引種栽培對卷丹水溶性成分的影響＊

侯 嘉 ，連中學 ，杜 弢 ，陳紅剛 ，朱田田 ，林 麗

(1.甘肅中醫學院藥學系，甘肅 蘭州 730000; 2.甘肅省渭源縣種子管理站，甘肅 定西 748299)

中藥百合最早載于《神農本草經》，來源于百合科植物卷丹 Lilium lancifolium Thunb、百合 Lilium brownii F.E.Brown var.viridulum Baker或細葉百合 Lilium pumilum DC.的干燥肉質鱗葉，性味甘寒，有養陰潤肺、清心安神之功，用于治療陰虛久咳、痰中帶血、虛煩驚悸、失眠多夢、精神恍惚等癥[1]。江蘇宜興是藥用百合的傳統產地，其原植物為卷丹 Lilium lancifolium Thunb，商品稱為“宜興百合”。近20年來，卷丹的產地發生了很大變化，目前卷丹的主要產區分布在湖南龍山、安徽霍山及天長等地[2]。中藥百合中含有皂苷、生物堿、多糖、磷脂、蛋白質、氨基酸、維生素、淀粉和大量微量元素等化學成分[3]。其中百合多糖具有增強耐缺氧能力、抗氧化及增強免疫作用，是百合的主要活性成分之一[4]。本研究中分別測定原產地與引種地卷丹中多糖及水溶性浸出物的含量，為評價引種后的卷丹質量提供參考。

1 材料、儀器與試藥

2009年百合課題組赴卷丹的主產區引種，共收集江蘇宜興、安徽霍山縣、湖南龍山等地卷丹樣品19份，經甘肅中醫學院藥學系杜弢副教授鑒定為卷丹 Lilium lancifolium Thunb.。2010年春將收集到的樣品種植于甘肅渭源，2010年秋采收。材料來源見表1。

UV1102型紫外可見分光光度計(上海天美科學儀器有限公司);BS－224S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司);800型離心沉淀器(上海手術器械十廠);SHA－B型數顯恒溫水浴振蕩器(常州榮冠實驗分析儀器廠)。D－葡萄糖對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110833－200904，供含量測定用);其余試劑均為分析純。統計分析均使用SPSS11.5軟件。

表1 卷丹樣品來源

2 方法與結果

2.1 水溶性總多糖的含量測定(蒽酮－濃硫酸法)[5]

2.1.1 溶液配制

精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品適量，置100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，制成0.151 2 mg/mL的對照品貯備液。稱取卷丹樣品約2 g，置250mL圓底燒瓶中，精密加入100mL蒸餾水，加熱回流2 h，冷卻至室溫，過濾，精密吸取濾液 1.0mL，加入無水乙醇 5.0mL，搖勻，離心(3 000 r/min，30 min)，傾去上清液，沉淀加水溶解并轉移至50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.1.2 測定波長選擇

精密吸取對照品溶液和供試品溶液各1.0 mL，分置10 mL棕色具塞試管中，分別加入0.2%蒽酮－硫酸溶液4.0mL，混勻，迅速置冰水浴中冷卻6min后，置100℃水浴中加熱10min，取出，置冰水浴中5min，取出，室溫放置10min后，于400～800 nm范圍內進行光譜掃描。結果表明(圖1)，對照品溶液和供試品溶液的最大吸收波長均為627 nm。

圖1 百合多糖紫外掃描光譜圖

2.1.3 方法學考察

線性關系考察:精密吸取對照品貯備液 0，1.5，3.0，4.5，6.0，7.5，10.0mL，分別置 10mL 容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻。精密吸取上述各溶液1.0mL，置10mL棕色具塞試管中，照2.1.2項下操作，于627 nm波長處測定吸光度。以吸光度(Y)為縱坐標、質量濃度(X)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=35.535X+0.056 1，r=0.994 8(n=7)。結果表明，葡萄糖質量濃度在0.004 536～0.030 24 g/L范圍內與吸光度線性關系良好。

精密度試驗:取質量濃度為0.151 2 g/L的對照品溶液，重復測定6次。結果吸光度的 RSD為1.28%，表明儀器的精密度良好。

穩定性試驗:精密吸取新鮮配制的卷丹供試品溶液1.0mL，置10mL棕色具塞試管中，照2.1.2項下方法操作，分別于0，1.0，1.5，2.0，2.5，3 h 測定。結果吸光度的 RSD 為 1.36% ，表明供試品溶液在3 h內穩定。

重復性試驗:分別稱取卷丹樣品約2 g，精密稱定，平行6份，按2.1.1項下方法制得供試品溶液，按2.1.2項下操作，測定吸光度，計算百合多糖的百分含量。結果平均含量為9.654%，RSD為1.96%，表明方法重復性良好。

加樣回收率試驗:稱取已測定含量的卷丹樣品約0.2 g，精密稱定，加入0.151 2 g/L的葡萄糖對照品溶液適量，按2.1.1項下提取方法共制得6份供試品溶液。將供試品溶液照2.1.2項下操作，測定吸光度并計算回收率。結果見表2。

2.1.4 樣品總多糖含量測定

取不同來源卷丹樣品各2 g，按2.1.1項下方法制得供試品溶液。精密吸取上述各供試品溶液1.0mL，置10mL棕色具塞試管中，照2.1.2項下操作，測定吸光度，按標準曲線法計算不同來源卷丹的多糖百分含量。

表2 加樣回收試驗結果(n=6)

2.2 水溶性浸出物含量測定[1]

將卷丹樣品粉碎，使能通過二號篩，并混合均勻。取供試品約4 g，精密稱定，置250mL的錐形瓶中，精密加水100mL，密塞，冷浸，在振蕩器中振搖6 h，再靜置18 h，用干燥濾器迅速濾過，精密量取續濾液20mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定重量。以干燥品計算供樣品中水溶性浸出物的含量。

2.3 結果

原產地與引種地卷丹中多糖及浸出物含量的測定結果見表3。可見，原產地卷丹浸出物含量高于引種地，但引種地卷丹中多糖含量明顯高于原產地。

表3 原產地與引種地卷丹中多糖及水溶性浸出物的含量(%，n=3)

3 討論

引種到甘肅渭源的卷丹和原產地的成分相比，多糖含量平均增加了約3倍。通過協方差分析(F=70.799，單側 P=0.000)，卷丹引種前后多糖含量的差異有統計學意義。多糖是藥用百合中主要的活性成分，春季降水少、夏季溫度較低、秋季日照短有利于多糖的累積[6]。2010年，甘肅渭源縣4月份平均降雨14.2 mm，8月份最高溫度27.1℃，最低溫度16.0℃，9月份平均日照時數150.5 h(甘肅省渭源縣氣象局)，可見甘肅渭源的氣候環境有利于百合多糖的累積，其多糖含量遠高于原產地，同時浸出物含量也符合《中國藥典》(2010年版)要求。甘肅渭源種植卷丹的水溶性浸出物含量低于原產地，能否在甘肅大面積種植卷丹，還需進一步試驗。

引種到甘肅渭源的卷丹和原產地的相比，浸出物的含量普遍下降。卷丹中浸出物含量與多糖含量無相關性(協方差分析，F=0.474，單側 P=0.496 ＞0.05);可能由于藥材不同的干燥方法造成引種地與原產地卷丹中浸出物含量差異，具體原因還需進一步研究。

卷丹預處理時不宜粉碎過細，否則加熱提取易糊化，且在加熱過程中應避免長時間高溫回流。提取完成后，必須過濾，取濾液，防止藥渣中的淀粉、纖維素等也能被濃硫酸水解成單糖而發生反應，使得結果不準確。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:123，174，附錄 62.

[2]杜 弢，陳紅剛，連中學，等.中藥材百合生產現狀及發展對策[J].中藥材，2011，34(2):165 －168.

[3]曲偉紅，周日寶，童巧珍，等.百合的化學成分研究概況[J].湖南中醫藥導報，2004，10(3):75－76.

[4]胡敏敏，蔡寶昌，張志杰，等.百合多糖的藥效學研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2007，18(2):107 －109.

[5]孫 俊，張科偉，秦昆明，等.不同產地百合多糖的含量測定[J].南京中醫藥大學學報，2010，26(1):65 －66.

[6]馮旭芹，崔秀明，陳中堅，等.三七有效成分與氣候生態因子的相關性分析[J].中國農業氣象，2006，27(1):16－18.