凋亡抑制因子Livin在膀胱移行細胞癌組織中的表達及意義

鄭佐柱 鄭雯雯 賀磊磊 鄭國有 (吉林大學第一醫院二部泌尿外科，吉林 長春 3003)

Livin 是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)的新成員〔1～4〕，是一種重要的抗細胞凋亡因子，有抑制細胞凋亡的作用，在多種腫瘤細胞中呈高表達，與腫瘤的發生有密切的關系。本實驗探討Livin與膀胱癌的關系及Livin與膀胱癌病理分級、臨床分期、腫瘤數目、復發的相關性。

1 資料與方法

1.1 資料 選取2005年1月至2006年6月我院泌尿外科52例膀胱移行細胞癌患者。選取標準:無其他系統惡性腫瘤病史，經病理初次確診且成功隨訪，術后使用絲裂霉素膀胱內灌注輔助治療的患者。其中男37例，女15例，平均年齡60.4歲;病理分級采用3級法:G1級11例，G2級23例，G3級18例;臨床分期按TNM分期法:TiS～T123例，T2～T429例;單發28例，多發24例;隨訪5年，復發30例，未復發22例。對照組10例膀胱黏膜組織均采用活檢鉗取自行前列腺電切術患者的膀胱組織，且病理證實均為正常膀胱黏膜組織。

1.2 免疫組化 一抗為兔抗人多克隆抗體，步驟按試劑盒要求進行，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。Livin蛋白表達陽性定位于胞質，在高倍鏡視野下胞質呈現淡黃色至棕褐色為著色陽性。首先根據細胞著色強度進行評分:無著色得0分，淺黃色得1分，棕黃色得2分，棕褐色得3分;然后隨機計數3個高倍鏡視野中染色陽性細胞的百分比(取平均數)，并根據陽性百分比進行評分:0不得分，1% ～10%得1分，11% ～40%得2分，41% ～70%得3分，＞70%得4分;免疫反應陽性評判標準:著色強度得分與染色陽性細胞百分比得分乘積≥1分者為免疫反應陽性。

1.3 統計學方法 應用SPSS16.0統計軟件行χ2檢驗。

2 結果

2.1 正常及膀胱移行細胞癌組織中Livin的表達 10例正常膀胱黏膜組織均無Livin的表達;膀胱移行細胞癌組織中Livin表達陽性者32例(61.5%);兩組差異有統計學意義(P＜0.01)。見圖1。

2.2 Livin在不同病理分級、臨床分期、不同腫瘤數目中的表達情況 G1級組織中Livin陽性表達6例，陽性率54.6%;G2級組織中Livin陽性表達14例，陽性率60.9%，G3級組織中Livin陽性表達12例，陽性率66.7%，Livin在不同病理分級組間的表達差異無統計學意義(P＞0.05)。

TiS～T1期膀胱移行細胞癌組織中Livin陽性表達13例，陽性率56.5%;T2～T4期膀胱移行細胞癌組織中Livin陽性表達19例，陽性率65.5%，Livin在不同臨床分期組間表達差異無統計學意義(P＞0.05)。

單發腫瘤患者中Livin陽性表達17例，陽性率60.7%;多發腫瘤患者中Livin陽性表達15例，陽性率62.5%，Livin表達與膀胱移行細胞癌數目無相關性(P＞0.05)。

2.3 Livin表達與腫瘤復發的關系 52例患者中，有30例復發，復發率57.7%;其中Livin陽性表達的32例患者中有24例復發，復發率75.0%，平均復發時間15.3個月;陰性表達的20例患者中有6例復發，復發率30.0%，平均復發時間30.7個月;兩組之間差異顯著(P＜0.05)，說明Livin與膀胱移行細胞癌復發密切相關。

3 討論

腫瘤的發生是一個漸進式的涉及多級反應和突變的過程，涉及多種基因和基因以外的變化，尤其與癌基因的激活、抑癌基因失活、細胞凋亡抑制等密切相關。細胞凋亡是多基因嚴格控制的過程，而凋亡過程的紊亂與許多疾病的發生有直接或間接的關系，如腫瘤、自身免疫性疾病等。Livin是近年來發現的人類IAPs的新成員，存在同基因不同剪切的兩個異構體，即Livinα和Livinβ，兩種異構體差異微小，僅后者外顯子6缺失54 bp，但兩者的抗凋亡功能及組織表達譜均不同。Livin作為一種重要的抗細胞凋亡因子，能夠抑制細胞的凋亡，在正常細胞和腫瘤細胞中均有表達，且在多數腫瘤細胞中呈高表達，與腫瘤的發生有密切的關系，如消化系腫瘤、血液系腫瘤、呼吸系統腫瘤、泌尿系腫瘤、黑色素瘤、乳腺癌等。

本研究顯示Livin在膀胱移行細胞癌組織中表達的陽性率為61.5%，而在正常組織中無表達，說明Livin與膀胱移行細胞癌的發生發展有密切的關系，可能成為膀胱移行細胞癌早期診斷的一項指標。研究結果還顯示Livin的表達與膀胱移行細胞癌的病理分級、臨床分期、腫瘤數目及是否多發無相關性，但從結果中可以看出TiS～T1期組織中及G1級組織中Livin表達的陽性率均很高，這也說明Livin作為早期診斷膀胱移行細胞癌的一項指標的可行性，這與近年來國內外大部分研究結果一致〔5～7〕。膀胱癌是泌尿外科最常見的惡性腫瘤，而且術后復發率高，凡采用膀胱部分切除術的患者，術后50%以上會在2年內復發〔8〕。本研究表明Livin的表達與膀胱移行細胞癌的復發密切相關。這與Liu等〔5〕、祝興旺等〔6〕的研究結果基本相同。本研究采用隨訪的方法，所得的結果更能直接地反映出Livin的表達與膀胱移行細胞癌復發的關系;同時提示Livin可以作為一個預測膀胱移行細胞癌復發的敏感指標。高江原等〔9〕的研究發現檢測泌尿系惡性腫瘤患者外周血Livin的表達，其敏感性和特異性較高，可作為檢測泌尿系惡性腫瘤轉移的靶基因，指導其治療和預后。易正金等〔10〕的研究發現檢測膀胱癌患者尿液脫落細胞Livin的表達，可作為臨床篩選膀胱癌的理想指標;提示行尿脫落細胞學與外周血Livin的檢測，可以作為膀胱癌早期診斷、轉移的輔助手段，這必將會有很大的發展前景。

鑒于Livin與膀胱癌的密切關系，可以將Livin基因作為膀胱癌的分子治療靶點，這必將會把膀胱癌的治療帶入一個全新時期。

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5 Liu H B，Kong C Z，Zeng Y.Livin may serve as a marker for prognosis of bladder cancer relapse and a target of bladder cancer treatmen〔tJ〕.Urol Oncol，2009;27(3):277-83.

6 祝興旺，張明明，宋永勝.凋亡抑制蛋白Livin在膀胱移行細胞癌中表達及臨床意義〔J〕.中華實用診斷與治療雜志，2009;23(2):121-3.

7 王曉慶，盧 績，陳岐輝，等.Livin基因在淺表性膀胱癌中的表達及其與腫瘤復發的關系〔J〕.中華腔鏡泌尿外科雜志:電子版，2010;4(2):148-51.

8 Wang L，Zhang Q，Liu B，et al.Challenge and promise:roles for Livin in progression and therapy of cancer〔J〕.Mol Cancer Ther，2008;7(12):3661-9.

9 高江原，楊 林，鄭祥奇.Livin mRNA在泌尿系惡性腫瘤外周血中的表達及意義〔J〕.現代醫藥衛生，2007;23(19):2849-50.

10 易正金，楊 林，吳小候，等.膀胱癌患者尿液脫落細胞Livin檢測的臨床意義〔J〕.現代泌尿外科雜志，2007;12(3):179-81.