Boehm T，Shing Y，et al.Endostatin:an endogenous in-hibitor of angiogenesis and tum or grow th．C ell，1997，88 (2):277．

［2］尹嘉，袁紹紀(jì)，張榮偉，等.腺病毒介導(dǎo)鼠內(nèi)皮抑素基因?qū)θ搜軆?nèi)皮細(xì)胞系凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究．中國(guó)微侵襲神經(jīng)外科雜志，2007，12(3):132．

［3］李正軍，莫浩元，張昌卿，等.治療前外周血血管內(nèi)皮抑素濃度與局部晚期鼻咽癌治療后遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系．癌癥，2007，26 (11):1243．

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