高效液相色譜法測定小兒熱速清糖漿中黃芩苷含量

李延雪，孫 菲，蘇玉娟

(黑龍江省雞西市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江 雞西 158100)

小兒熱速清糖漿由柴胡、黃芩、葛根、水牛角、金銀花、板藍根、連翹、大黃8味藥材經適宜加工方法制成的中藥口服制劑，具有清熱解毒、瀉火利咽的功效，用于小兒外感高熱、頭痛、咽喉腫痛、鼻塞、流涕、咳嗽、大便干結，收載于國家食品藥品監督管理局國家藥品標準，標準號WS3－172(Z－172)－2009Z。黃芩是處方中的君藥，其中的有效成分黃酮化合物之一黃芩苷具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化等多種生物活性[1]。原質量標準中無黃芩苷的含量測定項，筆者參考文獻[2－10]采用高效液相色譜法測定了黃芩苷的含量，樣品處理方法簡單，分離效果好，方法快速準確，重復性好，可更好地控制該制劑的質量。現報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－2010A型高效液相色譜儀(包括LC－2010型紫外檢測器，LC solution色譜工作站);AG285型電子分析天平;島津UV－2550型紫外分光光度計。黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110715－200815，含量95.2%);小兒熱速清糖漿(批號分別為20110901，20110902，20110903);D101型大孔吸附樹脂(天津市匯達化工有限公司，粒度為16～60目);水為純化水，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Extend C18柱(250mm ×4.6mm，5μm);流動相:甲醇 －水 －磷酸(47∶53∶0.2);流速:0.9mL/min;柱溫:30℃;對照品進樣量:10μL;供試品進樣量:5μL;檢測波長:276 nm。理論板數按黃芩苷峰計算不低于6 000。

2.2 溶液制備

精密稱取黃芩苷對照品適量，加50%甲醇適量，置熱水浴中振搖使溶解，制成每1 mL中含黃芩苷對照品26.22μg的溶液，即得對照品溶液。精密量取本品0.5mL，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內徑為1.5 cm，柱高 10 cm)，以 1.5mL/min流速用水70mL洗脫，繼用40%乙醇洗脫，棄去8mL洗脫液，收集續洗脫液，置50mL量瓶中至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按處方量并以相同工藝制備不含黃芩的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:取2.2項下3種溶液，按2.1項下色譜條件測定。結果陰性對照品溶液色譜圖中，在黃芩苷色譜峰相應位置上無干擾峰出現，表明陰性樣品的其他組分對黃芩苷的測定無干擾(見圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密吸取上述含黃芩苷對照品的溶液2，5，10，15，20，25，30 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對照品進樣質量濃度為橫坐標(X)、峰面積為縱坐標(Y)進行回歸分析，得回歸方程 Y=4.049 8×104X －4.021 3×103，r=1.000 0(n=7)。結果表明黃芩苷質量濃度在5.245～78.68μg/mL范圍內與峰面積具有良好的線性關系。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10μL，連續進樣6次，以峰面積計算。結果黃芩苷的平均峰面積值為1 054 809，RSD=0.28%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重現性試驗:分別精密吸取同一批樣品(批號為20110901)6份，按供試品溶液的制備方法制備，測定含量。結果黃芩苷的平均含量為 6.12 g/L，RSD=0.74%(n=6)，表明方法重現性良好。

穩定性試驗:精密吸取供試品溶液(批號為20110901)，在0，2，4，6，8，12，24 h 時分別進樣 5 μL，記錄峰面積。結果黃芩苷峰面積的平均值為1 210 984，RSD=1.05%(n=7)，表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

加樣回收試驗:取已知含量的同批樣品(批號為20110901，黃芩苷含量為6.12 g/L)6份，每份精密量取本品0.25mL，以3份為1組，共3組，每組分別精密加入黃芩苷對照品溶液(0.153 0 g/L)8，10，12mL，按供試品溶液的制備方法制備及上述色譜條件測定，計算回收率。結果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗結果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，按2.2項下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積，用外標法以峰面積計算。結果批號為20110901，20110902，20110903的樣品中黃芩苷含量分別為6.12，6.23，6.18 g/L。

3 討論

取黃芩苷對照品溶液，在200～300 nm波長范圍內進行光譜掃描。結果黃芩苷在276 nm波長處有最大吸收，故選擇276 nm作為測定波長。

曾采用不同比例的甲醇－水、甲醇－水－冰醋酸系統和乙腈－水－磷酸系統作為流動相進行分離，結果表明，采用甲醇－水－磷酸(47∶53∶0.2)作為流動相時，黃芩苷色譜峰峰形較好，基本無雜質干擾，保留時間適宜，基線較穩，可以得到很好的分離效果。

樣品中含有較多的糖，干擾較大，試驗研究中，曾采用50%甲醇加熱回流提取、液液萃取、乙醇沉淀等方法均不能去除糖的干擾。后將樣品通過D101型大孔吸附樹脂柱，用水洗去糖，再用40%乙醇洗脫，可完全排除糖的干擾，且方法簡便，重復性好。

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