祛脂保肝膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李家樓

(江蘇省連云港市中醫(yī)院，江蘇 連云港 222004)

祛脂保肝方是我院使用多年的療效確切的協(xié)定處方，由青黛、白術(shù)、明礬、玉米須、生山楂、郁金、丹參、澤蘭、澤瀉、醋柴胡、草決明、黨參、滑石、甘草等組方，具有祛濕化痰、疏肝利膽、活血化瘀的功效，用于酒精性或非酒精性單純性脂肪肝及脂肪性肝炎[1]，并具有一定的減肥功效。將該方制備成膠囊劑，具有服用方便、便于保存的優(yōu)點。為保證制劑質(zhì)量及臨床用藥的安全有效，本試驗對該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進行了研究，報道如下。

1 儀器與試藥

STEMI2000－C型立體顯微鏡、Agilent1200型高效液相色譜儀、恒溫水浴箱、電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司分析儀器總廠)、KQ－5007DB型高頻數(shù)據(jù)超聲波清洗器(上海顧村電光儀器廠)。丹參酮ⅡA對照藥品(批號為110766－200417，供含量測定用)、白術(shù)對照藥材(批號為120925－200407，供鑒別用)、靛藍對照品(批號為0716－9403，供鑒別用)、靛玉紅對照品(批號為717－200204，供鑒別用)均由中國藥品生物制品檢定所提供;薄層層析硅膠G(60型)(中國青島海洋化工集團公司);羧甲基纖維素鈉(上?；瘜W(xué)試劑站);大孔吸附樹脂D101(國藥集團化學(xué)試劑有限公司);其他試劑均為分析純;祛脂保肝膠囊(連云港市中醫(yī)院制劑室，批號分別為 20090302，20091017，20100426)。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方與制備工藝

處方:青黛 10 g，明礬 3 g，草決明 15 g，生山楂 15 g，醋柴胡10 g，郁金 10 g，丹參 15 g，澤蘭 15 g，澤瀉 15 g，黨參 10 g，白術(shù)15 g，玉米須 10 g，滑石 10 g，甘草 2.5 g。

制備工藝:以上14味，取丹參10 g、澤瀉10 g、白術(shù)10 g、郁金5 g、明礬粉碎成細粉;剩余丹參、白術(shù)與郁金加80%乙醇回流提取2次，提取液回收乙醇，減壓濃縮至相對密度1.35(80℃)，備用;丹參等藥渣與剩余澤瀉、滑石、青黛、草決明、醋柴胡、澤蘭、黨參、生山楂、玉米須、甘草加水煎煮3次，第1次加8倍水煎煮2 h，第2次加7倍水煎煮1.5 h，第3次1 h，濾過合并3次煎液，濃縮成稠膏，上述2種浸膏與粉末混勻，低溫干燥，粉碎，制粒，裝入膠囊，即得;每粒0.45 g，每瓶60粒。

2.2 定性鑒別

白術(shù)、丹參的顯微鑒別:將內(nèi)容物制成裝片置顯微鏡下觀察，菊糖呈扇形，散在或存在于薄壁細胞中。有網(wǎng)紋及具緣導(dǎo)管，直徑16～56 mm;導(dǎo)管分子短，有的長僅50μm，單穿孔大小不一。纖維多成束，呈長梭形，末端長尖式稍傾斜，直徑18～25μm，壁厚2～4μm，紋孔斜裂縫狀孔溝較稀。木栓細胞黃棕色，表面觀呈類方形或多角形，壁稍厚，彎曲或平直，胞腔內(nèi)常含紅棕色色素，經(jīng)水合氯醛液透化后色素溶解。單個散在或成對的石細胞，近無色或淡黃色，呈類圓形，直徑20～65μm。見圖1。

圖1 顯微鑒別圖

青黛的薄層色譜鑒別[2]138，[3]:取本品內(nèi)容物1 g、不含青黛的陰性樣品1 g，分別加三氯甲烷5mL，充分?jǐn)嚢?，靜置濾過，濾過液即為供試品溶液和陰性對照品溶液;再分別稱取靛玉紅、靛藍對照品5mg，加5mL三氯甲烷溶解成對照品混合溶液。參照薄層色譜法試驗，將上述3種溶液各吸取6μL，分別點于同塊硅膠G薄層板上，用苯－三氯甲烷－丙酮(5∶4∶1)展開，取出，晾干。供試品溶液色譜中，在和2種對照品溶液色譜的相應(yīng)處顯現(xiàn)同樣的藍色和淺紫紅色斑點。陰性對照品溶液沒有斑點[4]。

白術(shù)的薄層色譜鑒別[2]68，[5]:取本品內(nèi)容物0.5 g、不含白術(shù)的陰性樣品0.5 g，分別加乙醚30 mL，在水浴中加熱回流1 h左右，冷卻濾過，濾液水浴蒸干，殘渣用1 mL乙酸乙酯溶解，分別作為供試品溶液及陰性對照品溶液;再稱白術(shù)藥材0.5 g，同上法制成對照品溶液，參照薄層色譜法，將上述新配制的3種溶液各吸取6μL，分別點于同塊硅膠G薄層板上，用石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(50∶1)展開，取出，晾干，以5%香草醛硫酸溶液為顯色劑，酒精燈加熱至斑點清晰。供試品溶液色譜中，與對照品(白術(shù))溶液色譜位置相同處，顯現(xiàn)的斑點顏色及位置相同，并有一處對應(yīng)桃紅色主斑點(蒼術(shù)酮);陰性對照品溶液相同位置無斑點。

丹參的薄層色譜鑒別[2]52:取本品內(nèi)容物1 g，不含丹參的陰性樣品1 g，分別加乙醚約10mL，振搖充分后靜置1 h左右，濾液蒸干，用乙酸乙酯1mL溶解殘渣，殘渣溶液作為供試品溶液及陰性對照品溶液;另稱取丹參酮ⅡA對照品約2mg，用1mL乙酸乙酯溶解，作為對照品溶液。參照薄層色譜法，各吸取3種溶液5μL。分別點于同塊硅膠G薄層板，用苯－乙酸乙酯(19∶1)展開。供試品溶液色譜中，和對照品溶液色譜在相同的位置上顯暗紅色斑點，陰性對照品溶液無此斑點。

2.3 丹參酮ⅡA含量測定[6－7]

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠;流動相:甲醇－水(75∶25);檢測波長:270 nm。丹參酮ⅡA峰計算理論板數(shù)應(yīng)不低于2 000[9]。高效液相色譜圖見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

2.3.2 溶液制備

用分析天平精密稱取丹參酮ⅡA對照品10.346mg，移于50mL棕色量瓶中，緩慢用甲醇加至刻度，搖勻;再從中精密吸取2mL，移于25mL棕色量瓶中，用甲醇加至刻度，搖勻，即為對照品溶液。取約3 g祛脂保肝膠囊或不含丹參的陰性樣品內(nèi)容物，研細后取出精密稱定，移于具塞錐形瓶中，再精密放甲醇50mL，精密稱定質(zhì)量，水浴加熱回流1 h左右，冷卻至室溫，用甲醇補充減失的質(zhì)量，輕輕搖勻，濾過，濾液即為供試品溶液或陰性對照品溶液[8]。

2.3.3 方法學(xué)考察

參照2.3.2項下方法制備對照品溶液，實際對照品溶液濃度計算為 16.554 μg/mL，精密吸取該溶液，分別進樣 5，10，15，20，25 μL，即相當(dāng)于丹參酮ⅡA0.082 76，0.166 11，0.248 25，0.330 68，0.413 82 μg，測定峰面積，以丹參酮ⅡA進樣量為橫坐標(biāo)(X)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程 Y=6 141.8X－11.989(r=0.999 3，n=5)。

精密度試驗:取質(zhì)量濃度為16.554μg/mL的丹參酮ⅡA對照品溶液10μL依法，連續(xù)進樣6次，測定其峰面積。結(jié)果 RSD=0.22%，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗:取裝量差異項下的本品，研細，取約1 g(約相當(dāng)于原藥材的3 g)，精密稱定，置圓底燒瓶中，依法制備溶液，平行試驗5份，進樣量10μL，測定其丹參酮ⅡA的含量。結(jié)果 RSD=0.78%，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗:取供試品溶液適量，每隔2 h進樣10μL測定峰面積值。結(jié)果的 RSD=0.68%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗:精密吸取丹參酮ⅡA含量為0.38mg/g的樣品，依法制備溶液，共6份，每份約1 g，分別置圓底燒瓶中，再精密加入質(zhì)量濃度為16.554μg/mL的丹參酮ⅡA對照品溶液1mL，按供試品溶液制備方法制得供試液(最后定容至25 mL)，搖勻，分別取樣10μL注入液相色譜儀中，條件同上，測量丹參酮ⅡA的含量。結(jié)果見表1。

表1 丹參酮ⅡA加樣回收試驗結(jié)果(n=5)

2.3.4 樣品含量測定

分別取3批樣品，依法制備溶液，分別測定含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

祛脂保肝膠囊中以丹參祛瘀活血通絡(luò)為君藥;草決明潤腸通便，澤瀉、白術(shù)、黨參健脾益氣、燥濕利水，玉米須利水消腫、平肝利膽，為臣藥;澤蘭活血化瘀，山楂、郁金行氣散瘀，青黛、明礬、醋柴胡、甘草、滑石清熱解毒，共為佐藥。諸藥合用，祛濕化痰，疏肝利膽，活血化瘀，療效顯著。制成膠囊，從而減少了服用劑量、掩蓋藥物不良氣味、提高了藥物生物利用度，同時利于保存。

采用薄層色譜法對青黛、白術(shù)、丹參進行定性鑒別，以標(biāo)準(zhǔn)品作為對照，具有快速簡便的特點。

在祛脂保肝膠囊的定量質(zhì)量控制中，采用高效液相色譜法對祛脂保肝膠囊所含的丹參酮ⅡA進行了含量測定，并采用甲醇回流提取溶解法，提取溶解有效成分[10]。結(jié)果表明，方法比較穩(wěn)定、回收率也較高，并且具有一定專屬性。

本試驗對祛脂保肝膠囊中主要藥物青黛、白術(shù)、丹參采用薄層色譜法進行了定性鑒別，并進行了陰性對照;用高效液相色譜法對丹參中的丹參酮ⅡA進行了含量測定。綜上所述，本試驗所使用的定性和定量測定法方法簡便、有較強專屬性，可以作為祛脂保肝膠囊的質(zhì)量控制方法，從而保證祛脂保肝膠囊臨床上安全有效。

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