氣相色譜法測定滴耳油中薄荷腦和龍腦含量

鐘慧敏，黎德源

(1.廣東恒健制藥有限公司，廣東 江門 529040; 2.廣東藥學院，廣東 廣州 510006)

滴耳油質(zhì)量標準收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑(第一冊)》[1]，由黃柏、五倍子、薄荷油、冰片、核桃油組方，具有清熱解毒、消腫止痛的功效，主要治療因肝經(jīng)濕熱上攻引起的耳鳴耳聾[2]、耳內(nèi)生瘡、腫痛刺癢、破流膿水、久不收斂等耳疾。然而該標準項下無含量測定，不利于控制產(chǎn)品質(zhì)量。筆者采用氣相色譜法[3]對制劑中的薄荷腦、龍腦進行含量測定，方法簡便、準確可靠，能有效地控制藥品質(zhì)量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

GC－2014C型氣相色譜儀(日本島津，DFID－氫火焰離子化檢測器，CS－Light色譜工作站);Sartorius CPA26P型電子分析天平。薄荷腦對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110728－200506);龍腦對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110881－200706);滴耳油(廣東恒健制藥有限公司，批號為070702，080401，081001);其他試劑均分析純，水為去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:玻璃填充柱，以聚乙二醇－20M為固定相，涂布濃度為10%;檢測器:DFID，進樣口溫度:180℃，柱溫:140℃，檢測器溫度:180 ℃;載氣:氮氣(高純);流速:50mL/min;分流比:10 ∶1;進樣量:1μL。在此條件下，薄荷腦、龍腦和內(nèi)標峰具有較好的分離度，分離度應大于1.5;薄荷腦、龍腦的理論板數(shù)均應不低于2000。見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取水楊酸甲酯0.2 g，置100mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，制成每1mL含2mg的溶液，作為內(nèi)標溶液。精密稱取薄荷腦對照品12mg，置100mL容量瓶中，加內(nèi)標溶液溶解并稀釋至刻度，即得薄荷腦對照品溶液。另精密稱取龍腦對照品350mg，置100mL容量瓶中，加內(nèi)標溶液溶解并稀釋至刻度，即得龍腦對照品溶液。取滴耳油樣品0.5 g，精密稱定，置10mL容量瓶中，加內(nèi)標液定容至刻度，密塞，超聲處理(功率250W，頻率50 kHz)30min，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密稱取薄荷腦對照品30mg，置25mL容量瓶中，加內(nèi)標溶液適量使其溶解后稀釋至刻度，搖勻，制得薄荷腦對照品貯備液;另取龍腦對照品175mg，置10mL容量瓶中，并精密量取薄荷腦對照品貯備液5mL加入其中，以內(nèi)標溶液稀釋后定容至刻度，搖勻;精密量取該溶液 0.5，1.5，2.5，3.5，4.5 mL，分別置10mL容量瓶中，加內(nèi)標溶液稀釋至刻度，搖勻。制得薄荷腦質(zhì)量濃度為 0.03～0.27 g/L及含龍腦質(zhì)量濃度為 0.175～0.875 g/L的混合對照品溶液。在上述色譜條件下，依次進樣1μL，記錄色譜峰面積。以對照品與內(nèi)標物的峰面積比為縱坐標(Y)，對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(X)繪制標準曲線，得薄荷腦回歸方程Y=0.666X+0.004(r=0.999); 龍 腦 回 歸 方 程 Y=0.514X+0.109(r=0.999)。結(jié)果表明，薄荷腦質(zhì)量濃度線性范圍為0.03 ～0.27 g/L，龍腦質(zhì)量濃度線性范圍為 0.175 ～0.875 g/L。

精密度試驗和校正因子的測定:分別取薄荷腦對照品溶液和龍腦對照品溶液，在同一色譜條件下，重復進樣5次，進樣1μL，考察精密度。結(jié)果薄荷腦的 RSD為0.86%(n=5)，平均校正因子為 0.679 1;龍腦的 RSD為 0.58%(n=5)，平均校正因子為0.685 1。可見，方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液1μL，在同一色譜條件下，分別在 0，2，4，8，16 h時進樣測定。分別計算薄荷腦和龍腦峰面積的 RSD，薄荷腦為 0.99%(n=5)，龍腦為 0.68%(n=5)。結(jié)果表明，供試品在16 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復性試驗:取批號為070702的樣品5份，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果薄荷腦含量的 RSD為0.39%(n=5);龍腦含量的 RSD為0.51%(n=5)。可見，本方法的重復性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品適量(批號為081001)，各6份，分別精密加入一定量的薄荷腦、龍腦對照品，依法制備供試品溶液。按擬訂的色譜條件進行測定，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

依法測定了批號分別為070702，080401，081001的3批樣品，結(jié)果薄荷腦含量分別為 0.24%，0.25%，0.25%，龍腦含量分別為 5.46%，5.57%，5.50%。

3 討論

由于處方中含有黃柏、五倍子等藥材粉末，可能對玻璃填充柱造成損耗，因此本試驗采用超聲處理樣品。經(jīng)超聲處理后，既可消除對填充柱的損耗，還可使有效成分提取完全。筆者曾考慮以無水乙醇作為溶劑，但反復試驗發(fā)現(xiàn)，乙酸乙酯作溶劑提取龍腦更充分，且分離度和對稱性較無水乙醇好，故最終選用乙酸乙酯作為溶劑。方法學研究結(jié)果表明，本法操作簡便、結(jié)果準確、重復性好，能夠有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。

[1]WS3－B－0165－89，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑(第一冊)[S].

[2]曹衛(wèi)華.“耳濃凈”滴耳油治膿耳[J].湖北中醫(yī)雜志，1997，19(3):56.

[3]韓海紅.氣相色譜法測定珍珠明目滴眼液中龍腦含量[J].中國藥業(yè)，2007，16(14):37.